COLORAÇÃO DE GRAM

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COLORAÇÃO DE GRAM 
 
Uma etapa crucial no processo de identificação do agente etiológico é a caracterização 
morfológica do micro-organismo. Etapa que embasa a escolha de quais procedimentos 
serão adequados para a realização de provas bioquímicas e/ou a utilização de meios de 
cultura. Entretanto, os micro-organismos são incolores por natureza, sendo necessários 
métodos de coloração para auxiliar na visualização da morfologia bacteriana. 
Devido à necessidade da visualização e diferenciação das bactérias, o método 
desenvolvido em 1884 pelo médico dinamarquês Hans Christian Joachim Gram, permitiu 
essa coloração (método de Gram) que está sendo utilizada até os dias atuais como método 
básico de triagem e confirmação desses micro-organismos. 
A técnica de coloração de Gram é uma técnica de coloração diferencial, pois reage de 
maneira diferente nos distintos tipos de bactérias, com base na estrutura da parede celular. 
A parede celular das bactérias Gram positivas é composta por uma espessa camada de 
peptideoglicanos (proteínas + carboidratos). Algumas também possuem uma camada de 
ácido teicóico externa à camada de peptideoglicanos. O Lugol (iodo-iodeto de potássio), 
utilizado no método de coloração de Gram, fixa o cristal violeta a este tipo de parede celular, 
corando as bactérias em roxo. 
As bactérias que possuem uma camada delgada de peptidoglicano (1 a 3 nm), seguida por 
uma segunda camada denominada membrana externa (7 a 8 nm), não possuem a 
capacidade de reter o complexo primário de cristal violeta/lugol após o tratamento com o 
álcool. Contudo, para a visualização da morfologia bacteriana, essas bactérias com uma 
fina parede celular são contrastadas com Safranina ou fucsina e são classificadas como 
bactérias Gram-negativas. 
As colorações Gram-positiva e Gram-negativa de bactérias permitem a visualização da 
morfologia geral das células bacterianas, promovendo a classificação desses 
micro-organismos em bastonetes e em cocos, por exemplo. Essa classificação é importante 
para a taxonomia dos micro-organismos, além de auxiliar na avaliação da pureza da cultura 
e no diagnóstico preliminar de pacientes. Contudo, é importante salientar que alterações no 
procedimento (técnica e reagentes) de coloração podem ocasionar prejuízo no resultado da 
microscopia. 
NSTRUÇÕES GERAIS 
 
1. Neste experimento, você irá executar os procedimentos adequados para 
promover experimentos de microbiologia. Dessa forma, você poderá 
analisar o resultado encontrado, podendo fazer a classificação da 
bactéria presente nesse experimento. 
http://srd.yahoo.com/S=2766679:WS1/R=2/K=hans%2Bgram%2Bbiography/TID=DEFL_12:testg/H=0/T=1049484443/F=a2d9f9f74d25486443817760c038466f/*http:/www.whonamedit.com/doctor.cfm/696.html
2. Utilize a seção “Recomendações de Acesso” para melhor aproveitamento 
da experiência virtual e para respostas às perguntas frequentes a respeito 
do Laboratório Virtual. 
3. Caso não saiba como manipular o Laboratório Virtual, utilize o “Tutorial” 
presente neste Roteiro. 
4. Caso já possua familiaridade com o Laboratório Virtual, você encontrará as 
instruções para realização desta prática na subseção “Procedimentos”. 
5.Ao finalizar o experimento, responda aos questionamentos da seção 
“Avaliação dos Resultados”. 
RECOMENDAÇÕES DE ACESSO 
 
DICAS DE DESEMPENHO 
Para otimizar a sua experiência no acesso aos laboratórios virtuais, siga as seguintes dicas de 
desempenho: 
● Feche outros aplicativos e abas: Certifique-se de fechar quaisquer outros aplicativos ou 
abas que possam estar consumindo recursos do seu computador, garantindo um 
desempenho mais eficiente. 
● Navegador Mozilla Firefox: Recomendamos o uso do navegador Mozilla Firefox, 
conhecido por seu baixo consumo de recursos em comparação a outros navegadores, 
proporcionando uma navegação mais fluida. 
● Aceleração de hardware: Experimente habilitar ou desabilitar a aceleração de hardware 
no seu navegador para otimizar o desempenho durante o acesso aos laboratórios 
virtuais. 
● Requisitos mínimos do sistema: Certifique-se de que seu computador atenda aos 
requisitos mínimos para acessar os laboratórios virtuais. Essa informação está 
disponível em nossa Central de Suporte. 
● Monitoramento do sistema: Utilize o Gerenciador de Tarefas (Ctrl + Shift + Esc) para 
verificar o uso do disco, memória e CPU. Se estiverem em 100%, considere fechar 
outros aplicativos ou reiniciar a máquina para otimizar o desempenho. 
● Teste de velocidade de internet: Antes de acessar, realize um teste de velocidade de 
internet para garantir uma conexão estável e rápida durante o uso dos laboratórios 
virtuais. 
● Atualizações do navegador e sistema operacional: Mantenha seu navegador e sistema 
operacional atualizados para garantir compatibilidade e segurança durante o acesso aos 
laboratórios. 
https://www.mozilla.org/pt-BR/firefox/new/
https://suporte-virtual.algetec.com.br/
MATERIAIS NECESSÁRIOS 
 
· Acendedor; 
· Inoculadora; 
· Álcool Etílico; 
· Bico de Bunsen; 
· Fucsina; 
· Lâminas; 
· Lugol; 
· Microscópio; 
· Óleo de imersão; 
· Placa de cultura; 
· Pinça metálica; 
· Pissetas; 
· Soro fisiológico. 
 
PROCEDIMENTOS 
 
1. SEGURANÇA DO EXPERIMENTO 
 
Coloque os equipamentos de proteção individual localizados no “Armário de EPIs”. 
Nesse experimento, é obrigatório o uso de jaleco, luvas, óculos de proteção e 
máscara. 
 
2. PREPARANDO A AMOSTRA 
 
Goteje o soro fisiológico na lâmina. Feito isso, ligue o bico de Bunsen abrindo a 
válvula de gás e, com o acendedor, acenda a chama e ajuste até que se torne azul. 
Utilizando a alça inoculadora, perto ao bico de Bunsen, retire uma pequena porção 
da amostra biológica que será examinada e coloque-a na lâmina. Depois, passe a 
lâmina sob a chama para fixar o material. 
 
3. CORANDO A LÂMINA 
 
Mova a lâmina para a pia. Em seguida, cubra a lâmina com violeta de genciana por 
1 minuto. Depois, enxague em água corrente. Cubra a lâmina com lugol, também 
por 1 minuto e, em seguida, lave a lâmina em água corrente. Molhe a lâmina com 
álcool por aproximadamente 10 segundos e enxague em água corrente. Por fim, 
cubra a lâmina com fucsina por 30 segundos e lave em água corrente. 
 
4. REALIZANDO A LEITURA 
 
Mova a lâmina para o microscópio. Execute todos os ajustes necessários para 
visualização. Selecione a objetiva de 100x e goteje o óleo de imersão sobre a 
lâmina. Observe o resultado através da lente ocular. 
Anote as suas observações. Retire a lâmina do microscópio e desligue. 
 
5. REPETINDO A LEITURA 
 
Realize os procedimentos anteriores para as lâminas 2. 
 
6. AVALIANDO OS RESULTADOS 
 
Siga para a seção “Avaliação dos Resultados” e responda de acordo com o que foi 
observado nos experimentos, associando também com os conhecimentos 
aprendidos sobre o tema. 
 
 
 
AVALIAÇÃO DOS RESULTADOS 
 
 
1. Analisando a coloração obtida na primeira e na segunda lâmina, é 
possível determinar se o resultado é Gram positivo ou negativo? Caso 
seja possível, classifique justificando a resposta. 
 
 
 
2. Qual objetivo de realizar o experimento em 2 lâminas? O que se espera 
observar? 
 
 
 
 
TUTORIAL 
 
 
1. SEGURANÇA DO EXPERIMENTO 
 
Visualize os equipamentos de proteção individual clicando com o botão esquerdo do 
mouse na câmera com o nome “Armário de EPIs” localizada dentro do painel de 
visualização no canto superior esquerdo da tela. 
 
 
 
Abra o armário clicando com o botão esquerdo do mouse sobre as portas. 
 
 
 
Selecione os EPIs necessários para a realização do ensaio clicando com o botão 
esquerdo do mouse sobre eles. Nesse experimento, é obrigatório o uso de jaleco, 
luvas, óculos de proteção e máscara. 
 
 
 
Feche as portas do armário clicando com o botão esquerdo do mouse sobre as abas da 
porta. 
 
 
 
Visualize a bancada clicando com obotão esquerdo do mouse na câmera com o nome 
“Geral” ou através do atalho do teclado “Alt+1”. 
 
 
 
2. PREPARANDO A AMOSTRA 
 
Goteje o soro fisiológico na lâmina clicando com o botão direito do mouse sobre o 
contagotas e selecione a opção “Lâmina 1”. 
 
 
 
Goteje o soro fisiológico na lâmina clicando com o botão direito do mouse sobre o 
contagotas e selecione a opção “Lâmina 2”. 
 
 
 
Ligue o bico de Bunsen clicando com o botão esquerdo do mouse na válvula. 
 
 
Ajuste o bico de Bunsen clicando com o botão esquerdo do mouse no bico de Bunsen. 
 
 
Configure a intensidade da chama clicando com o botão esquerdo do mouse sobre os 
parâmetros exibidos no menu esquerdo da tela. 
 
 
 
Acenda o bico de Bunsen clicando com o botão esquerdo do mouse no acendedor. 
 
 
Esterilize a alça inoculadora clicando com o botão direito do mouse sobre a inoculadora e 
selecione a opção “Esterilizar”. 
 
 
Colete a amostra biológica clicando com o botão direito do mouse sobre a alça inoculadora 
e selecione a opção “Colocar amostra na lâmina 1". 
 
 
 
Esterilize a alça inoculadora clicando com o botão direito do mouse na alça e selecione a 
opção “Esterilizar”. 
 
 
 
Colete a amostra biológica clicando com o botão direito do mouse sobre a alça inoculadora 
e selecione a opção “Colocar amostra na lâmina 2". 
 
 
 
Esterilize a alça inoculadora clicando com o botão direito do mouse na alça e selecione a 
opção “Esterilizar”. 
 
 
 
Realize a fixação da amostra na lâmina 1 clicando com o botão direito do mouse sobre a 
lâmina 1 e selecione a opção “Mover para o bico de Bunsen". 
 
 
 
Realize a fixação da amostra na lâmina 2 clicando com o botão direito do mouse sobre a 
lâmina 2 e selecione a opção “Mover para o bico de Bunsen". 
 
 
 
Visualize a bancada clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome 
“Geral”. 
 
 
 
Desligue o bico de bunsen clicando com o botão esquerdo do mouse na válvula. 
 
 
 
Visualize as lâminas clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome 
“Lâminas”. 
 
 
 
Mova a lâmina 1 para a pia clicando com o botão direito do mouse sobre ela e selecione a 
opção “Colocar no suporte”. 
 
 
3. CORANDO A LÂMINA 
Mova a pisseta com o cristal violeta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a 
pisseta contendo o corante violenta-de-genciana. 
 
 
 
Despeje a violeta-de-genciana pressionando o botão esquerdo do mouse sobre a pisseta. 
 
 
 
Aguarde a fixação do corante na lâmina por 1 minuto. O cronômetro aparecerá na tela para 
auxiliar o processo. Avance a escala de tempo para acelerar o processo pressionando e 
arrastando com o botão esquerdo do mouse sobre o local indicado. 
 
 
 
Lave a lâmina com água corrente clicando com o botão direito do mouse sobre a lâmina e 
selecione a opção “Lavar em água corrente”. 
 
 
 
Mova a pisseta com o lugol clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a pisseta 
contendo o lugol. 
 
 
 
Despeje o lugol pressionando com o botão esquerdo do mouse sobre a pisseta. 
 
 
 
Aguarde a fixação do corante na lâmina por 1 minuto. Avance a escala de tempo para 
acelerar o processo pressionando e arrastando com o botão esquerdo do mouse sobre o 
local indicado. 
 
 
 
Lave a lâmina com água corrente clicando com o botão direito do mouse sobre a lâmina e 
selecione a opção “Lavar em água corrente”. 
 
 
 
Mova a pisseta com o álcool clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a pisseta. 
 
 
 
Despeje o álcool na lâmina pressionando com o botão esquerdo do mouse sobre a pisseta. 
 
 
 
Lave a lâmina com água corrente clicando com o botão direito do mouse sobre a lâmina e 
selecione a opção “Lavar em água corrente”. 
 
 
 
Mova a pisseta com a fucsina clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a pisseta 
contendo o corante. 
 
 
 
Despeje a fuccina pressionando com o botão esquerdo do mouse sobre a pisseta. 
 
 
 
Aguarde a fixação do corante na lâmina por 20 segundos. Avance a escala de tempo para 
acelerar o processo pressionando e arrastando com o botão esquerdo do mouse sobre o 
local indicado. 
 
 
 
Lave a lâmina com água corrente clicando com o botão direito do mouse sobre a lâmina e 
selecione a opção “Lavar em água corrente”. 
 
 
 
Mova a lâmina para a mesa clicando com o botão direito do mouse sobre a lâmina e 
selecione a opção “Colocar na mesa”. 
 
 
 
Realize os procedimentos anteriores da lâmina 1, agora na lâmina 2. 
 
 
 
4. REALIZANDO A LEITURA 
 
Mova a lâmina 1 clicando com o botão direito do mouse sobre a lâmina 1 e selecione a 
opção “Mover para o microscópio". 
 
 
 
Ligue o microscópio clicando com o botão esquerdo do mouse no interruptor localizado na 
base do equipamento. 
 
 
 
Se preferir, manuseie o microscópio usando as setas, clique com o botão esquerdo do 
mouse no canto inferior esquerdo em "Usar microscópio com as setas". 
 
 
 
Para visualizar as partes do microscópio com os nomes, clique com o botão esquerdo do 
mouse no canto inferior esquerdo em "Habilitar nomes". 
 
 
 
Goteje o óleo de imersão clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o conta gotas. 
 
 
 
Movimente as lentes objetivas pressionando com o botão esquerdo do mouse sobre o 
revólver e movimentando o cursor à direita ou à esquerda. Visualize a lâmina na objetiva de 
100x. 
 
 
 
Visualize a lâmina clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o ícone “Ver ocular” no 
canto superior direito da tela. 
 
 
 
Realize o ajuste do foco pressionando com o botão esquerdo do mouse sobre o parafuso 
macrométrico e movimentando o cursor à direita ou à esquerda. 
 
 
 
Se for necessário um ajuste mais apurado do foco, gire o botão micrométrico pressionando 
o botão esquerdo do mouse sobre ele e movimentando o cursor à direita ou à esquerda. 
 
 
 
Para movimentar a lâmina à frente ou para trás, gire a peça superior do charriot 
pressionando com o botão esquerdo do mouse sobre o charriot e movimentando o cursor à 
direita ou à esquerda. 
 
 
 
Se necessário, efetua as configurações de posicionamento. Lembre-se que, para 
movimentação, deve-se clicar com o botão esquerdo do mouse sobre a área desejada e 
movimentar o cursor do mouse para direita ou esquerda. 
 
 
 
Retire a lâmina do microscópio clicando com o botão esquerdo do mouse na lâmina de 
vidro. 
 
 
 
5. REPETINDO A LEITURA 
 
Realize os processos realizados anteriormente com a lâmina 2. 
 
 
 
Visualize o microscópio clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome 
“Microscópio”. 
 
 
 
Desligue o microscópio clicando com o botão esquerdo do mouse no interruptor localizado 
na base do equipamento. 
 
 
 
6. AVALIANDO OS RESULTADOS 
 
Siga para a seção “Avaliação dos Resultados” e responda de acordo com o que foi 
observado nos experimentos, associando também com os conhecimentos aprendidos sobre 
o tema. 
 
	NSTRUÇÕES GERAIS 
	RECOMENDAÇÕES DE ACESSO 
	DICAS DE DESEMPENHO 
	MATERIAIS NECESSÁRIOS 
	PROCEDIMENTOS 
	1. SEGURANÇA DO EXPERIMENTO 
	2. PREPARANDO A AMOSTRA 
	3. CORANDO A LÂMINA 
	4. REALIZANDO A LEITURA 
	5. REPETINDO A LEITURA 
	6. AVALIANDO OS RESULTADOS 
	AVALIAÇÃO DOS RESULTADOS 
	TUTORIAL 
	1. SEGURANÇA DO EXPERIMENTO 
	2. PREPARANDO A AMOSTRA 
	3. CORANDO A LÂMINA 
	4. REALIZANDO A LEITURA 
	5. REPETINDO A LEITURA 
	6. AVALIANDO OS RESULTADOS