RELATÓRIO ANÁLISE AMBIENTAL

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RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS 
ENSINO DIGITAL 
	
RELATÓRIO 02
	
	
	DATA:
______/______/______
RELATÓRIO DE PRÁTICA 01
Milena Pelicer Ribeiro
74010874
RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS: Análise Ambiental 
DADOS DO(A) ALUNO(A):
	NOME: Milena Pelicer Ribeiro
	MATRÍCULA:47010874
	CURSO: Biomedicina
	POLO: UNIFAEL Machadinho- RS
	PROFESSOR(A) ORIENTADOR(A): Rosilma de Oliveira
	ORIENTAÇÕES GERAIS: 
· O relatório deve ser elaborado individualmente e deve ser escrito de forma clara e
· concisa;
· O relatório deve conter apenas 01 (uma) lauda por tema;
· Fonte: Arial ou Times New Roman (Normal e Justificado);
· Tamanho: 12;
Margens: Superior 3 cm; Inferior: 2 cm; Esquerda: 3 cm; Direita: 2 cm;
· Espaçamento entre linhas: simples;
· Título: Arial ou Times New Roman (Negrito e Centralizado). 
		TEMA DE AULA: TUBULOS MULTIPLOS- TESTE PRESUNTIVO E CONFIRMÁTORIO 
RELATÓRIO:
1. TESTE PRESUNTIVO
A. Quais meios de cultura são utilizados para a realização do método presuntivo? Qual classe de bactérias essas técnicas investigam?
O método dos túbulos múltiplos (ou técnica dos tubos múltiplos) é bastante usado para identificar e quantificar bactérias coliformes em amostras de água e outros ambientes. Ele segue uma abordagem de análise presuntiva, confirmatória e, em alguns casos, complementar, com o objetivo de identificar a presença de organismos que indicam a presença de organismos que indicam a contaminação fecal, como os coliformes totais e fecais (ou termotolerantes).
Meios de cultura utilizados:
· Caldo Lactosado (Caldo Lactose): Este é o meio de cultura principal utilizado na fase presuntiva. Ele contém lactose como fonte de carbono e um indicador de pH (geralmente vermelho, fenol ou verde brilhante). Se houver fermentação da lactose pelas bactérias presentes na amostra, haverá a produção de gás e uma mudança no pH do meio, levando à coloração indicativa de crescimento bacteriano.
· Caldo Lauril Sulfato Triptose (LST): Este é outro meio utilizado para a detecção de coliformes. Ele contém lauril sulfato de sódio, seletivo para bactérias gram-negativas, inibindo o crescimento de bactérias gram-positivas.
· Caldo Verde Brilhante Bile 2%: em algumas variantes do método presuntivo, esse caldo pode ser utilizado, especialmente na confirmação de coliformes fecais.
Classe de bactérias:
Estes testes presuntivos investigam, principalmente, bactérias pertencentes à família Enterobacteriaceae. Essas bactérias são usadas como indicadores de qualidade da água e de possíveis contaminações por esgoto ou resíduos humanos e animais. A presença delas sugere que a água pode conter outros microrganismos patogênicos, como vírus e protozoários.
· Coliformes totais: bactérias que fermentam lactose com produção de gás a 35–37 °C em 24–48 horas. Os principais gêneros incluem Escherichia, Klebsiella, Enterobacter e Citrobacter.
· Coliformes fecais (ou termotolerantes): Subgrupo dos coliformes totais que fermentam lactose com produção de gás a 44,5 °C. O gênero mais conhecido é Escherichia coli, sendo um indicador específico de contaminação fecal recente.
B. Descreva quais as proporções e diluições são obtidas após adicionar a amostra de água a ser analisada.
No método dos túbulos múltiplos, a adição da amostra de água a ser analisada é feita em diferentes proporções e diluições para garantir uma análise precisa. A amostra de água deve ser coletada em um frasco estéril e homogeneizada, se necessário. Geralmente, são realizadas diluições em série para obter concentrações diferentes da amostra. As diluições mais comuns são:
· Diluição 1:10: para esta diluição, 1 mL da amostra é misturado com 9 mL de um meio de cultura (geralmente o caldo lactosado).
·   Diluição 1:100: 1 mL da diluição 1:10 é misturado com 9 mL de meio de cultura.
·  Diluição 1:1000: 1 mL da diluição 1:100 é misturado com 9 mL de meio de cultura.
 Essas diluições são feitas para garantir que, em casos de contaminação elevada, as bactérias possam ser contadas e isoladas adequadamente.
As diluições resultantes são então inoculadas em tubos com o meio de cultura apropriado (caldo lactosado, LST, etc.). Tipicamente, cada diluição é inoculada em três tubos (ou mais), o que permite realizar uma análise estatística mais robusta e confirmar a presença de coliformes.
Os tubos inoculados são incubados a temperaturas específicas (geralmente a 35–37 °C para coliformes totais e a 44,5 °C para coliformes fecais) por um período de 24 a 48 horas. Após a incubação, os tubos são avaliados para a presença de gás e mudança de cor, indicando a presença de coliformes. Os resultados obtidos são então utilizados para calcular a densidade de coliformes na amostra original, considerando as diluições realizadas. Esse processo é crucial para a detecção e quantificação de bactérias em amostras de água e ajuda a garantir a segurança da água potável e a qualidade ambiental.
C. Adicione uma ou mais fotos do resultado do teste presuntivo.
D. Como devemos atribuir o laudo para a amostra de água analisada? 
Amostra: Água potável de poço
Método: Técnica dos Túbulos Múltiplos (Teste Presuntivo)
Resultado: Não foram detectados coliformes totais na amostra após 48 horas de incubação.
Conclusão: Amostra aprovada para consumo de acordo com os padrões microbiológicos de potabilidade.
2. TESTE CONFIRMÁTORIO
A. Descrever qual a importância dessa técnica para a identificação microbiológica da água? Como é realizada a leitura?
A técnica dos túbulos múltiplos é amplamente utilizada na identificação microbiológica da água devido à sua capacidade de identificar e quantificar organismos indicadores de contaminação, como os coliformes totais e fecais (ou termotolerantes). Ela é essencial na avaliação da qualidade microbiológica da água, ao permitir inferir a presença de microrganismos patogênicos sem a necessidade de identificá-los diretamente. Essa técnica é especialmente útil em sistemas de abastecimento de água potável, em monitoramento de efluentes e na análise de corpos d'água natural. A capacidade de identificar bactérias indicadoras de contaminação torna empenho monitorar eficientemente a segurança da água para consumo e identificar possíveis contaminações, ajudando a prevenir surtos de doenças transmitidas pela água.
Realização da leitura: 
Após inoculação das amostras de água nos tubos contendo os meios de cultura adequados e incubação, a leitura dos resultados segue um protocolo padronizado:
· O crescimento bacteriano é identificado pela produção de gás nos tubos, devido à fermentação da lactose presente no meio de cultura. Tubos com bolhas de gás no tubo de Durham (inserido invertido no interior dos frascos) ou uma mudança de cor no meio indicam a presença de bactérias coliformes que fermentaram a lactose.
· Após um período de incubação (geralmente 24 a 48 horas), os tubos são examinados quanto à produção de gás ou acidificação (mudança de cor). Contam-se os tubos positivos (aqueles com presença de gás) em cada série de diluições (ex.: 10 mL, 1 mL, 0,1 mL).
· A partir do número de tubos positivos em cada grupo de diluições (por exemplo, 5-3-1, onde 5 tubos positivos estão na diluição de 10 mL, 3 na diluição de 1 mL, e 1 na diluição de 0,1 mL), utiliza-se uma tabela estatística padronizada para calcular o NMP de coliformes na amostra. Esse valor é expresso como o número mais provável de organismos por 100 mL de amostra de água, fornecendo uma estimativa quantitativa da contaminação.
· Em certas situações, a análise não termina na fase presuntiva. Para confirmar que os organismos detectados são realmente coliformes fecais (como Escherichia coli), pode-se realizar uma etapa confirmatória, transferindo amostras dos tubos positivos para meios seletivos, como o caldo EC, e incubando a 44,5°C. A produção de gás nesta temperatura confirmaria a presença de coliformes fecais.
B. Relatar como é realizada a análise do número mais provável (NMP), utilizada para obtenção do resultado do teste confirmatório.
A análise do Número Mais Provável (NMP) éuma técnica estatística utilizada para estimar a concentração de microrganismos em uma amostra de água a partir de resultados de testes microbiológicos, como a técnica dos túbulos múltiplos. Essa análise é amplamente utilizada em testes confirmatórios para coliformes (totais e fecais) e outros indicadores bacterianos em amostras ambientais.
Análise do NMP:
· Inoculação e Incubação das Amostras:
A análise começa com a inoculação de amostras de diferentes volumes (normalmente 10 mL, 1 mL e 0,1 mL) em tubos contendo meio de cultura apropriado (como caldo lactosado). As amostras são diluídas em séries e, após a inoculação, os tubos são incubados (geralmente a 35–37 °C para coliformes totais ou a 44,5 °C para coliformes fecais).
Durante a incubação (geralmente de 24 a 48 horas), os tubos são observados para produção de gás (em tubos de Durham) ou outras alterações, como mudança de cor no meio, indicativas da fermentação de lactose pelos coliformes.
· Contagem dos Tubos Positivos:
Após a incubação, é feita a contagem dos tubos positivos (aqueles com presença de gás ou mudança de cor) em cada série de diluições. Por exemplo:
5 tubos com 10 mL de amostra (ou diluição 10^-1)
5 tubos com 1 mL de amostra (ou diluição 10^-2)
5 tubos com 0,1 mL de amostra (ou diluição 10^-3)
Os tubos positivos são contados para cada volume/diluição. Exemplo de contagem: 5-3-2 (5 positivos na série de 10 mL, 3 positivos na série de 1 mL, e 2 positivos na série de 0,1 mL).
· Uso de Tabelas de NMP:
A partir da contagem de tubos positivos para cada série de diluições, utiliza-se uma tabela de NMP para calcular a concentração estimada de microrganismos na amostra original.
As tabelas de NMP foram desenvolvidas com base em princípios estatísticos e fornecem a estimativa provável da concentração bacteriana, expressa como o número de microrganismos por 100 mL de amostra.
Exemplo: Para uma contagem de 5-3-2 (5 tubos positivos na diluição de 10 mL, 3 na de 1 mL e 2 na de 0,1 mL), a tabela de NMP pode indicar que o número mais provável de coliformes na amostra é de 93 organismos por 100 mL.
· Interpretação do Resultado:
O resultado obtido na tabela de NMP é interpretado em termos de concentração de microrganismos por 100 mL de amostra. Se o valor de NMP obtido estiver abaixo do limite permitido para o tipo de água analisada (por exemplo, água potável), o resultado é considerado aceitável.
Se o valor de NMP for superior ao limite estabelecido pelas regulamentações, a amostra é considerada contaminada e pode ser necessária uma investigação mais detalhada e medidas corretivas.
· Confirmação (quando necessário):
Nos casos em que o teste presuntivo indica a presença de coliformes, pode ser realizada uma etapa confirmatória. Isso envolve a inoculação de amostras dos tubos positivos em meios seletivos específicos, como caldo EC, seguido de incubação a 44,5 °C para confirmar a presença de coliformes fecais (como Escherichia coli).
A confirmação pode fornecer um resultado mais preciso sobre o tipo de coliforme presente (total ou fecal).
C. Adicione uma foto do resultado dos tubos obtidos durante a aula prática.
D. Como devemos atribuir o laudo final dessa amostra baseado na tabela de Hoskins?
Exemplo 1: Amostra de Água Potável (Resultado Confirmatório Positivo)
Amostra: Água potável
Método: Técnica dos Túbulos Múltiplos (Teste Confirmatório)
Diluições: 10 mL, 1 mL e 0,1 mL
Resultado: 2 tubos positivos na diluição de 10 mL, 1 tubo positivo na diluição de 1 mL, 0 tubos positivos na diluição de 0,1 mL.
NMP estimado: Usando a tabela de Hoskins, o resultado para 2-1-0 é aproximadamente 6,1 coliformes fecais por 100 mL.
Conclusão: A amostra não atende aos padrões de potabilidade, pois coliformes fecais foram detectados. A água é considerada imprópria para consumo humano.
Exemplo 2: Amostra de Água Recreativa (Resultado Confirmatório Positivo)
Amostra: Água de lagoa
Método: Técnica dos Túbulos Múltiplos (Teste Confirmatório)
Diluições: 10 mL, 1 mL e 0,1 mL
Resultado: 3 tubos positivos na diluição de 10 mL, 2 tubos positivos na diluição de 1 mL, 1 tubo positivo na diluição de 0,1 mL.
NMP estimado: Usando a tabela de Hoskins, o resultado para 3-2-1 é aproximadamente 15 coliformes fecais por 100 mL.
Conclusão: A amostra atende aos padrões para águas recreacionais, pois o limite máximo permitido é, por exemplo, 200 coliformes fecais por 100 mL. A água é considerada adequada para atividades recreativas.
Exemplo 3: Amostra de Água Potável (Resultado Confirmatório Negativo)
Amostra: Água potável
Método: Técnica dos Túbulos Múltiplos (Teste Confirmatório)
Diluições: 10 mL, 1 mL e 0,1 mL
Resultado: Nenhum tubo positivo em qualquer diluição.
NMP estimado: 0 coliformes fecais por 100 mL.
Conclusão: A amostra atende aos padrões de potabilidade. A água é considerada própria para consumo humano.
RELATÓRIO DE PRÁTICA 02
Milena Pelicer Ribeiro
47010874
	
RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS: Análise Ambiental 
DADOS DO(A) ALUNO(A):
	NOME: Milena Pelicer Ribeiro 
	MATRÍCULA: 47010874
	CURSO: Biomedicina 
	POLO: UNIFAEL Machadinho- RS
	PROFESSOR(A) ORIENTADOR(A): Rosilma de Oliveira
	ORIENTAÇÕES GERAIS: 
· O relatório deve ser elaborado individualmente e deve ser escrito de forma clara e
· concisa;
· O relatório deve conter apenas 01 (uma) lauda por tema;
· Fonte: Arial ou Times New Roman (Normal e Justificado);
· Tamanho: 12;
Margens: Superior 3 cm; Inferior: 2 cm; Esquerda: 3 cm; Direita: 2 cm;
· Espaçamento entre linhas: simples;
· Título: Arial ou Times New Roman (Negrito e Centralizado). 
		TEMA DE AULA: TÉCNICA DOS TUBOS MÚLTIPLOS. COLIFORMES TERMOTOLERANTES E CONTAGEM PADRÃO DE BACTÉRIAS HETEROTRÓFICAS
RELATÓRIO:
1. TÉCNICA DOS TUBOS MÚLTIPLOS. COLIFORMES TERMOTOLERANTES
1. Explicar qual a importância da pesquisa das bactérias termotolerantes. 
A investigação de bactérias chamadas de coliformes termotolerantes (também conhecidas como coliformes fecais) é crucial, ao serem indicadores de contaminação fecal na água e nos alimentos, o que pode representar riscos à saúde humana. As bactérias conhecidas como Escherichia coli são utilizadas para avaliar a qualidade microbiológica e identificar possíveis patógenos.
Além de ser um parâmetro indispensável para avaliar a segurança microbiológica da água e determinar se ela atende aos padrões de potabilidade, essas pesquisas também auxiliam na verificação da eficiência dos processos de tratamento.
1. O que das bactérias termotolerantes indicam numa análise microbiológica da água?
Na análise microbiológica da água, a presença de bactérias termotolerantes indica contaminação fecal recente. Embora os coliformes nem sempre sejam patogênicos, sua detecção sugere a possibilidade de outros microrganismos perigosos (vírus, protozoários e bactérias patogênicas) provenientes de fezes, como:
Salmonela
Vibrio cholerae
Hepatite A
Rotavírus.
A quantidade e a frequência da presença desses organismos são usadas para determinar o grau de contaminação e o risco associado ao uso da água para diferentes finalidades (potabilidade, recreação, irrigação, etc.).
1. Qual o meio de cultura é utilizado para a realização dessa técnica?
Na técnica dos tubos múltiplos para a detecção de coliformes termotolerantes, são utilizados meios de cultura específicos para favorecer o crescimento dessas bactérias e identificar sua presença por reações características. 
· Caldo Lauril Sulfato de Sódio (LSS): 
-Utilizado para a primeira fase da técnica dos tubos múltiplos.
 - Este meio é enriquecido com lactose (para detectar a fermentação do açúcar) e é usado para detectar a presença de coliformes totais, que podem ser coliformes fecais (termotolerantes) ou não.
 - O meio permite o crescimento das bactérias, que, ao fermentar a lactose, produzem gás (e muitas vezes ácido), indicando a presença de coliformes.
· Meio de Cultura EC (Escherichia coli) ou Endo:
 - Após a identificação preliminar no LLT, é comum usar o meio EC (Escherichia coli) para confirmar a presença de coliformes termotolerantes.
 - O Meio ECcontém sais biliares que inibem o crescimento de muitas bactérias, favorecendo o crescimento de coliformes termotolerantes e Escherichia coli. Este meio também possui lactose e um indicador de pH que ajuda na identificação de fermentação de lactose.
 - Outro meio possível é o meio Endo, que também é seletivo para coliformes e permite a visualização de colônias de coliformes termotolerantes.
1. Adicione pelo menos uma foto dos resultados dessa técnica na aula prática.
1. Qual a principal bactéria representante desse grupo pesquisado nessa técnica?
A principal bactéria representante do grupo de coliformes termotolerantes por tubos múltiplos é a Escherichia coli (E. coli), especialmente a cepa E. coli termo-tolerante.
1. CONTAGEM PADRÃO DE BACTÉRIAS HETEROTRÓFICAS
1. Explicar qual a importância da pesquisa das bactérias heterotróficas numa análise microbiológica da água
A pesquisa de bactérias heterotróficas na análise microbiológica da água é importante porque essas bactérias atuam como indicadores gerais da qualidade microbiológica da água e podem refletir condições de contaminação ou crescimento bacteriano excessivo, o que pode comprometer o uso da água para diferentes finalidades.
1. O que essas bactérias indicam numa análise microbiológica da água?
As bactérias heterotróficas estão naturalmente presentes em ambientes aquáticos, mas concentrações elevadas podem indicar desequilíbrios microbiológicos, contaminação, riscos à saúde pública e a presença de nutrientes que favorecem o crescimento excessivo de microrganismos. A contagem padrão de bactérias heterotróficas (CPBH) é utilizada para verificar a eficiência dos processos de tratamento, como filtração, desinfecção e manutenção da qualidade durante o armazenamento e distribuição.
Embora a maioria das bactérias heterotróficas não seja patogênica, sua presença em altos níveis pode mascarar ou competir com organismos potencialmente perigosos e comprometer os processos de detecção de patógenos. Na água de rios e lagos, a contagem elevada pode indicar aumento da matéria orgânica, reduzindo a qualidade ambiental, a potabilidade da água e risco microbiológico, contribuindo para fenômenos como eutrofização.
1. Qual seria a medida de tratamento para uma análise de água na qual essa contagem estaria acima do valor padrão?
A principal medida para tratar a alta contagem de bactérias heterotróficas em água é melhorar a eficiência dos processos de tratamentos físicos, químicos e biológicos, com foco na desinfecção e filtragem, além de adotar medidas corretivas para evitar contaminações nas redes de distribuição e prevenir o crescimento de microrganismos indesejáveis. Essas ações não só garantem a qualidade microbiológica da água, mas também protegem a saúde pública e o ambiente.
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