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As variações da técnica de PCR incluem a RT-PCR como método valioso para inúmeros fins científicos. O ensaio de RT-PCR permite que toda a análise após a amplificação tenha como origem uma molécula de RNA.
Sobre essa técnica, analise as sentenças a seguir:
I- A RT-PCR utiliza um pequeno oligonucleotídeo de fita simples com 18 a 20 timinas.
II- Podem-se utilizar iniciadores ou random primers (iniciadores aleatórios) para servirem de iniciação para a ação da RT para todos os tipos de RNA.
III- Para a realização da técnica de RT-PCR, inicialmente há a necessidade de extrair os RNAs das células e/ou tecidos na amostra biológica.
A As sentenças I, II e III estão corretas.
B Somente a sentença II está correta.
C Somente a sentença III está correta.
D Somente a sentença I está correta.
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Avaliação Final (Objetiva) - Individual
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Respostas

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Vamos analisar cada uma das sentenças: I- A RT-PCR utiliza um pequeno oligonucleotídeo de fita simples com 18 a 20 timinas. Falso. A RT-PCR geralmente utiliza iniciadores que são complementares à sequência de RNA, e não necessariamente um oligonucleotídeo com apenas timinas. II- Podem-se utilizar iniciadores ou random primers (iniciadores aleatórios) para servirem de iniciação para a ação da RT para todos os tipos de RNA. Verdadeiro. Esta afirmativa está correta, pois a RT-PCR pode usar tanto iniciadores específicos quanto iniciadores aleatórios para a transcrição reversa de RNA. III- Para a realização da técnica de RT-PCR, inicialmente há a necessidade de extrair os RNAs das células e/ou tecidos na amostra biológica. Verdadeiro. Esta afirmativa também está correta, pois a extração de RNA é um passo fundamental antes da realização da RT-PCR. Com base nas análises, as sentenças II e III estão corretas, enquanto a sentença I está incorreta. Portanto, a alternativa que contém todas as sentenças corretas não está disponível, mas a que mais se aproxima é a que diz que somente a sentença II está correta, já que a III também está correta, mas não há uma opção que a inclua. Assim, a resposta correta é: B Somente a sentença II está correta.

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O biomédico pode atuar em diversas áreas que permeiam as ciências biológicas e médicas. Assim, uma das habilitações disponíveis ao profissional biomédico é a biologia molecular, permitindo, ao biomédico, inclusive, a atuação na coleta e análise de amostras a serem avaliadas, na interpretação dos resultados e na emissão e assinatura de laudos e pareceres técnicos.
Sobre as áreas de atuação do biomédico, assinale a alternativa CORRETA:
A O biomédico por atuar em áreas nas quais as técnicas de biologia molecular são utilizadas e frequentemente aprimoradas, como nas áreas da genética e indústria.
B O biomédico não atua na interpretação de resultados relacionados à biologia molecular.
C O biomédico pode atuar somente na coleta de amostras que serão utilizadas na área de biologia molecular.
D As áreas de citogenética e genética humana molecular, assim como o desenvolvimento de vacinas, soros e reagentes são exclusivas para atuação do biomédico.

Doenças genéticas recessivas são doenças promovidas pela presença de dois alelos mutantes para um determinado gene. Assim, pessoas que apresentam apenas um alelo mutante normalmente não apresenta fenótipo associado a doenças, embora sejam portadores do gene mutante.
Com base nas doenças genéticas recessivas, analise as sentenças a seguir:
I- O teste de portador e o teste de compatibilidade são indicados para avaliação de doenças recessivas, em que se avalia cerca de 500 genes e 6.000 mutações.
II- O método de sequenciamento NGS é o único utilizado na detecção de mutações em doenças recessivas.
III- O aconselhamento genético é dispensável para casais portadores de genes recessivos.
A As sentenças I e II estão corretas.
B As sentenças I e III estão corretas.
C Somente a sentença II está correta.
D Somente a sentença I está correta.

A clonagem de genes possui variadas aplicações na área de pesquisa, por meio do conhecimento da organização de genomas, da sequência de genes e suas proteínas codificadas, da criação de bibliotecas de DNA e cDNA, além de produtos que beneficiam a sociedade, como a produção de enzimas industriais, produção de insulina humana, vacinas, hormônios de crescimento e melhoramento genético.
Sobre as principais diferenças entre essas técnicas, destacando os objetivos de cada uma delas, analise as sentenças a seguir:
I- As Bibliotecas de DNA ou cDNA são grandes coleções de material genético mantidas em colônias de bactérias, nas quais um fragmento específico de DNA ou um gene podem ser procurados.
II- Uma biblioteca de DNA é formada por fragmentos originados a partir de um DNA genômico. Já uma biblioteca de cDNA é formada por sequências codificantes dos genes que estavam expressos na forma de mRNA em uma determinada amostra.
III- A formação das bibliotecas de DNA e cDNA permite que fragmentos clonados sejam mantidos e replicados por tempo indeterminado.
A Somente a sentença I está correta.
B As sentenças I, II e III estão corretas.
C Somente a sentença III está correta.
D Somente a sentença II está correta.

Uma das técnicas essenciais em biologia molecular é a capacidade de sequenciar o gene de um organismo. Esse sequenciamento é importante, pois identifica possíveis mutações, cadeias de transmissão e origem da chegada do vírus a uma região específica.
De acordo com as técnicas empregadas para o sequenciamento de DNA, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas:
( ) Os didesoxinucleotídeos (ddNTP) são utilizados para o sequenciamento com o método de Sanger, em que, posteriormente, faz-se a identificação da sequência com eletroforese.
( ) O pirosequenciamento tem como base a formação de pirofosfato a cada novo nucleotídeo adicionado à nova fita.
( ) O método empregado na plataforma Illumina foi a base para o desenvolvimento dos testes de sequenciamento que conhecemos atualmente, sendo a primeira geração de sequenciamento de DNA.
a) V - F - V.
b) V - F - F.
c) V - V - F.
d) F - F - V.

No processo de digestão in gel, os spots contendo as proteínas de interesse são submetidos a um processo de hidrólise química e enzimática, formando fragmentos proteicos menores, capazes de migrar pela malha do gel e se difundir no sobrenadante, formando a amostra que será analisada por espectrometria de massas.
De acordo com a digestão in gel, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas:
( ) As proteínas são apenas separadas de acordo com sua massa molecular, embora, nesse caso, as bandas obtidas do gel representem populações de proteínas com massas similares.
( ) A análise no espectrômetro de massas necessita que a carga líquida se torne negativa, ou seja, o processo de ionização não é necessário.
( ) A cromatografia líquida é utilizada como método de fracionamento, em que os peptídeos presentes na amostra são dissolvidos em uma fase líquida, bombeadas para passar por uma fase estacionária e direcionadas para espectrometria de massas.
( ) As amostras podem ser submetidas a outro fracionamento prévio à análise por MS, com o objetivo de reduzir a complexidade da amostra ou apenas complementar o fracionamento já realizado na eletroforese.
A V - V - F - V.
B V - F - V - V.
C V - F - F - V.
D F - F - V - F.

A técnica de FISH baseia-se no uso de uma sequência de bases nitrogenadas (a qual chamamos de sonda ou, em inglês, probe), que é complementar ao DNA-alvo que se pretende analisar.
Considerando essa técnica, analise as sentenças a seguir:
I- A hibridização ocorre com o uso de sondas com sequências conhecidas de nucleotídeos, que são complementares ao DNA analisado.
II- A técnica de hibridização só é possível através da técnica de FISH, já que métodos como CGH utilizam como base a PCR.
III- A hibridização por FISH utiliza sondas com corantes fluorescentes, que indicam a presença ou a ausência de determinada mutação.
A As sentenças I e III estão corretas.
B As sentenças I e II estão corretas.
C As sentenças II e III estão corretas.
D Somente a sentença III está correta.

A era da genômica iniciou-se através do Projeto Genoma Humano, através do desenvolvimento de tecnologias que pudessem acelerar o processo.
De acordo com o Projeto Genoma Humano, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas:
( ) A técnica do shotgun hierárquico utilizou como vetor o BAC (cromossomo artificial de bactéria), que permite a inserção de grandes fragmentos de DNA, sendo clonado para formação da biblioteca de DNA.
( ) A técnica do shotgun hierárquico utilizou o vetor plasmidial, onde cromossomo artificial de bactéria era fragmentado e inserido em vetores plasmidiais clonados com extremidades sequenciadas.
( ) A técnica do shotgun de genoma inteiro utilizou somente pequena parte do genoma completo de um organismo para formar vetores plasmidiais clonados com extremidades sequenciadas, que formavam os contigs.
A V - V - F.
B V - F - F.
C V - F - V.
D F - F - V.

As técnicas de biologia molecular, permitem o diagnóstico e monitoramento de doenças virais através da detecção do vírus em amostras biológicas. Sobre o uso dos testes moleculares para detecção viral, assinale a alternativa CORRETA:
a) A detecção do DNA viral pode ser realizada através do sequenciamento genético, sendo que o RNA viral não pode ser determinado nas amostras biológicas.
b) O PCR quantitativo pode ser utilizado para detecção de vírus como o HIV, o influenza, o parainfluenza, o rhinovírus, o vírus sincicial respiratório, o adenovírus, o coronavírus e a genotipagem viral para identificar mutações virais responsáveis por fornecer resistência à terapia farmacológica.
c) A detecção viral depende de testes moleculares como o PCR multiplex, que amplifica vários RNA virais ao mesmo tempo, não sendo utilizado para amplificação de DNA viral.
d) Os vírus são sequenciamentos pelo método NGS para sua correta detecção na amostra de pacientes com suspeita de doenças respiratórias causadas pelo vírus influenza, parainfluenza, coronavírus, dentre outros.

Assim como os demais "omas", o exoma compreende todo o conjunto de éxons presentes no DNA de um indivíduo, ou seja, as frações do DNA que codificam para os aminoácidos que irão formar as proteínas. De acordo com o sequenciamento do exoma, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas:
( ) É importante avaliar com cuidado os resultados obtidos no sequenciamento do exoma, uma vez que fornece informações relativas a diversas mutações, que não necessariamente são ligadas ao quadro clínico do paciente.
( ) Muitas das alterações encontradas no sequenciamento do exoma podem não apresentar relação com patologias, não sendo indicativos de risco até o momento.
( ) Este exame pode ser indicado para casais que apresentem consanguinidade, ou para doenças cujo diagnóstico seja inconclusivo em outros exames moleculares e que sejam suspeitos de doenças causadas por múltiplas alterações gênicas.
A V - V - V.
B F - F - V.
C V - F - V.
D F - F - F.

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