Vamos analisar cada afirmação sobre as metodologias de purificação de enzimas: ( ) A técnica de salting in aplica uma solução com baixa concentração de sais para promover a agregação de proteínas na matriz (fase estacionária) devido a interações iônicas. Após a aplicação de um gradiente de sal, a enzima adsorvida na matriz é liberada. Verdadeiro (V). A técnica de salting in é utilizada para promover a agregação de proteínas na matriz cromatográfica, facilitando a posterior eluição da enzima de interesse. ( ) A filtração em membrana é uma metodologia de concentração de biomoléculas na qual a solução é bombeada tangencialmente ao longo da superfície da membrana. Na microfiltração, na ultrafiltração e na nanofiltração, as enzimas de interesse são separadas com base no tamanho, aplicando um gradiente de pressão. Falso (F). A filtração em membrana é uma técnica de separação baseada no tamanho das moléculas, não na concentração. As diferentes técnicas de filtração em membrana são utilizadas para separar moléculas com base em seus tamanhos. ( ) A cromatografia de exclusão molecular é aplicada para separar moléculas de acordo com o seu tamanho. Enzimas com maior massa molecular percorrem a coluna de forma mais lenta, enquanto enzimas de menor tamanho são eluídas rapidamente. Falso (F). Na cromatografia de exclusão molecular, as moléculas menores são eluídas primeiro, enquanto as maiores são retidas na matriz por mais tempo. ( ) A cromatografia por afinidade permite a separação de biomoléculas de acordo com a afinidade biológica pelo ligante presente na matriz. Enzimas podem ser separadas nesse tipo de cromatografia aplicando um composto não reativo análogo ao substrato. Verdadeiro (V). A cromatografia por afinidade é baseada na interação específica entre a biomolécula de interesse e o ligante presente na matriz, permitindo a separação seletiva das enzimas. ( ) As cromatografias de exclusão molecular e de interação hidrofóbica são dependentes da hidrofobicidade da molécula de interesse. Ambas utilizam um gradiente de solvente orgânico ou uma solução de alta força iônica como eluente. Falso (F). A cromatografia de exclusão molecular separa com base no tamanho, enquanto a cromatografia de interação hidrofóbica separa moléculas com base em suas interações hidrofóbicas, não na hidrofobicidade da molécula de interesse. Portanto, a sequência correta de Verdadeiro (V) e Falso (F) é: V – F – F – V – F. A alternativa que corresponde a essa sequência é: V – F – F – V – F.