RELATÓRIO REFERENTE A PRÁTICA DOS COMPONENTES SANGUÍNEOS.docx - Documentos Google

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MINISTÉRIO DA EDUCAÇÃO 
 UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAUÍ 
 CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE 
 DEPARTAMENTO DE NUTRIÇÃO 
 DISCIPLINA: NUTRIÇÃO EXPERIMENTAL 
 PROFESSORAS: NADIR DO NASCIMENTO NOGUEIRA E DILINA DO 
 NASCIMENTO MARREIRO 
 AICOM WUANDSON SOUSA SALES 
 BEATRIZ APARECIDA RIOS DE OLIVEIRA 
 GEICE KELLY SOUSA DE OLIVEIRA 
 GIOVANNA ELLEN SILVA DE SOUSA 
 MARIA EDUARDA DA SILVA GOMES 
 NÁDIA AGUIAR VIEIRA DOS SANTOS 
 RELATÓRIO: SEPARAÇÃO DOS COMPONENTES SANGUÍNEOS 
 TERESINA 
 2023 
 AICOM WUANDSON SOUSA SALES 
 BEATRIZ APARECIDA RIOS DE OLIVEIRA 
 GEICE KELLY SOUSA DE OLIVEIRA 
 GIOVANNA ELLEN SILVA DE SOUSA 
 MARIA EDUARDA DA SILVA GOMES 
 NÁDIA AGUIAR VIEIRA DOS SANTOS 
 RELATÓRIO: SEPARAÇÃO DOS COMPONENTES SANGUÍNEOS 
 Relatório apresentado à disciplina de Nutrição 
 Experimental como requisito parcial para 
 obtenção de nota no componente prático da 
 disciplina. 
 Professoras: 
 Nadir do Nascimento Nogueira e Dilina do 
 Nascimento Marreiro 
 Estagiárias: Lyandra Dias da Silva, Nilmara 
 Cunha da Silva, Vitória Ribeiro Mendes, 
 Thayanne Gabryelle Visgueira de Sousa. 
 TERESINA 
 2023 
 SUMÁRIO 
 1 INTRODUÇÃO 3 
 2 METODOLOGIA 5 
 2.1 Método de separação de plasma e eritrócitos 6 
 2.2 Lavagem de eritrócitos 6 
 3 RESULTADOS E DISCUSSÃO 7 
 5 CONCLUSÃO 15 
 1 INTRODUÇÃO 
 O sangue pode ser definido como uma substância líquida que circula rapidamente 
 dentro de um sistema fechado de vasos denominado sistema circulatório. É constituído por 
 um fluido no qual há células em suspensão, moléculas e íons dissolvidos em água, 
 apresentando, dessa forma, propriedades das soluções coloidais (GARAZA, ARVIZU, 2016). 
 Outrossim, sangue é constantemente renovado pelo corpo, através da entrada e saída 
 de substâncias que modificam discretamente sua composição, além disso essa renovação é 
 controlada para garantir que sua composição e propriedades sejam mantidas constantes. Isso é 
 importante para manter o corpo saudável e funcionando. (ZAGO, et al. , 2013) 
 A formação de células sanguíneas é conhecida como hematopoiese, ela abrange o 
 estudo de todos os fenômenos relacionados com a origem, multiplicação e maturação das 
 células primordiais ou precursoras das células sanguíneas, à nível da medula óssea 
 (WALLACH, 2013). 
 É dividida em período embrionário ou fetal onde as células sanguíneas começam a se 
 desenvolver no corpo a partir do primeiro mês de vida pré-natal. Na sexta semana de vida 
 pré-natal, o fígado é o principal órgão responsável por produzir células sanguíneas. E o 
 período pós-natal, onde aos poucos a medula óssea se torna a principal fonte de células 
 sanguíneas no corpo, sendo responsável por produzir diferentes tipos de células, como 
 eritrócitos, plaquetas e granulócitos (GARZA, ARVIZU, 2016). 
 Os componentes do sangue podem ser classificados em partículas sólidas como os 
 eritrócitos (glóbulos vermelhos), leucócitos (glóbulos brancos) e plaquetas e a parte líquida 
 chamada de plasma, onde há vitaminas, e proteínas como os fatores de coagulação. Quando o 
 sangue não está circulando no corpo e entra em contato com o tecido ou com tubos, as 
 proteínas no plasma se juntam para formar coágulos. Isso é uma forma natural do corpo evitar 
 que o sangue saia demais do corpo. O soro é o sangue depois das proteínas coagularem, ou 
 seja, após formarem os coágulos (MESCHER, 2013). 
 Os eritrócitos são células pequenas, circulares, anucleadas, com forma aproximada de 
 discos bicôncavos, com 7,5 mm de diâmetro. Embora seu número seja variável, um milímetro 
 cúbico de sangue contém cerca de 4.5 a 6.1 milhões dessas células nos homens e cerca de 4.1 
 a 5.3 milhões nas mulheres. Essas células circulam pelo sangue circulante durante o período 
 de aproximadamente 120 dias antes que sejam destruídas (ZAGO, et al., 2013). 
 Os leucócitos são elementos envolvidos no sistema de defesa do organismo. Por meio 
 de fagocitose, eles defendem os tecidos contra invasão de organismos ou substâncias 
 estranhas, removendo também os restos resultantes da morte ou de ferimentos celulares 
 (WALLACH J.B; 2013). 
 A hemoglobina trata-se de uma substância pigmentada, formada por duas partes: (1) 
 porção que contém ferro denominada heme e (2) porção protéica, denominada globina que 
 consiste de quatro cadeias polipeptídicas, cada uma das quais ligada a um grupo heme. Cada 
 grupo heme contém um átomo de ferro que se combina reversivelmente com uma molécula de 
 oxigênio. Dessa forma, cada molécula de hemoglobina pode potencialmente associar-se com 
 quatro moléculas de oxigênio. Sua principal função é o transporte de oxigênio e gás 
 carbônico, permitindo as trocas gasosas necessárias ao metabolismo orgânico (GARZA, 
 ARVIZU, 2016). 
 Outro componente sanguíneo são as plaquetas, ou trombócitos. São células com 
 função de promover a coagulação do sangue através da formação de coágulo. Estas células 
 cessam o sangramento, aglomerando-se e formando uma espécie de rede nas lesões dos vasos 
 sanguíneos (FRITSMA, 2014) 
 Sendo assim, o presente relatório visa explanar sobre a aula-prática de separação de 
 componentes sanguíneos realizada com alunos do curso de nutrição da Universidade Federal 
 do Piauí. A prática teve como objetivo mostrar o trajeto do sangue após sua coleta para a 
 obtenção de suas diferentes fases (plasma, soro, leucócitos, eritrócitos), além de tratar de todo 
 o controle higiênico necessário para a obtenção de amostras fiéis e sem contaminação. 
 2 METODOLOGIA 
 A atividade prática foi realizada no Laboratório de Nutrição Experimental (LANEX) 
 da Universidade Federal do Piauí. Inicialmente, foi separado o material necessário: 
 ● Luvas, álcool, algodão, papel madeira; 
 ● Etiquetas, fitas durex, canetas, papel, marcados de tubos, tesoura e 
 grampeado; 
 ● Depósitos e frascos de plástico desmineralizados armazenamento do material 
 desmineralizado e de soluções; 
 ● Plástico filme; 
 ● Suporte para tubos; 
 ● Tubos desmineralizados; 
 ● Tubos com água; 
 ● Balança digital; 
 ● Beckers desmineralizados: 
 ● Ponteira de 1000 μL; 
 ● Ponteiras de 100 e 1000 μL desmineralizadas; 
 ● Centrifugas; 
 ● Suporte para ependorfs: 
 ● Ependorfs desmineralizados; 
 ● Caixas para ependorfs; 
 ● Frasco com água e detergente para descarte do material; 
 ● Ácido Nitrico a 10%; 
 ● Solução salina a 0,9%. 
 Para a utilização de cada material é necessário todos passarem pelo processo de 
 lavagem e desmineralização. Na lavagem os materiais são higienizados com água e sabão e 
 levados para a secagem, partindo assim para a desmineralização que ocorre pela seguinte 
 técnica: o material é colocado em banho de ácido nítrico a 10% por, no mínimo, 12 horas, em 
 seguida é enxaguado em água deionizada 10 vezes e colocado para secagem na estufa, com 
 temperatura controlada (cerca de 50°C). Logo após, é acondicionado de forma segura até o 
 uso, em recipiente devidamente desmineralizado e identificado (“DESMI”). 
 2.1 Método de separação de plasma e eritrócitos 
 Primeiramente houve a limpeza da bancada e a organização dos materiais a serem 
 usados. Em seguida, cada tubo com a amostra foi pesado e junto a eles, tubo com água para 
 serem colocados em posição opostaaos tubos com amostra na centrífuga, e as amostras foram 
 posicionadas na centrífuga a uma velocidade de 3000 RPM por 15 minutos. 
 Em seguida, os alunos se reuniram na bancada onde foi explicado a diferença de cada 
 tubo e que é analisado em cada um segundo sua cor. 
 ● Tubo soro (amarelo): leptina, cortisol 
 ● Tubo soro (vermelho): citocinas 
 ● Tubo com citrato (azul): zinco e magnésio 
 ● Tubo com EDTA (roxo): selênio, MDA, AGNE e enzimas 
 Após a centrifugação, as amostras apresentavam três fases: plasma ou soro, os 
 eritrócitos e os leucócitos. Tendo o plasma e o eritrócito separados, o plasma foi transferido 
 para os eppendorfs devidamente identificados utilizando pipetas graduadas em 1000 
 microlitros. Após a transferência, cada eppendorf é colocado sob refrigeração -20°C. As 
 amostras de SOD são acondicionadas à temperatura de -80°C. 
 2.2 Lavagem de eritrócitos 
 Para a lavagem de eritrócitos foi utilizado apenas os tubos roxo e azul tendo em vista 
 que nos tubos amarelo e vermelho os sangue estava coagulado. O método baseou-se na 
 utilização de solução salina 0,9% (água pura + 9g de cloreto de sódio), onde 5.000 microlitros 
 de solução salina foram adicionados com muito cuidado ao tubo contendo apenas a papa de 
 eritrócitos. Logo após, o tubo é vedado com parafilme, homogeneizado por imersão e 
 centrifugado a uma velocidade de 3.500 RPM por 10 minutos. 
 Após a centrifugação, a solução salina foi retirada com bastante cuidado para não 
 lesionar os eritrócitos com uma pipeta graduada em 1000 microlitros. O ideal é repetir esse 
 processo 3 vezes. Após isso, a papa de eritrócitos foi transferida para eppendorfs devidamente 
 identificados e armazenados em caixas identificadas e refrigeradas à temperatura de 20°C 
 para posterior análise 
 3 RESULTADOS E DISCUSSÃO 
 Seguem os resultados obtidos na prática. 
 Figura 1 - Tubos para separação dos componentes sanguíneos. Teresina-PI, 2023. 
 Fonte : Laboratório de Nutrição Experimental (LANEX) – Departamento de Nutrição – Centro de Ciências da 
 Saúde (CCS) – UFPI, 2023. 
 Na análise dos componentes sanguíneos cada tubo possui uma função específica, de 
 modo que o tubo com a tampa amarela, cuja amostra é o soro, contém gel separador e ativador 
 de coágulo; o tubo com tampa azul, cuja amostra é o plasma, contém anticoagulante citrato de 
 sódio; o tubo com tampa vermelha, cuja amostra é soro, contém ativador de coágulo; e o tubo 
 com tampa roxa, cuja amostra é o sangue total, contém anticoagulante ácido etilenodiamino 
 tetra-acético - EDTA (FLEURY, 2019). 
 O sangue é composto pelo componente líquido – plasma, e as estruturas mergulhadas 
 neste líquido – elementos figurados. O plasma é constituído por aproximadamente 90% de 
 água e 10% por materiais dissolvidos ou coloidais, como hormônios, proteínas (albumina, 
 fibrinogênio e globulinas). Os elementos figurados incluem os eritrócitos ou hemácias 
 (células vermelhas), leucócitos (células brancas) e plaquetas (trombócitos) (ROSS, 2012). 
 Após a coleta do sangue este é submetido ao processo de centrifugação com ou sem 
 anticoagulante, a partir da centrifugação com anticoagulante obtém-se o hematócrito, onde o 
 plasma caracteriza-se como o sobrenadante translúcido e amarelado, e a partir da 
 centrifugação sem anticoagulante obtém-se o soro, no qual as células brancas estão 
 dissolvidas. Os eritrócitos, células vermelhas ou hemácias, possuem elevadas quantidade de 
 hemoglobina – proteína transportadora de oxigênio, de modo que a concentração normal de 
 eritrócitos no sangue é de aproximadamente 5 milhões por microlitros (JUNQUEIRA; 
 CARNEIRO, 2008). 
 Os leucócitos são incolores, produzidos na medula óssea ou em tecidos linfóides, estes 
 possuem a função de proteção contra infecções, e classificam-se em dois grupos - 
 granulócitos e agranulócitos. E as plaquetas são corpúsculos anucleados, cuja função é 
 promover a coagulação do sangue e auxiliar na reparação da lesão de pequenos vasos 
 sanguíneos, evitando hemorragias; normalmente existem aproximadamente 300.000 de 
 plaquetas por microlitro de sangue, e também se classificam em dois grupos – hialômetro e 
 cromômetro (JUNQUEIRA; CARNEIRO, 2008; ROSS, 2012). 
 Figura 2 – Componentes sanguíneos no tubo com tampa amarela. Teresina-PI, 2023. 
 Fonte : Laboratório de Nutrição Experimental (LANEX) – Departamento de Nutrição – Centro de Ciências da 
 Saúde (CCS) – UFPI, 2023. 
 Componentes sanguíneos no tubo com tampa amarela antes da centrifugação (Figura 
 2). 
 Figura 3 – Componentes sanguíneos no tubo com tampa vermelha. Teresina-PI, 2023. 
 Fonte : Laboratório de Nutrição Experimental (LANEX) – Departamento de Nutrição – Centro de Ciências da 
 Saúde (CCS) – UFPI, 2023. 
 Componentes sanguíneos no tubo com tampa amarela antes da centrifugação (Figura 
 3). 
 Figura 4 – Componentes sanguíneos nos tubos com tampas azul e roxa. Teresina-PI, 2023. 
 Fonte : Laboratório de Nutrição Experimental (LANEX) – Departamento de Nutrição – Centro de Ciências da 
 Saúde (CCS) – UFPI, 2023. 
 Componentes sanguíneos nos tubos com tampas azul e roxa antes da centrifugação 
 (Figura 4). 
 Figura 5 – Centrifugação dos componentes sanguíneos. Teresina-PI, 2023. 
 Fonte : Laboratório de Nutrição Experimental (LANEX) – Departamento de Nutrição – Centro de Ciências da 
 Saúde (CCS) – UFPI, 2023. 
 O processo de centrifugação acontece a velocidade de 3000 rotações por minuto - 
 RPM e a 1831 força centrífuga relativa - RCF, durante 15 minutos, todavia na fase 
 pré-centrifugação todos os tubos de coleta são homogeneizados por inversão, 10 vezes para 
 garantir a completa mistura entre a amostra e o aditivo, salva-se o tubo contendo citrato de 
 sódio, o qual deve ser invertido apenas 4 vezes, então após centrifugação a partir das amostras 
 de sangue obtém-se o soro, e a partir das amostras dos tubos com citrato de sódio obtém-se o 
 plasma pobre em plaquetas (FLEURY, 2019). 
 Figura 6 – Componentes sanguíneos no tubo com tampa amarela após submissão ao processo de centrifugação. 
 Teresina-PI, 2023. 
 Fonte : Laboratório de Nutrição Experimental (LANEX) – Departamento de Nutrição – Centro de Ciências da 
 Saúde (CCS) – UFPI, 2023. 
 O ativador de coágulo e gel separador inerte presente no tubo com tampa amarela atua 
 prevenindo a troca de substâncias entre as células sanguíneas e o soro, portanto, mantém as 
 características bioquímicas inalteradas por tempo satisfatório (FLEURY, 2019). 
 A amostra dos componentes sanguíneos presente no tubo com ativador de coágulo e 
 gel separador pode ser utilizada para análise da albumina e transferrina. A albumina sérica 
 pode ser obtida a partir do soro, para avaliação do estado nutricional geral do paciente, de 
 modo que os valores de referência se apresentam em >3,4g/dL (nutrido) e <3,4 g/dL 
 (desnutrido). A transferrina sérica também pode ser obtida a partir do soro, refletindo a 
 capacidade total de ligação do ferro à transferrina para diagnóstico e tratamento da anemia 
 ferropriva, de modo que os valores de referência se encontram em >200mg/dL (bem nutridos) 
 e <200mg/dL (desnutridos) (NAKAZORA, 2010). 
 Figura 7 – Componentes sanguíneos no tubo com tampa vermelha após submissãoao processo de centrifugação. 
 Teresina-PI, 2023. 
 Fonte : Laboratório de Nutrição Experimental (LANEX) – Departamento de Nutrição – Centro de Ciências da 
 Saúde (CCS) – UFPI, 2023. 
 O ativador de coágulo presente no tubo com a tampa vermelha atua estimulando a 
 liberação do fator de coagulação pelas plaquetas, que conseguinte deflagram as reações de 
 cascata do processo de coagulação, evitando assim hemólise causada pela coagulação 
 desigual e incompleta, conseguinte presença de partículas na superfície do soro (FLEURY, 
 2019). 
 Figura 8 – Componentes sanguíneos no tubo com tampa azul após submissão ao processo de centrifugação. 
 Teresina-PI, 2023. 
 Fonte : Laboratório de Nutrição Experimental (LANEX) – Departamento de Nutrição – Centro de Ciências da 
 Saúde (CCS) – UFPI, 2023. 
 O anticoagulante citrato de sódio presente no tubo com tampa azul mantém a 
 correlação entre o aditivo e sangue na proporção de 1:9, portanto atua evitando a ativação de 
 plaquetas e proporciona condições ideais para os testes tempo de protrombina - PT e tempo de 
 tromboplastina parcial ativado - TTPA (FLEURY, 2019). 
 O zinco é um metal de transcrição, analisado no tubo com tampa azul, cujas 
 concentrações triviais de absorção podem ser mensuradas por meio do plasma e eritrócito, de 
 modo que os valores de referência para zinco no plasma encontram-se entre 75 a 110 mg/dL, 
 e os valores de referência para eritrócito encontram-se entre 40 a 44 mg/dL. Entretanto, vale 
 ressaltar que esses parâmetros possuem baixa correlação com a excreção exógena e possíveis 
 inibidores da sua absorção, como cálcio, ferro e EDTA (COZZOLINO, 2020). 
 Figura 9 – Componentes sanguíneos no tubo com tampa roxa após submissão ao processo de centrifugação. 
 Teresina-PI, 2023. 
 Fonte : Laboratório de Nutrição Experimental (LANEX) – Departamento de Nutrição – Centro de Ciências da 
 Saúde (CCS) – UFPI, 2023. 
 O anticoagulante EDTA presente no tubo com tampa roxa não interfere na forma das 
 células sanguíneas ou no volume globular, portanto atua protegendo as células sanguíneas, 
 especialmente as plaquetas, consequentemente impede a agregação plaquetária (FLEURY, 
 2019). 
 A amostra dos componentes sanguíneos presente no tubo com EDTA pode ser 
 utilizada para análise dos linfócitos totais e proteína C-reativa ultrassensível - PCR-us. Os 
 linfócitos totais podem ser obtidos a partir das células brancas (leucócitos), classificadas com 
 linfócitos, monócitos ou granulócitos, para avaliar inflamação e infecção nos pacientes, de 
 modo que os valores de referência se apresentam em >1200céls/mm 3 (bem nutridos) e 
 <1200céls/mm 3 (desnutridos). A PCR-us pode ser obtida a partir da concentração de proteína 
 da amostra, para avaliar inflamação nos pacientes, de modo que os valores de referência se 
 apresentam em <10mg/L (sem presença de estado inflamatório) e >10mg/L (presença do 
 processo inflamatório) (NAKAZORA, 2010). 
 Figura 10 - Lavagem do componente sanguíneo com solução salina. Teresina-PI, 2023. 
 Fonte : Laboratório de Nutrição Experimental (LANEX) – Departamento de Nutrição – Centro de Ciências da 
 Saúde (CCS) – UFPI, 2023. 
 A lavagem da amostra é realizada três vezes com solução salina fisiológica 0,9% e 
 submissão à centrifugação, para controle de qualidade (BRASIL, 2014). 
 Figura 11 - Lavagem do componente sanguíneo com solução salina. Teresina-PI, 2023. 
 Fonte : Laboratório de Nutrição Experimental (LANEX) – Departamento de Nutrição – Centro de Ciências da 
 Saúde (CCS) – UFPI, 2023. 
 A centrifugação realizada para lavagem dos eritrócitos é feita a velocidade de 3500 
 RPM durante 10 minutos (BRASIL, 2014). 
 Figura 12 - Remoção da solução salina do componente sanguíneo. Teresina-PI, 2023. 
 Fonte : Laboratório de Nutrição Experimental (LANEX) – Departamento de Nutrição – Centro de Ciências da 
 Saúde (CCS) – UFPI, 2023. 
 A remoção da solução salina (sobrenadante) após a centrifugação é feita com pipeta 
 graduada em 1000dL (BRASIL, 2014). 
 Figura 13 - Componente sanguíneo para análise. Teresina-PI, 2023. 
 Fonte : Laboratório de Nutrição Experimental (LANEX) – Departamento de Nutrição – Centro de Ciências da 
 Saúde (CCS) – UFPI, 2023. 
 A amostra presente nos eppendorfs não deve permanecer a temperatura ambiente por 
 tempo superior a 8 horas, caso necessário preconiza-se o congelamento a temperatura -20°C, 
 e posterior descongelamento em temperatura ambiente. Contudo, algumas amostras podem 
 ser desprezadas, caso o transporte seja inadequado, a identificação esteja incorreta, o volume 
 de amostra esteja inadequado, haja presença de hemólise e o armazenamento inadequado 
 (FLEURY, 2019). 
 5 CONCLUSÃO 
 Mediante o exposto reitera-se a importância de biomarcadores nutricionais para 
 análise de macro e micronutrientes essenciais, como zinco, ferro, cobre e selênio, uma vez 
 que estes são específicos e refletem valores satisfatórios para a prática clínica, principalmente 
 quando combinados, entretanto, salienta-se a limitação deste quanto a sensibilidade para 
 alguns parâmetros, como excreção exógena e possíveis inibidores da absorção. Todavia, ao 
 observar as etapas da separação dos componentes sanguíneos e comparar os resultados 
 obtidos com os dados disponíveis na literatura, foi possível atingir o objetivo da prática. 
 REFERÊNCIAS 
 BRASIL. Imuno-hematologia laboratorial. Brasília: Ministério da Saúde, 2014. 
 COZZOLINO, S. M. F. Biodisponibilidade de nutrientes. 6 ed. Barueri: Manole, 2020. 
 FLEURY, M. K. Manual de coletas em laboratório clínico. 3 ed. Rio de Janeiro: Programa 
 Nacional de Controle de Qualidade, 2019. 
 FRITSMA G. Platelet structure and function. Clinical Laboratory Science . 2014. 
 GARZA B.V; ARVIZU G.B. Obtenção de componentes sanguíneos em bancos de sangue. 
 Rev Med Inst Mex Seguro Soc. México, 2016. 
 JUNQUEIRA, L. C. U.; CARNEIRO, J. Histologia básica. 11 ed. Rio de Janeiro: Guanabara 
 Koogan, 2008. 
 MESCHER A. L. Junqueiras’s Basic Histology . 13ª ed. Bloomington, Indiana: McGraw 
 Hill, 2013. 
 NAKAZORA, L. M. Avaliação nutricional e inflamatória em pacientes com afecções 
 cirúrgicas: comparação com o ângulo de fase. Florianópolis: Universidade Federal de Santa 
 Catarina, 2010. 
 ROSS, M. H. Atlas de histologia descritiva. Porto Alegre: Artmed, 2012. 
 WALLACH, J.B. Interpretação de exames laboratoriais. Guanabara Koogan, Rio de 
 Janeiro, 2013. 
 ZAGO M. A; FALCÃO RP; PASQUINI R. Tratado de Hematologia . Atheneus, São Paulo, 
 2013.