extração e caracterização das proteínas

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Extração e Caracterização de Proteínas
Objetivos: Separar a Caseína (proteína do
leite).
Desproteinizar parte do soro
Realizar técnicas qualitativas de
identificação de proteínas.
Proteína: Reações de Precipitação
Reações de Coloração
Extração
da
Caseína:
Principal proteína do Leite
Extraída por precipitação através
da diminuição do pH do meio
até atingir o pI da proteína
pH Leite = 6,6 - 6,8
pI Caseína = 4,6 
pI = ponto isoelétrico
é o pH em que as cargas
elétricas da proteína se
equivalem ( nº cargas + é igual
ao nº de cargas - )
*Quando o pI é atingido, a
proteína perde sua solubilidade e
ocorre a precipitação
Redução do pH do leite:
Quimicamente: -adição de ácidos:
acético, cítrico, lático entre outros.
Microbiologicamente
de microorganismos
produtores de ácidos.
-Preparar uma diluição de 100mL de leite
com 100 mL de água em béquer de 250mL
-Manter a solução em Banho-maria a 42°C por
60 minutos
-Adicionar, gota a gota, ácido acético 2N (~20-
40 gotas), agitando com bastão de vidro, até
precipitação da proteína
-Após a precipitação da caseína, manter em
repouso (3 min) para decantação
-Separar o soro filtrando-o em gaze para um
béquer de 250mL
Obtém-se, então:
Precipitado = CASEÍNA
Filtrado = (SORO) contém todos os demais
componentes do leite (lactose, sais minerais,
vitaminas, água, lactoalbumina e
lactoglobulina, exceto a caseína).
Desproteinização
do Filtrado:
Desproteinização = quebra
das ligações peptídicas por
ação de ácidos fortes em
grandes quantidades
(hidrólise ácida de
proteínas). 
É um procedimento
largamente empregado em
análises bioquímicas para
comprovar a presença de
proteínas.
Desproteinização do
Filtrado -
Procedimento:
Em Erlenmeyer de 50
mL, colocar:
2 mL de Filtrado (soro
do leite)
16 mL de H2SO4
2mL de Tungstato de
Sódio
Agitar e filtrar em
papel de filtro,
recolhendo a solução
em Erlenmeyer de
250mL
Essa solução é
desprovida de
proteínas = 
 DESPROTEINIZADO
Reações de Caracterização de Proteínas:
1) Precipitação com Reativos de Alcaloides (RA)
Reativos que podem ser usados: ácido pícrico, ácido
sulfossalicílico, ácido tânico e ácido fosfotúngstico.
Explicação: Os reagentes de alcaloides são ácidos (que
agem pelo seu ânion) e formam verdadeiros sais de
proteínas com os aminoácidos básicos (que agem pelo
seu cátion).
Aminoácidos Básicos:
Lisina, Histidina e
Arginina
2) Reação de Heller ou Xantoproteica
 Reagente: Ácido Nítrico
Explicação: Nesta reação forma-se um precipitado
branco devido a ação do ácido nítrico que como ácido
mineral forte desnatura as proteínas, tornando-as
insolúveis. A cor do anel (amarelo-esverdeado) é devida
a formação de nitrocompostos pela ação do ácido nítrico
sobre os anéis aromáticos ou heterocíclicos dos
aminoácidos tirosina, triptofano e fenilalanina presente
nas proteínas.
3) Reação de Millon
Reativo de Millon
Explicação: O reagente de Millon é uma mistura de
nitrato mercúrico e mercuroso e nitritos que produz
uma cor vermelha quando aquecidos com compostos
contendo grupos fenólicos. A reação envolve
mercuração de nitração ou nitrosação.
4) Reação de Biureto
Reativo de Biureto
Explicação: Substâncias que contém várias ligações
peptídicas em sequência, reagem com sais de cobre em
meio alcalino, formando um complexo corado roxo, a
intensidade da cor é proporcional à concentração. Esta
reação também é chamada de “Prova de Biureto” e
pode ser usada para dosagens de proteínas.
Parte Experimental:
Amostra F : Filtrado
Amostra D : Desproteinizado
Reações: 
1- Precipitação com Reativos de Alcaloides (F1 e D1);
2- Reação de Heller ou Xantoproteica (F2 e D2);
3- Reação de Millon (F3 e D3);
4- Reação de Biureto (F4 e D4).
Experimento 1: Precipitação com Reativos de Alcaloides
Tubo de ensaio F1: Colocar 2 mL do filtrado e adicionar
30 gotas de ácido fosfotúngstico.
Tubo de ensaio D1: Colocar 2 mL do desproteinizado e
adicionar 30 gotas de ácido fosfotúngstico.
Observar os resultados : Formação de sais de proteínas
Experimento 2 : Reação de Heller ou Xantoproteica
Tubo de ensaio F2: Colocar 2 mL de ácido nítrico
concentrado e adicionar 2 mL do filtrado, lentamente
pelas paredes do tubo.
Tubo de ensaio D2: Colocar 2 mL de ácido nítrico
concentrado e adicionar 2 mL do desproteinizado
lentamente, pelas paredes do tubo.
Observar os resultados : Anel de Coloração Amarela 
Experimento 3 : Reação de Millon
Tubo de ensaio F3: Colocar 2 mL do filtrado e
adicionar 6 gotas do reativo de Millon. Em seguida
aquece-se a solução.
Tubo de ensaio D3: Colocar 2 mL do desproteinizado e
adicionar 6 gotas do reativo de Millon. Em seguida
aquece-se a solução.
Observar os resultados : Formação de um precipitado
branco que pelo aquecimento torna-se avermelhado.
Experimento 4 : Reação de Biureto
Tubo de ensaio F4: Colocar 2 mL do filtrado e adicionar
4 mL do rativo de Biureto.
Tubo de ensaio D4: Colocar 2 mL do desproteinizado e
adicionar 4 mL do reativo de Biureto.
Observar os resultados : Forma-se um complexo de
coloração (lilás até violeta.