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Universidade Federal de Uberlândia
Instituto de Química
Pós-Laboratório
Reações de Caracterização de proteínas
Uberlândia - MG
2022
Questões Pós-Laboratório:
1. Descreva o que foi observado no seu experimento nas tabelas abaixo e coloque a(s)
foto(s) que comprove(m) tais resultados. Por fim, discuta e explique o resultado
(positivo ou negativo) obtido em cada amostra.
Observa-se que as reações de biureto quando reagem com a proteína, os íons de cobre
dispostos do biureto em solução aquosa interagem com os átomos de nitrogênio das
ligações peptídicas e forma-se o complexo da cor lilás.
Sabe-se que a ninidrina é um oxidante fraco e que interage com os grupos de amino livre
das proteínas e do NH2 livre do aminoácido, formando a amônia, o aldeído e o gás
carbônico. Dessa forma, observa-se a reação acontecer mudando a cor para o
roxo-azulado.
Sabe-se que as reações xantroproteica acontecem devido a característica das proteínas que
têm anéis de fenil, sendo assim o ácido nítrico reage com o anel fenil contendo o composto
nitro aromático da cor amarela, ao adicionar a álcali esses compostos vai se transformar
nos nitrocompostos formando os sais de coloração alaranjada mais intensa, como
observa-se no tubo 4 que contém a tirosina.
Utiliza-se os aminoácidos sulfurados para a verificação da presença dos aminoácidos
sulfurados na proteína, isso ocorre com a presença do enxofre em alguns aminoácidos
como a cisteína, cistina e metionina. O enxofre, presente nas moléculas de aminoácidos, é
convertido a sulfeto por ação de bases e do calor, que ao reagir com acetato de chumbo,
forma o sulfeto de chumbo, deixando na cor preta/cinza.
2. A ovoalbumina presente na clara do ovo e o colágeno presente na gelatina contêm
tirosina ou triptofano? Explique.
Sabe-se que as reações xantroproteica acontecem devido a característica das proteínas que
possuem anéis de fenil e dessa forma, o ácido nítrico reage com o anel fenil contendo o
composto nitro aromático da cor amarelo. Ao realizar a reação xantoproteica concluiu-se
que a ovoalbumina e o colágeno contêm tirosina, pois ambos os tubos ficaram com a
coloração amarela após a reação. Além disso, a clara de ovo é rica em triptofano,
entretanto, o colágeno presente na gelatina contém todos os aminoácidos essenciais, com
exceção do triptofano.
3. A ovoalbumina presente na clara do ovo e o colágeno presente na gelatina contém
cisteína e cistina? Explique.
Para verificar a presença de aminoácidos sulfurados na proteína observa-se o enxofre
presente em aminoácidos como cisteína, cistina e metionina. Pois, o enxofre presente em
moléculas de alguns aminoácidos, é convertido a sulfeto por ação de bases e do calor.
Esse, por sua vez, reage com acetato de chumbo, formando sulfeto de chumbo (PbS),
deixando solução com uma cor cinza escuro. Logo, notou-se que no tubo da clara de ovo
(ovoalbumina) possui cisteína e cistina pois ocorreu reação obtendo a coloração cinza
escuro, já no tubo da gelatina (colágeno) não houve mudança de cor, dessa forma, não
contém cisteína e cistina.
4. Todas as reações testadas em aula prática, também podem detectar aminoácidos
(além de proteínas)? Explique.
Nem todas as reações testadas em aula prática podem detectar aminoácidos, por exemplo a
reação do biureto que não detecta aminoácido mas sim, peptídeo ou polipeptídeo ou
proteína. Ademais, a caracterização das proteínas é baseada em algumas características da
molécula, tal como a presença das ligações peptídicas, a presença de aminoácidos
aromáticos ou de grupos R, fenólicos, evidenciadas pela afinidade específica que essas
moléculas possuem a certos compostos.
5. A pele dos seus dedos pode ficar manchada em dois dos testes realizados neste
experimento.
(a) Por que a ninhidrina causa manchas azul-púrpura?
Porque a sua reação com os aminogrupos terminais das moléculas de lisina presentes no
colágeno é suficientemente sensível, ocasionando manchas azul-púrpura.
(b) Por que o ácido nítrico concentrado causa manchas amarelas?
O ácido nítrico concentrado reage com o anel fenil para dar um composto nitro aromático
de cor amarela e as manchas amarelas causadas são o resultado da reação das
xantoproteínas.
https://pt.wikipedia.org/wiki/Lisina
6. Existiria alguma biomolécula ou substância que poderia dar “falso-positivo” em
algum destes 4 testes (Biureto, Ninhidrina, Xantoproteica e Sulfurados)? Se sim,
explique e exemplifique.
Sim, em todos os testes feitos em sala de aula poderia dar falso positivo. A seguir, citarei um
exemplo do teste do biureto como falso positivo.
O Teste do Biureto é geral para proteínas e peptídeos com mais de dois aminoácidos. A
reação do Biureto é o resultado da formação de um complexo entre Cu2+ e as proteínas ou
peptídeos com mais de dois aminoácidos. As ligações peptídicas são ligações amida, e o par
de elétrons dos átomos de nitrogênio das amidas encontram-se disponíveis, podendo servir de
ligante para o átomo de cobre II. Um exemplo dessa substâncias é a melanina que dá
falso-positivo para reação com biureto.
Os métodos estão sujeitos a muitos interferentes, onde pode apresentar uma lentidão na
reação com alteração de cor, a concentração da biomolécula e absortividade específica, pode
variar para diferentes proteínas.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
BARREIROS, André Luís Bacelar Silva; BARREIROS, Marizeth Libório.
AMINOÁCIDOS, PEPTÍDEOS E PROTEÍNAS EXPERIMENTAL. In: QUÍMICA de
Biomoléculas. [S. l.: s. n.], 2012. Disponível em:
https://cesad.ufs.br/ORBI/public/uploadCatalago/12221710072012Quimica_Biomoleculas_a
ula_5.pdf. Acesso em: 2 nov. 2022.
ZAIA, Dimas A. M.; ZAIA, Cássia Thais B. V.; LICHTIG, Jaim. DETERMINAÇÃO DE
PROTEÍNAS TOTAIS VIA ESPECTROFOMETRIA: VANTAGENS E
DESVANTAGENS DOS MÉTODOS EXISTENTES, [s. l.], 1998. Disponível em:
https://www.scielo.br/j/qn/a/pnCxFMPrQkjW5vj38BT5kbG/?lang=pt&format=pdf. Acesso
em: 2 nov. 2022.