Exercicios de revisao - biomol

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QBQ1354 – Biologia Molecular 
 
Exercícios Revisão 
 
1. Um DNA linear tem o mapa de restrição indicado abaixo 
 
Transforme esse DNA numa molécula circular e determine o tamanho dos fragmentos 
gerados por digestão independente com: (a) EcoRI; (b) BamHI e (c) mistura de EcoRI + 
BamHI. 
 
2. Após digestão, os produtos resultantes foram analisados por eletroforese em gel de 
agarose. Ao término da corrida, o DNA foi corado com brometo de etídio, obtendo-se o 
padrão de bandas mostrado na Figura abaixo. 
Perguntas: 
(a) O Polo negativo da eletroforese corresponde à posição próxima aos poços ou 
ao término do gel? 
(b) No poço B foi aplicada a digestão com qual enzima de restrição? 
(c) No poço C foi aplicada a digestão com enzima de restrição? 
(d) Levante hipóteses sobre a amostra que foi colocada no poço A. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
3. (a) Explique por que a enzima de restrição BamHI, derivada da bactéria Bacillus 
amyloliquefaciens, não hidrolisa o DNA da bactéria que a produz? 
(b) Qual a sequência de reconhecimento da enzima de restrição BamHI? 
(c) Após hidrólise do DNA, são geradas extremidades cegas ou extremidades 
coesivas? 
 
4. Justifique a afirmação “Para aplicar a PCR é necessário ter conhecimento prévio da 
sequência nucleotídica do gene que se deseja amplificar (sequência alvo)”. 
 
5. (a) Cite um dos procedimentos para tornar uma bactéria “competente” para receber 
o DNA plasmidial. 
(b) Qual o resultado na bactéria do procedimento escolhido? 
(c) Descreva o processo da eletroporação para a transformação de bactéria com DNA 
plasmidial. 
EcoRI EcoRI BamHI BamHI 
0 1 4,5 6,0 8,5 10 kb 
Sítios para as enzimas de restrição 
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6. No plasmídeo representado abaixo foi clonado um gene de Trypanosoma cruzi de 2 
Kb, na região indicada pela seta (entre as posições 46 e 55 do sítio múltiplo de 
clonagem). 
(a) Qual o tamanho (em Kb) do DNA total do plasmídeo recombinante? 
(b) Após purificação do DNA do plasmídeo recombinante, quais enzimas de restrição 
podem ser usadas para retirar o gene do T. cruzi? 
(c) Qual o tamanho esperado dos produtos da digestão que você indicou no item (b)? 
 
 
7. Sendo conhecida a sequência nucleotídica do gene de T. cruzi, que procedimento 
você deve adotar para verificar se na sequência desse gene existe a sequência 
reconhecida pelas enzimas de restrição que você escolheu para retirar o gene? 
(resposta (b) da questão 4). 
 
8. Cinco mulheres alegaram maternidade de uma determinada criança e, como parte 
dos exames, o sequenciamento das bases em um local específico do DNA identificou 
a mãe biológica. Em uma das fitas do DNA da criança o local apresentou a seguinte 
sequência: GTACTCGA. 
O padrão de bandas da sequência de oito bases deste sítio, de uma das duas fitas de 
DNA de cada mulher, está representado abaixo. Escreva na folha avulsa a alternativa 
cujo padrão com as oito bases corresponde ao da verdadeira mãe da criança. 
 
9. (a) Por que é necessária a presença de um iniciador (“primer”) na reação de 
sequenciamento do DNA pelo método de Sanger? 
(b) Por que são necessários dois iniciadores para realizar a PCR? 
 
10. Num hospital foi isolada uma bactéria mutante de Klebsiella pneumonia que é 
resistente a três antibióticos. A equipe de médicos quer identificar a sequência 
nucleotídica dos genes mutados. 
Proponha uma abordagem experimental que a equipe de médicos deve seguir para 
obter as respostas pretendidas. 
Enumere as etapas desta abordagem. 
 
Informações disponíveis: 
 A sequência do genoma total de Klebsiella pneumonia selvagem (não 
mutante), sensível aos três antibióticos, está disponível no banco de dados do 
GenBank. 
 Esse genoma possui 5,3 milhões de pares de bases (5,3 Mega pares de bases), e 
não é considerado grande. 
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11. Esquematize a reação catalisada pela transcriptase reversa. Qual o papel desta 
enzima no ciclo de vida do HIV? 
NOTA: Estudar características de virus! 
 
12. Você recebeu folhas de duas plantas, uma selvagem (normal) e outra transgênica 
que apresenta resistência a insetos por expressar o gene Cry da bactéria Bacillus 
thuringiensis. 
(a) Por que a proteína Cry confere resistência a insetos? 
 
Para verificar qual das duas folhas é transgênica para o gene Cry são necessárias 
várias etapas experimentais. 
Extrair o DNA das duas folhas. 
(b) Por que extrair o DNA e não o RNA das folhas?