Analisar TBARS

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Analisar TBARS (substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico) é uma técnica comum para avaliar a oxidação lipídica em alimentos, incluindo ingredientes de oliva liofilizada. 
Materiais e Reagentes
· Amostras de oliva liofilizada
· Ácido tiobarbitúrico (TBA)
· Ácido tricloroacético (TCA)
· Ácido clorídrico (HCl)
· Butanol
· Destilador de água
· Espectrofotômetro
· Banho-maria
· Centrífuga
· Tubos de ensaio
· Pipetas e micropipetas
Soluções
· Solução de TCA 20% (m/v): Dissolver 20 g de TCA em água destilada até completar 100 mL.
· Solução de TBA 0,67% (m/v): Dissolver 0,67 g de TBA em 100 mL de água destilada.
· Solução HCl 0,25 N: Diluir 2,08 mL de HCl concentrado em água destilada até completar 1 L.
Procedimento
Preparação da Amostra:
Moer as amostras de oliva liofilizada até obter um pó fino. 
1. Pesar aproximadamente 1 g da amostra em um falcon 15ml.
Extração dos Compostos Reativos:
2. Adicionar 5 mL de solução de TCA 20% ao tubo de ensaio contendo a amostra. Homogeneizar bem a mistura (vórtex 15 s).
Centrifugação:
1. Centrifugar a mistura a 3000 rpm por 10 minutos.
2. Coletar o sobrenadante (líquido acima do precipitado) em um novo tubo de ensaio de vidro.
Reação com TBA:
3. Adicionar 4 mL da solução de TBA 0,67% ao sobrenadante. Misturar bem ( vórtex 40s.).
Aquecimento:
4. Aquecer os tubos de ensaio em banho-maria a 95°C por 60 minutos para permitir a formação do complexo TBA-MDA (malondialdeído).
Resfriamento:
5. Resfriar os tubos rapidamente em água corrente por 5 minutos.
Análise de Proteina
6. Após resfriamento Retirar 3 ml, guardar no congelador para análise de proteína. Bradford
7. Após resfriamento Retirar 2ml colocar em tubo de vidro de 15 ml 
Extração com Butanol:
8. No tubo de 15 ml, Adicionar 4 mL de butanol ao tubo de ensaio. Vórtex por 15s (Agitar vigorosamente para extrair o complexo TBA-MDA para a fase orgânica).
Centrifugação:
9. Centrifugar novamente a 3000 rpm por 10 minutos á 4ºC para separar as fases.
10. Coletar a camada superior de butanol que contém o complexo TBA-MDA. E coloco em outro (tubo de vidro)
Leitura no Espectrofotômetro:
1. Ler a absorbância da solução extraída em butanol a 532 nm usando um espectrofotômetro.
· Usar butanol puro como branco na calibração do espectrofotômetro.
Cálculo dos Resultados
Observações
Certifique-se de que todas as vidrarias e reagentes sejam de alta pureza para evitar contaminações que possam afetar os resultados.
Execute todas as medidas em duplicata ou triplicata para garantir a reprodutibilidade dos resultados.
Armazene as amostras liofilizadas em condições adequadas (local seco e fresco) para evitar qualquer alteração antes da análise.
Ex :
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