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Hemograma Proteínas plasmáticas (7%) ▪ Albuminas ▪ Globinas ▪ Lipoproteínas Anti-coagulante: Edta – menos alterações morfológicas e nas células, remove o cálcio necessário à coagulação Heparina – Pode ser utilizados em outras espécies animais além dos mamíferos Citrato – Utilizado para testes de coagulação (indicado para hemograma em algumas espécies, como o avestruz) Tempo de espera do exame: Ideal é ser levado imediatamente para o laboratório, mas como a maioria das vezes não é possível... Se demorar + 3 horas a amostra deve ficar refrigerado, já com o esfregaço (pois o melhor esfregaço é com o sangue recém- colhido e mandar ambos para o laboratório) Coleta de amostras Sangue Local: Preferencialmente jugular, pois é uma amostra de sangue central ▪ Suíno: Veia cava anterior (local que necessita ter mais experiencia com a espécie) ou veia da margem da orelha (capa de gordura impede o acesso na veia jugular) ▪ Coelho: Veia da margem da orelha ▪ Cães com pescoço curto, grosso e muito peludo: veia cefálica ▪ Bovinos: Veia da cauda Equipamentos Agulhas descartáveis: ▪ 20 G melhor (0,9 x 40mm) ▪ 19 G – grandes volumes (1,1 x 40mm) ▪ 21 G – Cães e gatos muito pequenos (0,8 x 40mm) Agulhas menores: promovem hemólise Agulhas maiores: hematomas Tipos de recipientes Tubos com tampa de borracha: padrão de cores indicam qual anticoagulantes/preservativo EDTA – hematologia Citrato – testes de coagulação Heparina – obtenção do plasma Fluoreto – mensuração de glicose Sem aditivo – obtenção de soro Plasma = Fatores de coagulação e proteínas de coagulação Soro = Obtido após a coagulação, não se tem as proteínas de coagulação, pois foram consumidos para a formação do plasma Método: Venopunção com seringa e agulha; desacoplar a agulha e colocar a seringa dentro do tubo e transferir rapidamente escorrendo pela parede do tubo, tampar e homogeneizar (15 vezes) Tubo à vácuo (“Vacutainer”) Método: Venopunção com agulha de 2 pontas, uma ponta colhe o sangue e a outra perfura o tubo Vantagens: Menor chamce de coagular; não requer seringa; mais seguro Desvantagens: Caro, mais sujeito a hemólise (turbulência), inadequado para pequenos animais, pois o vácuo pode ocasionar colabamento de veias Seringas plásticas para coleta de sangue “monovette” Confortáveis de aspirar e contêm anticoagulante Se convertem em tubos de coleta Vantagens: Barato, sem necessidade de agulhas especiais, menor risco de hemólise pois não há vácuo, método para equinos e para rebanho Desvantagens: Pouca variação de tubos pediátricos (pequenos volumes) Seringas conversíveis/tubos a vácuo “S- monovette” Requer agulhas de ponta dupla Não suja as mãos com sangue Mais caro Pouca disponibilidade de tubos pequenos Escolha na medicina humana Coleta de sangue A ordem para se coletar várias amostras de um mesmo paciente, durante uma mesma punção é a seguinte 1. Tubo para hemocultura 2. Tubo sem aditivo 3. Tubo com citrato 4. Tubo com heparina 5. Tubo com EDTA 6. Tubo com fluoreto de sódio Exame hematológico Primeira premissa: sangue obtido e transferido para o tubo com anticoagulante não tenha coagulo Segunda premissa: Conservar sempre com a proporção correta entre sangue e anticoagulante Excesso de anticoagulantes pode acarretar: Destruição de plaquetas com resultados falsos (plaquetopenia) Degeneração citoplasmática dos neutrófilos, presença de corpúsculos intracitoplasmáticos que podem ser confundidos com as bacterianas ou de outra etiologia Vacuolização de monócitos Destruição e lise das hemácias com resultados falsos de hemoglobina e hematócrito *Na etiqueta do frasco existe uma faixa preta, que indica a quantidade exata de sangue *Amostra tem que ser levada rapidamente para o laboratório, o contato prolongado com EDTA pode induzir a formação de agregados celulares e alterar os resultados das contagens *Preservar a amostra a uma temperatura de 4°C até no máximo 24 horas, esfregaço deve ser feito até no máximo 3 horas Hematopoese Originam-se do mesênquima do saco vitelino (ilhotas eritroblásticas) Pré-natal = Fígado, baço, timo, linfonodos e início da medula óssea Após 21 dias fígado, baço e medula Extravascular em mamíferos e intravascular em aves Medula é hematopoiética do nascimento até a morte Células totipotentes Equilíbrio entre a formação e destruição das células Mais primitiva Tem a capacidade de se renovar Maturação dos eritrócitos (hemácias) Envolve síntese de hemoglobina e formação do disco bicôncavo (em algumas espécies) Eritroblasto > pró-eritroblasto > eritroblasto policromático > eritroblasto ortocromático > reticulócito > eritrócito Eritroblasto ortocromático para reticulócito: Desfragmentação do núcleo, apresenta fragmentos de DNA Eritrócitos Células bicôncavas, com grande área para trocas gasosas Carrear Hb e O2 Hemoglobina que determina acidofilia (coloração) Anisocitose (diferentes tamanhos de hemácias na amostra), poiquilocitose (ou pecilocitose) – diferentes formas de hemácias Meta-hemoglobina redutase que faz a redução de Fe Anidrase carbônica, quebra CO2 + H2O = HCO3 + H+ Destruição intravascular e extravascular pelos macrófagos do baço, medula e fígado Produção Diminuição da pressão arterial de O2 – estímulo para a produção e liberação de hemácias Hemoglobina Carrear O2 e Fe Conjugado proteico Tipos: Embrionária, Adulta e infantil Degradação: São degradadas pelo macrófago e a hemoglobina fica livre de 1 a 7h na circulação, depois é metabolizada É quebrada em duas porções heme + globina Globina é desintegrada e os aminoácidos são reutilizados para formar outras proteínas Heme e Fe são reutilizados Heme é convertido em bilirrubina que fica na circulação, se ligando na albumina Bilirrubina + albumina = bilirrubina indireta ou bilirrubina não conjugada Essa bilirrubina indireta é metabolizada pelo fígado, e vai ser conjugada com ác. glicurônico que a transforma em bilirrubina direta (ou conjugada) Essa bilirrubina direta é hidrossolúvel (mais facilmente excretável), que vai ser excretada pela bile, que vai dar coloração nas fezes (urobilina e extercobilina) e na urina (urobilinogênio) Anemia Diminuição do número de hemácias na circulação, hemoglobina e da porcentagem de hematócrito Sinais clínicos: ▪ Mucosa pálida ▪ Apatia ▪ Cansaço ▪ Anorexia ▪ Dispneia ▪ Diminuição de temperatura (graves) Classificação patofisiologica Anemia relativa: Ocorre em fêmeas gestantes e neonatos após fluidoterapia – SUPER HIDRATAÇÃO Parece q esta anêmico, mas não está, pois há um aumento de volume de líquido na circulação o que faz com que as hemácias fiquem mais diluídas Anemia absoluta: Deve ser investigada clinicamente, pois aqui ocorre a perda de hemácias Causas: Hemorragia aguda ou crônica, hemólise, intra e extravasculares Aplasia ou hipoplasia seletiva ou generalizada de medula, incluindo deficiência, defeito na utilização de nutrientes essenciais para produção de hemácias Classificação à resposta medular Regenerativa: Medula está respondendo ao processo de anemia, produzindo e liberando as células mais jovens (reticulócitos – é capaz de realizar o transporte de O2) Inicia a produção de novas células, por causa da perda, mas ela libera as células antes da maturação Reticulocitose – aumento de reticulócitos na circulação no exame de esfregaço sanguíneo (reticulócito maior que a hemácia e esférica) Equinos não faz a liberação Não regenerativa: Não existem reticulócitos Ocorre geralmente por lesões medulares, causadas por tumores, radiação e infecção. Morfologia: Sempreconfirmar no exame microscópico das hemácias Classificação índices hemacimetricos Volume corpuscular médio (VCM), classifica as anemias em: Macrocíticas: Hemácias em tamanho maior Microcíticas: Tamanho menor Normocíticas: Tamanho normal Concentração de hemoglobina corpuscular média (CHCM): Em relação a coloração das hemácias Normocrômicas: Normal Hipocrômicas: Menor quantidade de hemácias e coloração pálida *Não existe anemia hipercrômica, pois as hemácias possuem um limite para hemoglobina e não pode ter uma quantidade maior Tipos de Anemias Anemia Macrocítica e Hipocrômica Remissão de perdas agudas de sangue ou hemólises agudas Grau depende da severidade da anemia e da resposta medular frente a presença de reticulócitos Reticulocitose = aumenta o VCM e diminui o CHCM Anemia Normocítica e Normocrômica Depressão seletiva da eritropoiese (quando somente a linhagem de hemácias é comprometida) em doenças crônicas como infecções, perda hiperaguda de sangue, nefrite, uremia, neoplasias e certas alterações endócrinas Resposta reticulocitária é ausente ou insignificante Anemia Microcítica e Hipocrômica Associada a deficiência ou falha no uso de ferro Perda crônica de sangue, deficiência de cobre e piridoxina (VitB6) são sinais dessa anemia Parasitoses podem ser causas Anemia microcítica normocrômica e normocítica hipocrômica São encontradas durante o desenvolvimento das anemias por deficiência de ferro Patofisiologia: 1. Perda aguda e crônica de sangue Inicialmente os parâmetros se apresentam normais, por causa dos mecanismos compensatórios, como por exemplo a contração do baço para liberar eritrócitos na circulação para compensar a oxigenação Fluidos extravasculares se movem para espaço intravascular Após dois dias ocorre uma anemia normocítica e normocrômica Reticulocitose inicia-se após 72 a 96 horas aproximadamente, vista após 3° dia Manifestações variam de acordo com o grau de hemorragia 2. Perdas crônicas de sangue Geralmente anemia ferropriva (baixos níveis de ferro), portanto é microcítica e hipocrômica Suínos possuem naturalmente deficiência em ferro Anemias hemolíticas Ocorre quando a meia vida da hemácia é reduzida, devido a defeitos na célula ou alterações nos capilares (microvasculares) Pode ser intravascular (hemoglobinemia, hemoglobinúria e icterícia) ou extravascular São geralmente regenerativas, de origem infecciosa ou não-infecciosa Normalmente macrocítica e hipocrômicas Anemia hemolítica imunomediada (AHIM) Normal em cães e gatos, devido a dirofilariose, linfoma, lúpus eritematoso, drogas ou medicamentos Ocorre a presença de esferócitos (sem palidez central), células fantasmas (só se vê a membrana e uma parte da hemácia) e auto aglutinação Anemia hemolítica por corpúsculo de heinz Ocorre por haver alguns compostos oxidantes na hemoglobina, fazendo com que elas precipitem Pode acontecer quando se tem a ingestão de cebola e acetominofeno (paracetamol) Podem ser encontrados excentrócitos (células que apresentam a palidez central fora do centro) Comuns em gatos com diabetes mellitus, doenças hepáticas e hipertireoidismo Anemias hemolíticas ▪ Infecção de heamobartonela felis e H. canis ▪ Babesiose ▪ Deficiencia de piruvato quinase e fosfofrutoquinase – enzimas necessárias para fazer as hemácias ▪ Hemólise mecânica Anemia por defeito de maturação Padrão não regenerativo, não vai ver células de cores diferentes (ausência de policromasia e reticulocitose) Produção de hemácias ineficientes Classificados por defeito de maturação nuclear (não conseguem chegar até o final da maturação) e citoplasmática Podem aparecer em defeitos na medula óssea Anemia com hipoplasia medular generalizada Todos os tipos celulares serão atingidos, pois a medula óssea vermelha está hipoplásica Citotoxidade generalizada pode ser ocasionada por: Agentes infecciosos: Vírus da leucemia felina ou erliquiose Tóxicos: Estrógenos e quimioterápicos que são utilizados para o tratamento de câncer Anemias mielotísicas Doenças neoplásicas ou não neoplásicas (mielofibrose que ocorre na radiação ou na intoxicação por estrógeno) Com relação a resposta medular Anemias regenerativas Produção pela medula óssea aumentada, e liberação de células mais jovens (policromatofilia) e aumento de reticulócitos (reticulocitose) Sempre que houver aumento de policromasia deve-se indicar a contagem de reticulócitos (coloração de azul de cresil brilhante para a identificação e contagem, reticulócitos possuem fragmento de DNA no interior e geralmente são maiores) Anemias não regenerativas Ocorrer por perda sanguínea ou hemólise, apresentam células normocíticas e normocrômicas Temporária pois somente após 3 dias que a medula responde à anemia Policitemia Aumento do número de hemácias na circulação Relativa: Aumento do Hematócrito - Ht (% de hemácias em um determinado volume de sangue) sem o aumento no número de hemácias Ocorre por causa da perda de volume de líquido, pois o sangue está mais concentrado (Ex: animal pode estar desidratado) Absoluta: Aumento do Ht por um aumento verdadeiro no número das hemácias (AUMENTO DE PRODUÇÃO) Homogeneização sanguínea Plasma Hemolisado = plasma avermelhado Hematócrito (volume globular) Sangue de caprinos, centrifugar por 15 minutos outros animais 5 minutos 3 divisões: Células leucocitárias, células vermelhas e plasma (ideal que seja amarela palha, claro) – se estiver muito amarelado = ictérico Plasma amarelo mais “escuro” é normal em equinos Lipemia = Plasma mais leitose Na % despreza-se a parte dos botões leucocitários Proteínas plasmáticas por refratometria É possível saber a quantidade e soluto presente no plasma, o que quer dizer o volume de líquido que o animal tem no corpo Também é possível saber a densidade urinária pelo refratômetro Antes de usar verificar se o aparelho está zerado Pegar o plasma do capilar que foi usado no hematócrito Análise microscópica das hemácias Análise no esfregaço sanguíneo, com corantes como Leishman, GIemsa, Panótico, Rosenfeld, que possuem corantes ácidos e básicos Compostos básicos ligam-se ao corante ácido – coloração vermelha Compostos ácidos se ligam ao corante básico – coloração azul Anisocitose Variação no tamanho das hemácias, checa-se com o VCM para verificar se a anisocitose é normocitose, macrocitose ou microcitose O tamanho normal das hemácias pode variar dependendo da espécie *Anisocitose presente, pode ser que tenha reticulocitose em conjunto Aumento na variação do tamanho das hemácias é geralmente associado a presença de hemácias jovens, que possuem um tamanho maior Policromasia ou policromatofilia Cores diferentes, checar-se com o CHCM, apresentando normocromia ou hipocromia Poiquilocitose Eritrócitos com formas diferentes Acantócitos: Hemácias com espículas em tamanhos variados, ocorre em doenças de fígado e baço Acuminócito: Forma de fuso, normal em caprinos Dacriócito: Formar de lágrima, indica desordens mieloproliferativas Target cell: Forma de alvo, indica deficiência de ferro, doenças no baço e do fígado Drepanócito: Forma de foice, rara Crenada: Forma de engrenagem de relógio, ocorre em linfoma, glomerulonefrite e cavalos após exercícios ou falha técnica (quando o sangue fica muito tempo em repouso em temperatura ambiente, pois a hemácia perde líquido para o meio externo) Ovalócito: Deficiência na parede celular, devido a falta de determinadas proteínas, normal para aves, répteis e canelídeos Knizócito: Forma de cesta, quando o organismo faz a resposta de anemia emcães Esquizócitos: Fragmentos de hemácias, ocorre em trauma, nefrose e neoplasia Estomatócitos: Forma de boca (“sorriso”), ocorre em cães com anemia crônica, mas é normal em bovinos e ovinos Corpúsculos de Heinz: Precipitação de hemoglobina, normal em felinos em até 5% em felinos, em cães é incomum, ocorrem por intoxicação por paracetamol, cebola Plaquetas Na medula óssea, tem os precursores = Megacarioblasto – Prómegacariócito – Megacariócio Megacariócito é grande e emite “braços” para dentro dos vasos sanguíneos e começa a fragmentar o seu citoplasma, e os fragmentos dão origem as plaquetas Produção é regulada pela trombopoetina (derivada do endotélio vascular, fígado e fibroblastos) Função: ▪ Manutenção da integridade vascular ▪ Formar tampão plaquetário para hemostasia ▪ Agir como pró-coagulante da membrana lipídica, formando fibrina ▪ Age na cicatrização vascular produzindo o crescimento derivado de plaquetas (FCDP) ▪ Estimulam a migração de células endoteliais e produzem músculo liso ▪ Desempenham papel fundamental na inflamação, pois liberam substâncias vasoativas, que modulam os neutrófilos ▪ Possuem distribuição homogênea ou em grumos, e fazem satelismo em volta de neutrófilos. As plaquetas gigantes são mais funcionais pois estão ativadas ▪ Destruídas por macrófagos e as senis são sequestradas pelo baço e fígado Trombocitose Aumento de plaquetas Ocorre por 3 mecanismos: Essencial ▪ Distúrbio mieloproliferativo raro ▪ Associado a sangramentos ▪ Cães de meia idade ou idosos ▪ Em casos de anemia não regenerativa ou regenerativa estão presentes macroplaquetas ocasionais Secundária ▪ Aumento transitório das plaquetas (Ex: Neoplasia como linfoma, melanoma, mastocitoma, mesotelioma) ▪ Distúrbios gastrointestinais (Ex: Pancreatite, hepatite, doença intestinal inflamatória, colite) ▪ Doenças imunomediadas, hemorragias e traumatismos Fisiológica Aumento da mobilização de plaquetas em compartimentos de reservas (em casos de emergências hemorrágicas) – compartimento esplênico e não esplênico (pulmões) Trombocitopenia Diminuição do número de plaquetas no sangue. Apresentam petéquias como sinais clínicos Produção anormal: Distúrbio medular, aplasia, hipoplasia pancitopenia (diminuição de todas as células) Devido a fármacos citotóxicos (Ex: quimioterápicos), infiltração medular (transformação da medula óssea pela amarela, em caso de cães idosos), megacariocitopoese ineficiente devido a síndroma mielodisplásica Remoção acelerada: Destruição imunomediada por fármacos, infecções e autoanticorpos, ou remoção não imunológica que ocorre na CID, vasculite, neoplasias, infecção e sangramentos Diagnostico de hemograma Hematócrito abaixo de 15 – necessário transfusão HCM – hemoglobina corpuscular média Eritrócitos com um número próximo ao normal, indicação 6 (5,5 – 8,5) PPt (Proteínas plasmáticas totais) – está alta, o que pode indicar que o sangue está hemoconcentrado, possível indicação de desidratação Animal com possível anemia, com níveis baixos de eritrócitos, hematócrito e hemoglobina Anemia normocítica pois VCM dentro dos padrões, e hipocrômica pois CHCM abaixo dos níveis padrões Observação: Anisocitose (hemácias com tamanhos diferentes) discreta por macrocitose e policromasia Indica-se a realização do teste de contagem de reticulócitos! Anemia normocítica hipocrômica Plaquetas muito abaixo do normal – indicação de plaquetopenia ou trombocitopenia Animal possivelmente desidratado, sangue hemoconcentrado Após a hidratação repetir o exame para verificar se há uma anemia, a para descobrir a causa dos outros valores aumentados (hematócrito em valores dentro do limite) Plaquetas com observação de “agregados plaquetários” isso quer dizer que na lâmina foi visualizado elas “juntas” não tendo um valor certo para a contagem de plaquetas, valor foi subestimado Anemia normocítica hipocrômica Plaquetas com discreta anisocitose Anemia macrocítica hipocromica Hematócrito em níveis muito inferiore, abaixo de 15% (necessário transfusão) Com possível desidratação Por conta do hematócrito estar baixo, não seria ideal fazer a hidratação com soro, pois com o soro o sangue vai se diluir mais O ideal é a hidratação com sangue total Possível desidratação, que pode estar mascarando uma anemia Observação: Anisocitose discreta por macrocitose e policromasia. Moderada presença de esquisocito Anemia normocítica hipocromica Plaquetopenia ou trombocitopenia Com morfologia celular normal, ainda não há resposta medular