Vamos analisar cada uma das alternativas para identificar a única afirmação correta sobre a técnica de PCR em tempo real: a) A técnica de PCR em tempo real depende de que o número de ciclos a serem rodados seja definido. - Embora o número de ciclos seja importante, a técnica é mais focada na detecção em tempo real, não apenas na definição de ciclos. b) O parâmetro mais importante da técnica de PCR em tempo real é o Ct (cycle threshold). Esse parâmetro é responsável por apontar o ciclo de uma reação em que a amplificação atinge níveis superiores aos ruídos ambientes. - Esta afirmação está correta, pois o Ct é realmente um parâmetro crucial na PCR em tempo real. c) A técnica de PCR em tempo real não nos permite usar o Sybergreen® para analisar as características do produto detectado, mesmo que o modelo de termocirculador seja moderno. - Esta afirmação é falsa, pois o Sybergreen® é frequentemente utilizado na PCR em tempo real. d) A técnica de PCR em tempo real depende do uso de fluorescência, que se trata da medida obtida ao fim da reação. Por outro lado, o produto de um PCR comum é corrido em gel de agarose e, normalmente, será visto com luz UV. - Embora a fluorescência seja uma parte importante da PCR em tempo real, a afirmação não é totalmente precisa, pois a fluorescência é medida durante a reação, não apenas ao fim. e) Embora seja muito sensível, a técnica de PCR em tempo real não serve para a detecção de SNP (polimorfismos de nucleotídeo único). - Esta afirmação é falsa, pois a PCR em tempo real pode ser utilizada para detectar SNPs. Portanto, a única afirmação correta é: b) O parâmetro mais importante da técnica de PCR em tempo real é o Ct (cycle threshold). Esse parâmetro é responsável por apontar o ciclo de uma reação em que a amplificação atinge níveis superiores aos ruídos ambientes.