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CENTRO PAULA SOUZA
FACULDADE DE TECNOLOGIA DE DIADEMA – LUIGI PAPAIZ
PATRÍCIA DUARTE SILVA
MICROBIOLOGIA
RELATÓRIO COLORAÇÃO DE GRAM 
DIADEMA
2020
MÉTODO DE COLORAÇÃO DE GRAM
Objetivos da aula:
· Aprender a preparar esfregaço de bactérias;
· Realizar a técnica de Coloração de Gram;
· Aprender o fundamento do método de coloração de Gram;
· Comparar a estrutura da parede celular das bactérias Gram-positivas e Gram-negativas;
· Permitir a observação da morfologia bacteriana e fornecer informações a respeito do comportamento do seu material celular diante dos corantes de Gram.
Introdução:
A coloração de Gram é um passo muito importante na caracterização e classificação inicial das bactérias. Afinal, esse método de coloração permite que as bactérias sejam visualizadas no microscópio óptico, uma vez que sem a coloração é impossível observá-las ou identificar sua estrutura.
O método de coloração de Gram recebeu esse nome em homenagem ao patologista dinamarquês Hans Christian Joachim Gram que realizou a descoberta em 1884 e, aliás, até hoje continua sendo a mais utilizada nos laboratórios de análises clínicas e microbiologia. Através da coloração é possível identificar e diferenciar os dois principais grupos de bactérias, sejam Gram-positivas ou Gram-negativas.
As bactérias podem ser divididas em dois grandes grupos com base na capacidade de suas paredes celulares, pois há diferentes graus de permeabilidade na parede, as que fixarem o corante violeta cristal, sendo classificadas como: Gram-positivas as bactérias que coram em roxo e Gram-negativas as que coram em vermelho. 
Bacillus, Nocardia, Clostridium, Propionibacterium, Actinomyces, Enterococcus, Cornyebacterium, Listria, Lactobacillus, Gardnerella, Mycoplasma, Staphylococcus, Streptomyces, Streptococcus.
Gram - positiva
Escherichia, Helicobcater, Hemophilus, Neisseria, Klebsiella, Enterobacter, Chlamydia, Pseudomonas, Salmonella, Shigella.
Gram - negativa
A figura abaixo é possível identificar as estruturas que podem ser encontradas em uma ambas bactérias. 
A parede celular de bactérias positivas é composta basicamente por peptídeoglicano que constitui uma espessa camada ao redor da célula. Outros polímeros, como os ácidos lipoteicóicos e polissacarídeos também podem estar presentes nessa camada. 
Nas bactérias negativas, o peptídeoglicano constitui uma camada delgada, sobre a qual se encontra outra camada, denominada membrana externa, composta por lipoproteinas, fosfolipídeos, proteínas e lipopolissacarídeos.
Mofologia das bactérias
 
Procedimento 1 – Preparo da amostra
1.1 - Fazer a coleta da amostra para preparar o esfregaço
1.2 Pegar uma lâmina limpa, se necessário secar, e depois flambar rapidamente na chama do bico de Bunsen;
1.3 Identificar o lado da lâmina onde será feito o esfregaço;
1.4 Flambar a alça bacteriológica deixá-la esfriar;
1.5 Transferir um pouco do material para lâmina se for líquido ou uma gota de solução salina fisiológica para a lâmina;
1.6 Flambar a alça bacteriológica, deixar esfriar próximo a chama, tocar o material a ser examinado;
1.7 Esfregar o material com movimentos de rotação da alça bacteriológica, obtendo esfregaço de forma oval, bem fino e uniforme;
1.8 Deixar secar próximo a chama;
1.9 Fixar o esfregaço passando a lâmina (pelo lado oposto ao esfregaço) por pelo menos 3 vezes na chama do Bico de Bunsen
Procedimento 2 – Coloração Gram
2 
2.1 – Cobrir toda a lâmina com solução cristal violeta (corante roxo), aguardar um minuto;
2.2 - Lavar rapidamente em água destilada;
2.3 - Cobrir a lâmina com solução de lugol por um minuto;
2.4 - Lavar em água destilada;
2.5 - Colocar de a solução de Iodo, aguardar um minuto;
2.6 - Lavar em água destilada;
2.7 - Inclinar a lâmina e gotejar álcool absoluto 95% (cerca de 15 segundos). 
2.8 - Lavar a lâmina rapidamente em água corrente;
2.9 - Cobrir com corante fucsina de gram ou safranina e aguardar 30 segundos
2.10 Lavar em água destilada;
2.11 Colocar entre um papel absorvente e pressionar suavemente para secar;
2.12 Observar no microscópio 
Resultado:
Na lâmina preparada foi possível identificar as bactérias Gram-positivas, pois apresentaram coloração roxa azulada, de formato esférico isoladas (Coco), em cadeia (estreptococos) e em agrupamento (estafilococos).
 material observado no microscópio
Conclusão: 
Nesta aula pudemos aprender na prática desde a coleta de material a coloração de Gram, e com isso tornando possível identificar no microscópio óptico as bactérias contida na lâmina, sua coloração, classificação e morfologia.
Referência
AGÊNCIA NACIONAL DE VIGILÂNCIA SANITÁRIA (ANVISA). Descrição dos meios de cultura empregados nos exames microbiológicos. Mod. IV. ANVISA: 2004. p. 15 – 16.
AGÊNCIA NACIONAL DE VIGILÂNCIA SANITÁRIA (ANVISA). Detecção e Identificação de bactérias de importância médica. mod. V. ANVISA: 2004, p. 16 – 17. BIER, O. Bacteriologia e Imunologia. São Paulo: Melhoramentos, 1978. p. 798 – 799. CLINICAL AND LABORATORY S
https://www.brainpop.com/games/virtuallabsgramstaining/
http://diariodefarmacia2010.blogspot.com/2013/10/classificacoes-dos-seres-vivos.html
https://kasvi.com.br/bacteria-gram-positiva-gram-negativa/
http://www.vidrariadelaboratorio.com.br/coloracao-de-gram-passo-passo/
https://www.infoescola.com/bioquimica/coloracao-de-gram/
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