RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA - COLORAÇÃO DE GRAM EM BACTÉRIAS

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<p>CENTRO UNIVERSITÁRIO ATENEU – UNIATENEU</p><p>UNIDADE LAGOA MESSEJANA</p><p>CURSO DE GRADUAÇÃO EM MEDICINA VETERINÁRIA</p><p>Viriato Monteiro Pires</p><p>PRÁTICA COMUM DE COLORAÇÃO DE GRAM EM BACTÉRIAS</p><p>FORTALEZA</p><p>2024</p><p>VIRIATO MONTEIRO PIRES</p><p>PRÁTICA COMUM DE COLORAÇÃO DE GRAM EM BACTÉRIAS</p><p>Relatório sobre aula prática realizada pela</p><p>turma de Medicina Veterinária em aula de</p><p>Microbiologia e Imunologia Animal –</p><p>UniAteneu.</p><p>Orientador: MsC. Prof. Francisco Denilson</p><p>Rodrigues Gomes</p><p>FORTALEZA</p><p>2024</p><p>SUMÁRIO</p><p>1 INTRODUÇÃO ......................................................................................................... 3</p><p>2 METODOLOGIA ...................................................................................................... 5</p><p>2.1 COLORAÇÃO DE GRAM EM BACTÉRIAS .......................................................... 5</p><p>2.2 MATERIAIS UTILIZADOS NA PRÁTICA ............................................................... 6</p><p>2.3 TÉCNICA DE GRAM ............................................................................................. 6</p><p>3 APRESENTAÇÃO DE RESULTADOS ..................................................................... 7</p><p>3.1 BACTÉRIA GRAM-POSITIVA ............................................................................... 7</p><p>3.2 BACTÉRIA GRAM-NEGATIVA .............................................................................. 8</p><p>4 CONCLUSÃO ........................................................................................................ 10</p><p>5 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ...................................................................... 11</p><p>4</p><p>1 INTRODUÇÃO</p><p>De acordo com a literatura, as bactérias são células procarióticas, formadoras</p><p>dos menores seres vivos, destacando-se pela simplicidade de sua organização</p><p>celular, além de serem organismos com notável complexidade e diversidade,</p><p>características que lhes conferem uma elevada capacidade de adaptação a diversos</p><p>ambientes (JUNQUEIRA; CARNEIRO, 2012). Elas estão entre os organismos mais</p><p>antigos do planeta, desempenhando papéis importantes tanto na ecologia global</p><p>quanto na saúde humana. Esse enorme grupo está dividido em dois domínios,</p><p>Archaea (também conhecida como arqueobactérias) e Bactéria (TORTORA; FUNKE;</p><p>CASE, 2012). As bactérias possuem peptidoglicano, uma macromolécula formada por</p><p>açúcares e aminoácidos, envolvendo sua membrana celular, conferindo-lhe maior</p><p>rigidez (RODRIGUES, 2014) e que constituem a parede celular. Já as arqueobactérias</p><p>não possuem a macromolécula na sua parede celular, além de conseguirem viver em</p><p>locais considerados inóspitos, muito gelados, como em camadas de gelo ou muito</p><p>quentes, como em fendas vulcânicas.</p><p>Podemos classificar as bactérias baseando-se em vários critérios, como o seu</p><p>tamanho, sua morfologia ou seu arranjo (VET PROFISSIONAL, 2024), mas também</p><p>conseguimos identificá-las por meio do agrupamento celular, presença de estruturas</p><p>externas, características da parede celular e sua coloração. De acordo com sua</p><p>morfologia, existem três formas básicas: cocos, bacilos e espirilos (CARVALHO,</p><p>2008). As bactérias cocos são esféricas e estão subdivididas em diplococos,</p><p>estreptococos, estafilococos, tétrades e sarcinas. Já as bactérias chamadas de</p><p>bacilos têm forma de bastonete e se classificam em diplobacilos e estreptobacilos.</p><p>Bactérias nomeadas de espirilos são exemplos de bactérias espiraladas ou em forma</p><p>de saca-rolhas. Espiroquetas e vibriões são exemplos de bactérias em forma de</p><p>espiral e vírgula (ARAÚJO, 2024). Por serem simples organizadamente elas também</p><p>não possuem muitas estruturas internas, mas seus principais elementos estruturais</p><p>são: membrana celular, parede celular, citoplasma, nucleoide, ribossomos, cápsula,</p><p>flagelo, plasmídeos e esporos (NOGUEIRA; MIGUE, 2010). Essas estruturas</p><p>desempenham diversas funções essenciais para sua sobrevivência.</p><p>5</p><p>Através de testes que envolvem corantes e reações de coloração também</p><p>conseguimos classificar as bactérias. O método ao qual utilizamos na prática no</p><p>laboratório e um dos mais conhecidos foi o da coloração de Gram. Atualmente utiliza-</p><p>-se o cristal violeta e o lugol para conseguirmos diferenciar as bactérias com maior</p><p>nitidez, além da acetona que é utilizada como diferenciador na coloração (BRASIL,</p><p>2001). Utilizando a coloração de Gram é possível analisarmos e classificarmos as</p><p>bactérias microscopicamente, diferenciando-as em Gram-positivas ou Gram-</p><p>negativas (KASVI, 2021). Bactérias Gram-positivas retém o cristal violeta e possuem</p><p>uma parede celular com uma espessa camada de peptidoglicano, enquanto que as</p><p>Gram-negativas perdem o corante após o tratamento com o álcool e possuem uma</p><p>camada de peptidoglicano muito delgada, além de serem consideradas mais</p><p>complexas do ponto de vista químico (ESTRELA; PÉCORA, 1997).</p><p>Considerando o apresentado acima, realizamos uma prática utilizando a</p><p>coloração de Gram para um melhor entendimento e aprofundamento do assunto.</p><p>Utilizando bactérias cultivadas em um meio de cultura sólido conseguimos identificá-</p><p>las e classificá-las quanto a sua coloração e sua forma. Com as bactérias já cultivadas</p><p>obtivemos uma análise laboratorial mais detalhada no microscópio. Esse trabalho</p><p>demonstra o entendimento e a grande importância dos meios de cultura e dos</p><p>métodos de coloração para os estudos das bactérias.</p><p>6</p><p>2 METODOLOGIA</p><p>2.1 COLORAÇÃO DE GRAM EM BACTÉRIAS</p><p>O propósito dessa prática consistiu em obter um aprofundamento do assunto</p><p>estudado na matéria de Microbiologia e Imunologia Animal ministrado pelo prof.</p><p>Francisco Denilson Rodrigues Gomes. O método de coloração de Gram, desenvolvido</p><p>em 1884 pelo médico dinamarquês Hans Christian Joachin Gram, destaca-se como</p><p>um dos procedimentos mais amplamente utilizados em laboratórios de microbiologia</p><p>e análises clínicas (PERFECTA, 2023). A figura de Gram é conhecida porque seu</p><p>nome se converteu no método que ainda hoje é utilizado, ainda que alguns</p><p>desconheçam a sua origem. Gram estudou as técnicas de coloração das bactérias,</p><p>trabalho que desenvolveu em Berlim quando trabalhava com Carl Friedländer (1847-</p><p>1887) (MOREIRA; CARVALHO; FROTA, 2015). A técnica de Gram fundamenta-se na</p><p>diferença da composição química da parede celular das bactérias e na ação do álcool</p><p>sobre essa estrutura (MORALES, 2020).</p><p>Figura 1 – Meios de cultura de bactérias</p><p>Fonte: Adaptado de https://pt.linkedin.com/pulse/classifica%C3%A7%C3%A3o-dos-meios-de-cultura-</p><p>camila-campos</p><p>A prática realizada foi possível graças a algumas bactérias que já haviam sido</p><p>cultivadas em um meio de cultura, como o exemplo da figura 1 em que estavam sob</p><p>condições de incubação para o aprendizado na aula, já que para completar o seu</p><p>https://pt.linkedin.com/pulse/classifica%C3%A7%C3%A3o-dos-meios-de-cultura-camila-campos</p><p>https://pt.linkedin.com/pulse/classifica%C3%A7%C3%A3o-dos-meios-de-cultura-camila-campos</p><p>7</p><p>processo de multiplicação levaria pelo menos 8 horas. Assim, é possível identificar</p><p>patógenos causadores de doenças e desenvolver tratamentos eficazes. Os meios de</p><p>cultura também auxiliam na classificação das bactérias, tanto pela consistência do</p><p>meio que pode ser liquida, semisólida e sólida, quanto sua função, podendo essa ser</p><p>simples, enriquecida, seletiva, diferenciais ou indicadoras, de transporte, manutenção</p><p>ou conservação.</p><p>2.2 MATERIAIS UTILIZADOS NA PRÁTICA</p><p>1) Lâminas de vidro;</p><p>2) Conta gotas;</p><p>3) Swab;</p><p>4) Luvas de látex;</p><p>5) Máscara descartável;</p><p>6) Bactéria cultivada em um meio de cultura;</p><p>7) Água destilada;</p><p>8) Cristal violeta;</p><p>9) Lugol;</p><p>10) Acetona;</p><p>11) Fucsina</p><p>2.3 TÉCNICA DE GRAM</p><p>A técnica de Gram que utilizamos na aula prática compreende as seguintes</p><p>etapas:</p><p>1) Adicionar 1 gota de água destilada em uma lâmina de vidro;</p><p>2) Coletar</p><p>a bactéria do meio do ágar utilizando um swab e passá-lo na lâmina</p><p>de vidro espalhando o máximo possível;</p><p>3) Passar a lâmina de vidro um pouco na chama para fixar os microrganismos</p><p>e secar;</p><p>4) Enxarcar a lâmina com o cristal violeta e cronometrar 1 minuto;</p><p>5) Após 1 minuto retirar o excesso e acrescentar o lugol por mais 1 minuto (vai</p><p>formar uma substância insolúvel);</p><p>8</p><p>6) Passado 1 minuto retirar o excesso acrescentando a acetona;</p><p>7) Realiza uma lavagem com água destilada;</p><p>8) Acrescenta a fucsina e cronometra mais 45 segundos;</p><p>9) Finaliza retirando o excesso de fucsina e realiza mais uma lavagem com</p><p>água destilada.</p><p>Após realizarmos o passo a passo da técnica de Gram, conseguimos examinar</p><p>a bactéria com óleo de imersão empregando a objetiva de 100x no microscópio óptico.</p><p>As bactérias Gram-positivas coram-se em violeta e as bactérias Gram-negativas, em</p><p>vermelho (MOREIRA; CARVALHO; FROTA, 2015), um exemplo de como é realizado</p><p>a coloração de Gram é apresentado na figura 2 a seguir.</p><p>Figura 2 – Passo a passo da metodologia de Gram</p><p>Fonte: Adaptado de https://kasvi.com.br/bacteria-gram-positiva-gram-negativa/</p><p>3 APRESENTAÇÃO DE RESULTADOS</p><p>3.1 BACTÉRIA GRAM-POSITIVA</p><p>As bactérias Gram-positivas são classificadas com base na cor que apresentam</p><p>após a aplicação do método de Gram, um processo químico utilizado para diferenciar</p><p>os tipos de parede celular das bactérias. Após a realização desse método, as bactérias</p><p>Gram-positivas adquirem uma coloração azul ou violeta, devido à retenção do cristal</p><p>violeta em sua estrutura celular (BUSH, 2023). A parede celular das bactérias Gram-</p><p>positivas se caracterizada pela presença de uma camada mais espessa de</p><p>peptidoglicano, em comparação com as bactérias Gram-negativas (SANTOS, 2024).</p><p>9</p><p>Figura 3 - Lâminas de bactéria Gram-negativa analisada no laboratório de</p><p>microscopia (em óleo de imersão objetiva de 100x no microscópio óptico)</p><p>Fonte: Alunos da turma da manhã da Ateneu</p><p>A figura 3 apresenta uma bactéria em forma de bacilo, conseguimos</p><p>compreender que ela é uma bactéria Gram-positiva pois após a coloração de Gram</p><p>ela atingiu com uma cor violeta. É importante destacar, também que, o cultivo da</p><p>bactéria da figura 3 obteve um excelente resultado, visto que, conquistamos uma</p><p>ótima análise microscópica com uma lâmina repleta de bactérias. Para monitorar a</p><p>compatibilidade do crescimento na cultura com os padrões observados, é possível</p><p>avaliar a quantidade de microrganismos presentes na amostra.</p><p>3.2 BACTÉRIA GRAM-NEGATIVA</p><p>As bactérias Gram-negativas são assim denominadas pois obtém uma cor rosa</p><p>ou avermelhada após a aplicação do método de Gram (SANARMED, 2022). A maior</p><p>complexidade das paredes celulares das bactérias Gram-negativas as torna mais</p><p>resistentes, dificultando a ação de antibióticos e medicamentos. Essas bactérias</p><p>apresentam uma maior virulência em relação as bactérias Gram-positivas, sendo mais</p><p>frequentemente associadas à resistência antibiótica. Essa resistência, se deve, em</p><p>parte, à sua estrutura de parede celular, que impede a entrada eficaz de substâncias</p><p>terapêuticas (ABCEMED, 2014).</p><p>10</p><p>Figura 4 – Lâminas de bactérias Gram-negativas analisadas no laboratório de</p><p>microscopia (em óleo de imersão objetiva de 100x no microscópio óptico)</p><p>Fonte: Autoria própria Fonte: Autoria própria</p><p>A figura 4 mostra dois exemplos de bactérias Gram-negativa em forma de</p><p>bacilo. Podemos afirmar que tratam-se de bactérias Gram-negativas porque após o</p><p>teste de Gram ela obteve uma coloração mais rosada e avermelhada. Ambas as</p><p>lâminas foram submetidas ao óleo de imersão para uma melhor visualização no</p><p>microscópio óptico na objetiva de 100x.</p><p>11</p><p>4 CONCLUSÃO</p><p>A aula prática nos ajudou ajudou a comprrender melhor alguns assuntos que</p><p>estavam sendo abordados nas aulas de Microbiologia e Imunologia Animal:</p><p>1) Bactérias podem ser classificadas quanto a sua morfologia, tamanho e</p><p>coloração, podendo ser diferenciadas em dois grupos diferente: bactérias</p><p>Gram-positivas e Gram-negativas.</p><p>2) Pode-se avaliar a quantidade de microrganismos presentes em uma</p><p>amostra para monitorar o seu o crescimento na cultura.</p><p>3) A coloração de Gram ajuda a diferenciar as bactérias em Gram-positivas e</p><p>Gram-negativas e também é possível saber quais delas são mais perigosas,</p><p>já que as Gram-nositivas têm uma resistência maior a antibióticos, como o</p><p>apresentado nas aulas pelo prof. Denilson.</p><p>12</p><p>5 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS</p><p>ABCMED. Bactérias Gram-positivas e Gram-negativas: o que são? Como é a</p><p>técnica de Gram? Quais as vantagens de diferencias as bactérias Gram-</p><p>negativas e Gram-positivas? AbcMed, 2014. Disponível em:</p><p>https://www.abc.med.br/p/587007/bacterias-gram-positivas-e-gram-negativas-o-que-</p><p>sao-como-e-a-tecnica-de-gram-quais-as-vantagens-de-diferenciar-as-bacterias-</p><p>gram-negativas-e-gram-positivas/ . Acesso em: 08 set 2024.</p><p>ARAÚJO, Marília. Bacteriologia. INFOESCOLA, 2024. Disponível em:</p><p>https://www.infoescola.com/biologia/bacteriologia/ . Acesso em: 07 set 2024.</p><p>BRASIL, Ministério da Saúde. Técnica de Coloração de Gram. Brasília: Ministério</p><p>da Saúde, 2004. Disponível em:</p><p>https://bvsms.saude.gov.br/bvs/publicacoes/115_03gram.pdf . Acesso em: 07 set</p><p>2024.</p><p>BUSH, Larry M. Considerações gerais sobre bactérias Gram-positivas. MSD</p><p>Manuals, 2023. Disponível em: https://www.msdmanuals.com/pt-</p><p>br/casa/infec%C3%A7%C3%B5es/infec%C3%A7%C3%B5es-bacterianas-</p><p>bact%C3%A9rias-gram-positivas/considera%C3%A7%C3%B5es-gerais-sobre-</p><p>bact%C3%A9rias-gram-positivas . Acesso em: 08 set 2024.</p><p>CARVALHO, Irineide Teixeira de. Microbiologia Básica. 2. Ed. São Paulo: Editora</p><p>Santos, 2008.</p><p>ESTRELA, Carlos; PÉCORA, Jesus Djalma. Características da Citologia</p><p>Bacteriana. Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto/USP, 1997. Disponível em:</p><p>https://www.forp.usp.br/restauradora/calcio/citolog.htm . Acesso em: 08 set 2024.</p><p>JUNQUEIRA, L.C; CARNEIRO, J. Biologia Celular e Molecular. 9. Ed. Rio de</p><p>Janeiro: Guanabara Koogan, 2012.</p><p>KASVI. Bactéria Gram-positiva e Gram-negativa. Kasvi, 2021. Disponível em:</p><p>https://kasvi.com.br/bacteria-gram-positiva-gram-negativa/ . Acesso em: 07 set 2024.</p><p>MORALES, Pedro Serrão. Microbiologia: em que consiste, características e</p><p>utilidade da coloração de Gram. Portal Afya, 2023. Disponível em:</p><p>https://www.abc.med.br/p/587007/bacterias-gram-positivas-e-gram-negativas-o-que-sao-como-e-a-tecnica-de-gram-quais-as-vantagens-de-diferenciar-as-bacterias-gram-negativas-e-gram-positivas/</p><p>https://www.abc.med.br/p/587007/bacterias-gram-positivas-e-gram-negativas-o-que-sao-como-e-a-tecnica-de-gram-quais-as-vantagens-de-diferenciar-as-bacterias-gram-negativas-e-gram-positivas/</p><p>https://www.abc.med.br/p/587007/bacterias-gram-positivas-e-gram-negativas-o-que-sao-como-e-a-tecnica-de-gram-quais-as-vantagens-de-diferenciar-as-bacterias-gram-negativas-e-gram-positivas/</p><p>https://www.infoescola.com/biologia/bacteriologia/</p><p>https://bvsms.saude.gov.br/bvs/publicacoes/115_03gram.pdf</p><p>https://www.msdmanuals.com/pt-br/casa/infec%C3%A7%C3%B5es/infec%C3%A7%C3%B5es-bacterianas-bact%C3%A9rias-gram-positivas/considera%C3%A7%C3%B5es-gerais-sobre-bact%C3%A9rias-gram-positivas</p><p>https://www.msdmanuals.com/pt-br/casa/infec%C3%A7%C3%B5es/infec%C3%A7%C3%B5es-bacterianas-bact%C3%A9rias-gram-positivas/considera%C3%A7%C3%B5es-gerais-sobre-bact%C3%A9rias-gram-positivas</p><p>https://www.msdmanuals.com/pt-br/casa/infec%C3%A7%C3%B5es/infec%C3%A7%C3%B5es-bacterianas-bact%C3%A9rias-gram-positivas/considera%C3%A7%C3%B5es-gerais-sobre-bact%C3%A9rias-gram-positivas</p><p>https://www.msdmanuals.com/pt-br/casa/infec%C3%A7%C3%B5es/infec%C3%A7%C3%B5es-bacterianas-bact%C3%A9rias-gram-positivas/considera%C3%A7%C3%B5es-gerais-sobre-bact%C3%A9rias-gram-positivas</p><p>https://www.forp.usp.br/restauradora/calcio/citolog.htm</p><p>https://kasvi.com.br/bacteria-gram-positiva-gram-negativa/</p><p>13</p><p>https://portal.afya.com.br/medicina-laboratorial/microbiologia-em-que-consiste-</p><p>caracteristicas-e-utilidade-da-coloracao-de-gram . Acesso em: 08 set 2024.</p><p>MOREIRA, José Luciano Bezerra; CARVALHO, Cibele Barreto Mano de; FROTA,</p><p>Cristiane Cunha. Visualização bacteriana e colorações. 1. Ed. Fortaleza: Editora da</p><p>Universidade Federal do Ceará, 2015.</p><p>NOGUEIRA, Joseli Maria da Rocha; MIGUE, Lucieny de Faria Souza. Conceitos e</p><p>métodos para a formação de profissionais em laboratórios de saúde – volume</p><p>4. 1. Ed. Brasília: Editora Universidade de Brasília, 2010.</p><p>RODRIGUES, João. Peptidoglicano – Molécula da Semana. FCiências, 2014.</p><p>Disponível em: https://www.fciencias.com/2014/03/06/peptidoglicano-molecula-da-</p><p>semana/ . Acesso em: 07 set 2024.</p><p>SANARMED. Bactérias Gram-negativas: definição, classificação e patologia.</p><p>SanarMed, 2022. Disponível em: https://sanarmed.com/resumo-bacterias-gram-</p><p>negativas-definicao-classificacao-e-patologias/ . Acesso em: 08 set 2024.</p><p>SANTOS, Vanessa Sardinha Dos. Classificação das bactérias. [S. l.], Mundo</p><p>Educação. Disponível em: https://mundoeducacao.uol.com.br/biologia/classificacao-</p><p>das-bacterias.htm . Acesso em: 08 set 2024.</p><p>TORTORA, Gerard J; FUNKE, Berdell R; CASE, Christine L. Microbiologia. 10. Ed.</p><p>Porto Alegre: Artmed, 2012.</p><p>VET PROFISSIONAL. Morfologia bacteriana: você sabe classificar as bactérias</p><p>morfologicamente?. VET Profissional, 2024. Disonível em:</p><p>https://www.vetprofissional.com.br/artigos/morfologia-bacteriana-voce-sabe-</p><p>classificar-as-bacterias-morfologicamente . Acesso em: 07 set 2024.</p><p>https://portal.afya.com.br/medicina-laboratorial/microbiologia-em-que-consiste-caracteristicas-e-utilidade-da-coloracao-de-gram</p><p>https://portal.afya.com.br/medicina-laboratorial/microbiologia-em-que-consiste-caracteristicas-e-utilidade-da-coloracao-de-gram</p><p>https://www.fciencias.com/2014/03/06/peptidoglicano-molecula-da-semana/</p><p>https://www.fciencias.com/2014/03/06/peptidoglicano-molecula-da-semana/</p><p>https://sanarmed.com/resumo-bacterias-gram-negativas-definicao-classificacao-e-patologias/</p><p>https://sanarmed.com/resumo-bacterias-gram-negativas-definicao-classificacao-e-patologias/</p><p>https://mundoeducacao.uol.com.br/biologia/classificacao-das-bacterias.htm</p><p>https://mundoeducacao.uol.com.br/biologia/classificacao-das-bacterias.htm</p><p>https://www.vetprofissional.com.br/artigos/morfologia-bacteriana-voce-sabe-classificar-as-bacterias-morfologicamente</p><p>https://www.vetprofissional.com.br/artigos/morfologia-bacteriana-voce-sabe-classificar-as-bacterias-morfologicamente</p>