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Biofilmes bacterianos Mecanismos de agressão e defesa aplicados Prof. Nicholas Morais Bezerra Objetivos de aprendizagem ▹ Qual a importância higiênico-sanitária em relação aos biofilmes? ▹ O que leva um microrganismo se aderir em uma superfície? Quais as vantagens para os microrganismos de um biofilme? ▹ Qual o impacto econômico na indústria de alimentos? ▹ Qual o impacto na saúde pública? Introdução Definição: comunidade de microrganismos aderidos à uma superfície sólida e embutidos em uma matriz de substâncias poliméricas extracelulares que contém carboidratos, proteínas e ácidos nucleicos em um ambiente com líquidos. A matriz de substâncias poliméricas extracelulares é produzida pelos próprios mo e organizada em estruturas complexas, que lhes confere resistência mecânica e antimicrobiana. Em ambientes naturais, 95% a 99% dos microrganismos existem na forma de biofilmes, que podem ser encontrados em quase todos os substratos que possuam n.vel de umidade suficiente para suportar seu crescimento. Um rio com lodo, é considerado um biofilme. Introdução Os biofilmes podem ser benéficos, pois são capazes de proteger as membranas mucosas de microrganismos nocivos. Os biofilmes podem entupir os canos de água e, quando crescem sobre implantes médicos, como próteses articulares e cateteres, têm a capacidade de causar infecções. Vantagens para o microrganismo Crescimento ordenado. Captação de nutrientes. Proteção. Desvantagens para o microrganismo Acúmulo de metabólitos tóxicos. Introdução. Podem existir como agregados mais ou menos confluentes, em camadas únicas ou arquiteturas tridimensionais. Quando constituídos por várias camadas de células, apresentam canais que permitem o fluxo de líquido e gases, a dispersão de nutrientes e o descarte de componentes Composição: Água é a fração mais significativa, podendo chegar a 97% da matriz. Os microrganismos representam frequentemente 2 a 5% da matriz. Como são formados os biofilmes? Superfície Como são formados os biofilmes? Superfície As células inicialmente planctônicas (móveis) aderem a uma superfície, primeiro de forma reversível e depois irreversivelmente, e tornam-se sésseis (fixos). As microcolônias iniciam a comunicação entre si através da produção de moléculas auto-indutores que levam à expressão de genes específicos. Como resultado, as células segregam uma matriz de polissacarídeos extracelulares. As bactérias multiplicam-se, levando à expansão e maturação do biofilme. Regressão ao estágio planctônico. Nesta fase são produzidas enzimas sacarolíticas que quebram os polissacarideos permitindo que as células bacterianas à superfície do biofilme se soltem para o meio. Como se formam os biofilmes? Adesão Primária ▹ Aproximação da superfície ▸ Acaso? ▸ Motilidade /Quimiotaxia? ▹ Interações ▸ Eletrostáticas ▸ Hidrofóbicas ▹ Fatores da superfície ▸ Plaquetas, fibrinas ▹ Fatores do Microorganismo ▸ Adesinas (pili, fímbrias) Adesão Secundária (Ancoragem) Formação da matriz extra-celular = Polissacárides + Componentes ancorados Propriedades dos biofilmes Superfície Metabolismo reduzido Fase Estacionária Maior proliferação Propriedade dos biofilmes ▹ Bactérias em biofilmes, particularmente aquelas presentes nas camadas mais internas, apresentam reduzidas taxas metabólicas e de crescimento. ▹ A matriz de polímeros extracelulares age como um adsorvente, reduzindo a quantidade de antimicrobiano disponível para interagir com as células do biofilme Superfície Circulação de água, oxigênio e nutrientes. Propriedades dos biofilmes ANTIBIÓTICOS Propriedades dos biofilmes Filtragem Penetração lentificada e/ou reduzida na matriz polissacáride. Propriedade dos biofilmes ▹ A matriz de substancias poliméricas extracelulares pode reduzir fisicamente a penetração do agente antimicrobiano. ▹ células em biofilme são fisiologicamente distintas de células planctônicas e expressam fatores de proteção específicos ANTIBIÓTICOS Propriedades dos biofilmes Redução da Atividade Menor atuação dos antimicrobianos em células bacterianas quiescentes. ANTIBIÓTICOS Propriedades dos biofilmes Redução da Atividade O ambiente do biofilme (ex.: pH) prejudica a atividade antimicrobiana. Propriedade dos biofilmes ▹ A matriz de exopolissacarídeos pode reagir e causar a inativação dos sanitizantes. ▹ Biofilmes formados por diferentes espécies, como os que são encontrados nas indústrias de alimentos, representam um maior risco, uma vez que estas podem proteger umas ás outras durante a aplicação de agentes químicos. Microrganismos mais comuns nos biofilmes ▹ Pseudomonas. ▹ Enterococcus. ▹ Listeria. ▹ Yersinia. ▹ Salmonella. ▹ Escherichia coli. ▹ Staphylococcus. ▹ Bacillaceae. (B. cereus) Microrganismos mais comuns nos biofilmes ▹ Biofilmes microbianos são produzidos por culturas puras de bactérias e por consórcios de microrganismos, que podem incluir fungos, protozoários e algas. ▹ Os biofilmes mais comuns na natureza são heterogêneos, compostos por duas ou mais espécies: ▸ Os produtos dometabolismo de uma espécie auxiliar o crescimento das outras. ▸ A adesão de uma dada espécie pode fornecer ligandos que promovem a ligação de outras. Tipos de biofilmes ▹ O biofilme aderido a um substrato. ▹ O biofilme em suspensão. ▹ O biofilme de subsolo. Biofilmes no Ambiente ▹ Camadas do solo; ▹ Ambientes aquáticos; ▹ Ambientes “urbanos”: ▸ Sistemas de tubulação (água e esgoto) ▸ Reservatórios de água; ▸ Edificações. Biofilmes na indústria de alimentos ▹ Aderência a resíduos orgânicos e inorgânicos presentes na superfície de equipamentos e utensílios. ▹ Redução da eficiência e vida útil de equipamentos, em função do fenômeno denominado corrosão microbiologicamente induzida. ▹ Células sesseis são mais resistentes ao processo de desinfecção. Biofilmes na indústria de alimentos ▹ Desprendimento podem causar: ▸ Prejuízos econômicos ▸ Risco de ocorrência de toxinfecções alimentares. Biofilmes na saúde pública ▹ Presença em superfícies poliméricas e hidrofóbicas, tais como implantes dentários e médicos, principalmente em dispositivos de uso prolongado. ▹ A maioria dos aparelhos médicos pode ser extensivamente colonizada por biofilmes. ▹ No caso de marcapassos artificiais, infecções são uma das causas mais comuns de problemas, com incidência variando de 1% a 5%. Biofilmes na saúde pública ▹ Os estafilococos são os patógenos isolados mais frequentes em infecções relacionadas aos marca-passos, cerca 50% a 70% dos casos são causados por Staphylococcus.