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1 Professora Gleicier Maia Silva Especialista em Microbiologia Médica e Micologia Mestre em Biologia de Fungos Doutoranda em Medicina Tropical Centro Universitário Joaquim Nabuco Disciplina de Imunologia Clínica Professora Gleiciere Maia Silva Especialista em Microbiologia Médica e Micologia Mestre em Biologia de Fungos Doutoranda em Medicina Tropical Faculdade Joaquim Nabuco Disciplina de Microbiologia e Imunologia Básica Meios de Cultura Meios de Cultura 2 Meios de Cultura Destina-se ao cultivo artificial dos microrganismo; Componentes de um meio de cultura estão as fontes de carbono e energia ( carboidratos), fontes de nitrogênio, fósforo e sais minerais. Quanto ao estado físico: Sólidos: àgar (1 a 2%) Semi-sólidos: ágar (0,5%) Liquidos: sem agentes solidificantes, apresentando-se como caldo. Características Meios de Cultura 3 Procedências dos constituintes:::Naturais(quando usa ingredientes de composição química não definida. :::Artificiais(quando usa ingredientes de composição química conhecida. Características Meios de Cultura Quanto a composição química: Básicos-São aqueles que permitem o crescimento bacteriano sem nenhuma exigências. Especiais: Quando cumprem as exigências vitais dos microrganismo. Classificações dos Meios de Cultura Meios de Enriquecimento Meios Diferenciais Meios Seletivos Meios de Cultura 4 Meios de cultura para transporte e conservação de amostras Cary Blair Meio StuartSalina tamponada Agar nutriente Classificações dos Meios de Cultura Meios de Cultura Meios de Enriquecimento – proporcionam nutrientes adequados ao crescimento de microrganismos lento, bem como microrganismos exigentes e fastidiosos. Exemplo: caldo tetrationato e tioglicolato. Diferenciais - contém substâncias que permitem estabelecer diferenças entre microrganismos. Exemplo: ágar MacConkey e àgar sangue. Seletivos -contém substâncias que inibem o desenvolvimento de determinados grupos de microrganismos, permitindo o crescimento de outros. Exemplo: ágar Salmonella-Shigella (SS). Meios de Cultura Meios de cultura para transporte e conservação de amostras Cary Blair Meio Stuart Meio Amies com carvão Meio de Transporte pré-reduzido 5 Meios de Cultura Meios de Cultura 6 O materiais devem ser recebidos em meios de transportes ou em frascos adequados para cada tipo de material; Transporte: Meio de Stuart: Isolamento de bactérias anaeróbicas e aeróbicas facultativas Meio Amies com carvão: idem Stuart e para isolamento de gonococo, hemófilos e pneumococos Meio de Cary Blair: Isolamento de enteropatógenos a partir de amostras de fezes Meio de Transporte pré-reduzido: Isolamento de bactérias anaeróbicas. Meios de Cultura Transporte de amostras clínicas; Transporte de Microrganismos já isolados; Função dos meios de transporte??? Meios inertes: preservam a viabilidade dos microrganismos nas amostras, mas evitam a sua proliferação. Meios de Cultura 7 Meios de Cultura O meio de transporte preconizado por Amies é uma modificação do de Stuart; Função dos meios de transporte Glicerofosfato de Sódio Fosfato Inorgânico Glicerosfosfato de Sódio Fosfato Inorgânico Espécie pouco exigentes se multiplicassem (Microrganismos contaminantes) Elimina o crescimento de contaminantes, pois não há fontes de Carbono nem de Energia. Meios de Cultura 8 Meios para crescimento e isolamento de microrganismo Àgar Chocolate Àgar Thayer-Martin Chocolate Àgar Salmonella-shigella Àgar Macconkey Àgar Sangue Àgar Cled Àgar Saubouraud Caldo tetrationato Caldo tioglicolato Meios de Cultura Ágar Chocolate Amplamente utilizado para o cultivo de microrganismos exigentes, embora cresçam neste meio quase todos os tipos de microrganismos. -À base do meio, é adicionado sangue de cavalo, em temperatura alta, o que faz com que as hemácias lisem, liberando hemina e hematina, compostos fundamentais para o crescimento dos microrganismos exigentes. Microrganismos exigentes Haemophilus spp., Neisseria spp., e Moraxella spp. Meios de Cultura 9 •É um meio rico e superior a outros meios de cultivo destinados para o isolamento de Neisseria gonorrhoeae e Neisseria meningitidis , pois contém em sua fórmula antibióticos que inibem o crescimento de Neisserias saprófitas e outras bactérias, quando em amostras colhidas de sítios contaminados. Meios de Cultura Ágar Thayer-Martin Chocolate Ágar SS possui componentes (sais de bile, verde brilhante e citrato e tissulfato de sódio) que inibem microrganismos gram positivos. A incorporação de lactose ao meio permite diferenciar se o microrganismo é lactose positiva (colônias rosa) e bactérias que não fermentam a lactose (colônias transparentes). Tissulfato de sódio e o citrato férrico permitem a detecção de H²S evidenciado por formação de colônias de cor negra no centro. Selecionar e isolar espécies de Salmonella e Shigella, em amostras de fezes, alimentos e água Meios de Cultura Ágar Salmonella-shigella 10 Meios de Cultura Ágar Salmonella-shigella O cristal violeta inibe o crescimento de microrganismos gram positivos especialmente enterococos e estafilococos. A concentração de sais de bile é relativamente baixa em comparação com outros meios, por isso não é tão seletivo para Gram negativos como, por exemplo, o ágar SS. Meios de Cultura Ágar MacConkey 11 Meios de Cultura Ágar MacConkey Oferece ótimas condições de crescimento a maioria dos microrganismos. A conservação dos eritrócitos íntegros favorecem a formação de halos de hemólise nítidos, úteis para a diferenciação de Streptococcus spp. e Staphylococcus spp. -Usado para o isolamento de microrganismos não fastidiosos. -Verificação de hemólise dos Streptococcus spp. e Staphylococcus spp. Meios de Cultura Ágar Sangue 12 Tipos de Hemolíse Meios de Cultura Ágar Sangue Tipos de Hemolíse Meios de Cultura Ágar Sangue 13 Tipos de Hemolíse Meios de Cultura Ágar Sangue 14 Meios de Cultura Ágar Sangue Meios de Cultura 15 Isolamento não especifico e quantificação de microrganismo isolados de amostras de urina; Permite identificar a fermentação da lactose (fermentação positiva – colônias amarelas); Meios de Cultura Ágar Cled Meios de Cultura Ágar Cled 16 Meio com nutrientes que favorece o crescimento de diversos fungos (leveduriformes e filamentosos). Componentes: Peptona, ágar e dextrose. Meios de Cultura Ágar Sabouraud Meios de Cultura Ágar Sabouraud: Fungos filamentosos 17 Meios de Cultura Ágar Sabouraud: Fungos leveduriformes •Os sais de bile contidos no meio de tetrationato inibem microrganismos Gram positivos e a adição da solução de iodo inibe a flora intestinal normal de espécies fecais •Meio de enriquecimento para Salmonella spp. Iodo metálico 6,0 g Iodeto de potássio 5,0 g Água destilada 20,0 ml O meio de Tioglicolato dá suporte para o crescimento de vários microrganismos. O potencial de oxidação e redução baixo do meio neutraliza efeitos antibacterianos das espécies preservadas com mercurio. Meios de Cultura: Meios de enriquecimento Caldo Tetrationato Caldo Tioglicolato 18 Professora Gleicier Maia Silva Especialista em Microbiologia Médica e Micologia Mestre em Biologia de Fungos Doutoranda em Medicina Tropical Centro Universitário Joaquim Nabuco Disciplina de Imunologia Clínica Professora Gleiciere Maia Silva Especialista em Microbiologia Médica e Micologia Mestre em Biologia de Fungos Doutoranda em Medicina Tropical Faculdade Joaquim Nabuco Disciplina de Microbiologia e Imunologia Básica Meios de Cultura