Roteiro - Haemophilus

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HAEMOPHILUS – ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO
COLORAÇÃO DE GRAM
Observar cocobacilos gram negativos, às vezes pleomorfos.
CULTIVO EM AGAR CHOCOLATE
Melhor meio de cultura para haemophilus é o ágar chocolate com sangue de cavalo.
TESTAR FATOR X E V
Usar meio ágar tripticase soja ou BHI Agar, e discos comerciais impregnados com os fatores X=hemina/hematina e V=NAD ou coenzima I. Semear a bactéria como se fosse fazer um antibiograma e colocar os discos com pinça a uma distância de 1,5 cm um disco do outro. Flambar a pinça antes e após a retirada de cada disco. Após 24h de incubação, verificar crescimento próximo aos discos.
PROVA DE SATELITISMO
Semear com swab uma suspensão em salina cerca de 1 a 2 da escala Mac Farland no centro de uma placa de ágar sangue de carneiro. Semear em uma única estria um repique de S. aureus hemolítico. Incubar 18 a 24h. Verificar crescimento de colônias pequenas próximas a zona de hemólise do estafilococo. 
INDOL
O objetivo é determinar a capacidade do microrganismo degradar o aminoácido triptofano (presente em quase todas as proteínas) até indol.
O triptofano é um aminoácido essencial que pode sofrer oxidação pelas atividades enzimáticas de algumas bactérias. A conversão do triptofano em produtos metabólicos é mediada pela enzima triptofanase.
Utiliza-se um meio de cultura que contenha o aminoácido triptofano por ex.: água peptonada. Após o crescimento pesquisa-se a presença de indol adicionando o reagente de Kovac’s (cor amarelo) ao longo das paredes do tubo, de modo que não se misture com o meio de cultura. Este reagente reage com o indol produzindo um composto rosado.
As culturas que produzem um anel avermelhado na superfície do meio após adição do reagente são indol positivo. A persistência da coloração amarela do reagente demonstra que o substrato triptofano não foi hidrolisado a indol e indica uma reação negativa.
UREASE