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Lei de Lambert-Beer 1. O que é a Lei de Lambert-Beer? Descreve a relação entre a absorção de luz e as propriedades do material atravessado pela radiação. É a base da espectrofotometria quantitativa. Permite determinar concentrações de substâncias através da absorbância. 2. Fatores que Influenciam a Absorção de Luz Número de moléculas • Quanto maior o número de moléculas absorvedoras: Maior será a absorção da luz. Eficiência molecular • Algumas moléculas absorvem luz com maior eficiência. o Quanto maior essa eficiência: Maior a absorbância observada. 3. Transmitância (T) • Representa a fração da luz que atravessa a amostra. Fórmula 𝑇 = 𝐼 𝐼0 Onde: • T = transmitância • I₀ = radiação incidente • I = radiação transmitida Percentual de transmitância %𝑇 = 𝑇 × 100 4. Absorbância (A) • Mede a capacidade da amostra em absorver luz. • Quanto maior a absorbância: o Menor será a transmitância. Relação entre absorbância e transmitância 𝐴 = −log 𝑇 ou 𝐴 = log 𝐼0 𝐼 5. Relação entre Absorbância e Espessura Lei de Lambert • A absorbância é proporcional à espessura do meio atravessado pela luz. Relação 𝐴 ∝ 𝑏 Onde: • b = caminho óptico da cubeta 6. Relação entre Absorbância e Concentração Lei de Beer • A absorbância aumenta com a concentração da substância absorvedora. Relação 𝐴 ∝ 𝑐 Onde: • c = concentração da solução 7. Equação da Lei de Lambert-Beer A absorbância depende: Da concentração Do caminho óptico Da capacidade de absorção da molécula Equação 𝐴 = 𝜀𝑏𝑐 ou 𝐴 = 𝑎𝑏𝑐 Onde: • A = absorbância • ε ou a = absortividade molar (L mol⁻¹ cm⁻¹) • b = caminho óptico (cm) • c = concentração (mol/L) 8. Absortividade Molar (ε) • Mede a eficiência da molécula em absorver luz. ε alto • Alta absorção. • Detectável em baixas concentrações. ε baixo • Necessita maiores concentrações para detecção. 9. Comportamento dos Gráficos Absorbância • Cresce linearmente com a concentração. Transmitância • Diminui exponencialmente com a concentração. 10. Limitações da Lei de Lambert-Beer Para resultados confiáveis é necessário: Soluções diluídas • Luz monocromática • Apenas um componente absorvedor • Meio homogêneo e estável 11. Limite de Linearidade • A lei deixa de funcionar adequadamente em soluções muito concentradas. Faixa recomendada 0,02 ≤ 𝐴 ≤ 1 • Fora dessa faixa: Aumentam os erros experimentais. 12. Escolha do Comprimento de Onda • Deve-se escolher o comprimento de onda de maior absorbância. • Isso garante: Maior sensibilidade Maior precisão Menor interferência 13. Uso do Branco • O branco é utilizado para zerar o equipamento. • Elimina interferências do: Solvente Tampão Reagentes 14. Aplicações da Lei de Lambert-Beer Análises químicas • Quantificação de substâncias. • Identificação de compostos. Determinação de ferro em água • Formação de complexo colorido com 1,10-fenantrolina. Análises clínicas • Glicose • Colesterol • Triglicerídeos • Proteínas • Hemoglobina • Creatinina 15. Importância da Lei de Lambert-Beer • Fundamental na espectrofotometria UV-Vis. • Muito utilizada em: o Química analítica o Bioquímica o Farmácia o Controle de qualidade o Análises ambientais • Permite determinar concentrações com rapidez e precisão.