Aula prática - Teste imunocromatográfico

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Aula prática
TESTE IMUNOCROMATOGRÁFICO
TESTE RÁPIDO DO 
ANTICORPO/ANTÍGENO
ou
TESTE DO FLUXO LATERAL
Ensaios imunocromatográficos
Teste rápido de HIV
(Ac anti-HIV)
Diagnóstico de gravidez
(detecção de beta HCG)
Objetivo
– Demonstrar o funcionamento do
teste de imunocromatográfico
Gonadotrofina Coriônica Humana (HCG) 
❑Hormônio glicoprotéico normalmente produzido pela
placenta durante a gravidez, sendo a sua função a
produção de esteróides pelos ovários.
❑Presente no sangue e na urina por volta de sete a
treze dias após a implantação do óvulo fertilizado no
útero.
❑É secretado pelo tecido placentário, servindo como
suporte ao corpo lúteo durante as primeiras semanas
da gravidez.
Gonadotrofina Coriônica Humana 
(HCG) 
Pico máximo perto 
do final do 
primeiro trimestre 
Marcador ideal 
para se detectar e 
confirmar a 
gravidez
Gonadotrofina Coriônica Humana (HCG) 
Beta- HCGAlfa- HCG
especificidade 
biológica e 
imunológica 
idêntica à subunidade
alfa dos hormônios
glicoprotéicos da
pituitária; hormônio
luteinizante (LH),
hormônio folículo
estimulante (FSH), e do
hormônio estimulante da
tiróide (TSH).
Princípio do ensaio imunocromatográfico
Princípio do ensaio imunocromatográfico)
Princípio do ensaio imunocromatográfico)
Princípio do ensaio imunocromatográfico
• Membrana de nitrocelulose fixa sobre um suporte.
• A medida que a amostra de urina ou soro é
absorvida pelo papel de filtro na extremidade e flui
ao longo da tira-teste, o hCG interage primeiramente
com o conjugado corado composto por um anticorpo
anti-hCG, e é capturado por outro anticorpo anti-hCG
imobilizado mais adiante na linha-teste, onde se
desenvolve uma coloração rosa quando a
concentração do hormônio é superior a 25 mUI/ml.
Princípio do ensaio imunocromatográfico:
• Na ausência de hCG, não se desenvolve cor na linha-
teste. Como controle da reação, o excesso de
conjugado não complexado ao hCG é capturado por
anticorpos específicos presentes na linha-controle,
desenvolvendo-se uma coloração azul ou rósea
(dependendo do kit empregado), que indica o
funcionamento correto do teste. A ausência de
reação na linha-controle indica teste inválido.
1- O teste pode ser realizado a partir do 5 dia de falha menstrual. Entretanto, em
alguns casos, a concentração de HCG é tão pequena que o teste será negativo.
Neste caso, realizar novo teste em amostra coletada após 5-8 dias.
2- Nos casos de gravidez ectópica, toxemia da gravidez e aborto iminente, a
excreção de HCG pode estar diminuída, obtendo-se resultados falsos negativos.
3- Urina de pacientes com certos tipos de neoplasias e que secretam HCG podem
produzir resultados positivos na ausência de gravidez.
4- Não utilizar amostras que contenham grande quantidade de proteínas, porque
podem interferir no teste.
5- Resultados falsos positivos podem ocorrer, raramente, em amostras que
contenham concentrações elevadas de LH (menopausa). Portanto resultados
positivos em mulheres com mais de 45 anos devem ser interpretados com cautela.
6- Como em todo teste de gravidez, o diagnóstico não deve se basear somente no
resultado do exame laboratorial, mas sim, na correlação do resultado do teste
com os sinais e sintomas clínicos.
Limitações do teste
Procedimento
Amostra congelada ou refrigerada coletada anteriormente (soro ou urina) deve
ser estabilizada à temperatura ambiente antes da realização do teste.
1. Abrir a embalagem que contém a tira-teste para hCG.
2. Mergulhar a extremidade da tira na amostra, até o nível indicado abaixo das
setas (aproximadamente 1 cm de profundidade; não ultrapassar este nível)
e aguardar 10 segundos) Alguns kits exigem que a amostra (soro ou urina)
seja depositada sobre uma área específica.
3. Se o volume de amostra no frasco for inferior ao nível indicado na tira,
mantê-la verticalmente até o fim da reação. Se o volume for maior, retirá-la
e apoiá-la em superfície horizontal.
4. Ler o resultado em 5 a 10 minutos.
DENGUE NS1
O kit Dengue NS1 é um teste imunocromatográfico rápido para a detecção do 
antígeno NS1 do vírus da Dengue em amostras de sangue total, soro ou plasma..
INTERFERENTES
Reatividade cruzada com outros vírus do grupo flavivírus pode ser comum,
segundo referências bibliográficas, porém não foram evidenciadas nos testes de
desenvolvimento do produto.
O vírus da Dengue é um Flavivírus transmitido pelo mosquito Aedes aegypti. Está
distribuído pelas áreas tropicais e subtropicais do mundo, causando mais de 100
milhões de infecções anualmente. A infecção clássica da Dengue é caracterizada
pela febre alta (normalmente entre 38 e 40ºC) de início abrupto, mal-estar, anorexia
(pouco apetite), cefaléias, dores musculares e nos olhos. Casos de Dengue
Hemorrágica pode provocar gengivorragias e epistáxis, hemorragias internas e
coagulação intravascular disseminada, com danos em vários orgãos, o que pode
causar a morte.
O NS1 é uma glicoproteína altamente conservada que está presente em altas
concentrações no soro de pacientes infectados por dengue. O antígeno NS1 é
encontrado do 1° ao 9° dias após o início da febre nas amostras
de pacientes com infecção primária e secundária pelo vírus da dengue. Entretanto,
sua concentração reduz ao longo dos dias de infecção, diminuindo
consideravelmente as chances de detecção do antígeno.
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	Slide 4: Gonadotrofina Coriônica Humana (HCG) 
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	Slide 8: Princípio do ensaio imunocromatográfico)
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