Citogenética Clínica

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<p>Citogenética Clínica</p><p>Introdução:</p><p>➔ Definição: A citogenética clínica é o estudo</p><p>dos cromossomos aplicado à prática clínica.</p><p>➔ Por meio desse estudo (citogenética</p><p>clínica), podemos identificar alterações ou</p><p>transtornos cromossômicos que causam a</p><p>maioria das doenças genéticas.</p><p>➔ Portanto, as alterações cromossômicas são</p><p>responsáveis por:</p><p>● Perdas Reprodutivas</p><p>● Malformações Congênitas</p><p>● Deficiência Intelectual</p><p>Anomalias Citogenéticas:</p><p>Anormalidades Cromossômicas</p><p>➔ As aneuploidias são as principais causas de</p><p>aborto espontâneio e nascidos vivos com</p><p>anormalidades cromossômicas</p><p>➔ Cromossomo: O cromossomo é formado</p><p>pela compactação do DNA. O DNA, em</p><p>dupla hélice, vai se empacotando ao redor</p><p>das histonas e de outras proteínas.</p><p>➔ Estudo dos Cromossomos: Para o estudo</p><p>dos cromossomos, é fundamental lembrar</p><p>das etapas da divisão celular.</p><p>● Metáfase: Etapa da divisão celular em</p><p>que os cromossomos estão com o grau</p><p>máximo de condensação, curtos e</p><p>espessos, o que torna mais fácil de</p><p>serem visualizados com o auxílio da</p><p>microscopia ótica.</p><p>➔ Para compreender as anormalidades</p><p>cromossômicas e, assim, as doenças,</p><p>devemos entender a morfologia do</p><p>cromossomo.</p><p>Morfologia dos Cromossomos</p><p>Humanos:</p><p>➔ 2 cromátides</p><p>➔ Constrição Primária: Ocorre na região do</p><p>centrômero</p><p>➔ Constrições Secundárias: Fora da região do</p><p>centrômero</p><p>➔ Telômeros: Extremidades que mantém a</p><p>estabilidade dos cromossomos.</p><p>➔ Braço Curto: p</p><p>➔ Braço Longo: q</p><p>➔ Bandas Cromossômicas</p><p>Nomenclatura dos Cromossomos</p><p>Humanos:</p><p>1. Posição do Centrômero:</p><p>➔ Cromossomo Metacêntrico: Centrômero na</p><p>região média do cromossomo (Braço curto p</p><p>fica igual ao braço longo q)</p><p>➔ Cromossomo Submetacêntrico: O braço</p><p>curto p fica um pouco menor que o braço</p><p>longo q.</p><p>➔ Cromossomo Acrocêntrico: O braço curto</p><p>contém o satélite.</p><p>2. Tamanho do Centrômero:</p><p>➔ Cromossomos: Grande, médio e pequeno.</p><p>Regiões Cromossômicas:</p><p>➔ A nomenclatura é importante para fazer</p><p>laudo de exames cromossômicos.</p><p>➔ O cromossomo pode ser dividido em</p><p>regiões.</p><p>➔ A leitura é feita do centrômero para o</p><p>telômero. As regiões se dividem em bandas,</p><p>que se subdivide em sub-bandas.</p><p>➔ Com base nas características da posição do</p><p>centrômero e do tamanho, podemos dividir</p><p>os cromossomos em grupos (A, B, C, D, E, F e</p><p>G), conforme a tabela a seguir:</p><p>Cariótipo:</p><p>➔ Definição: A cariótipo se trata do conjunto</p><p>de cromossomos ou a constituição</p><p>cromossômica de um indivíduo.</p><p>➔ Casos em que Fazermos o cariótipo:</p><p>● Quando o bebê nasce com alguma</p><p>malformação congênita, podemos fazer</p><p>o exame do cariótipo para saber se há</p><p>anormalidade em algum desses</p><p>cromossomos.</p><p>● Realizado em suspeita de doenças</p><p>cromossômicas, casos de deficiência</p><p>intelectual, mulheres que tenham aborto</p><p>de repetição, malfomações congênitas</p><p>múltiplas.</p><p>Observação: O cariótipo não é feito para</p><p>doenças gênicas. Nas doenças gênicas, usa-se</p><p>o DNA. Avalia-se o gene e não o cromossomo</p><p>inteiro.</p><p>➔ Matéria-Prima para a obtenção do</p><p>cariótipo:</p><p>● Sangue Periférico</p><p>● Líquido amniótico e células fetais</p><p>● Medula óssea</p><p>● Tumores Sólidos</p><p>➔ O material é coletado e a amostra é</p><p>colocada em uma seringa heparinizada</p><p>(para que o sangue não sofra coagulação).</p><p>então, esse material é cultivado em ummeio</p><p>de cultura contendo todas as condições</p><p>necessárias para a divisão celular.</p><p>Colchicina: A colchicina interrompe a formação</p><p>do fuso. Assim, os cromossomos ficam</p><p>estacionados na metáfase.</p><p>Hipotonização das Células: Rompe a</p><p>membrana celular</p><p>Cariograma:</p><p>➔ Definição: O cariograma corresponde à</p><p>disposição ordenada dos cromossomos de</p><p>acordo com regras internacionais.</p><p>Métodos de Análise</p><p>Cromossômica:</p><p>Coloração Convencional:</p><p>➔ Incorporação de corante DNA-específico</p><p>que cora os cromossomos de maneira</p><p>uniforme, sem bandeamento.</p><p>➔ Coloração Convencional apenas permite</p><p>dividir os cromossomos em grupos.</p><p>➔ Permite a contagem do número de</p><p>cromossomos.</p><p>➔ Rápido, fácil e de baixo custo.</p><p>Coloração Específica:</p><p>➔ Técnica de coloração para produzir bandas</p><p>cromossômicas (segmentos de um</p><p>cromossomo distinguíveis dos adjacentes).</p><p>➔ Essa técnica se baseia na composição do</p><p>material genético.</p><p>➔ Fatores envolvidos: Composição das bases</p><p>nitrogenadas, composição proteica, grau de</p><p>condensação e distribuição de DNA</p><p>repetitivo.</p><p>Método de Citogenética Convencional:</p><p>➔ O método de citogenética convencional</p><p>busca evidenciar as bandas cromossômicas,</p><p>que são regiões ou segmentos específicos</p><p>do cromossomo.</p><p>Bandeamento Cromossômico:</p><p>➔ O bandeamento G é o método mais usado.</p><p>➔ Cada método de bandeamento, na</p><p>coloração especial, possui a função de</p><p>destacar determinada região do</p><p>cromossomo.</p><p>➔ Inicialmente, o material genético passa por</p><p>um tratamento. Em seguida, realiza-se o</p><p>bandeamento G com o Giemsa.</p><p>➔ Assim, no bandeamento cromossômico,</p><p>temos tratamentos cromossômicos</p><p>envolvendo desidratação, envelhecimento,</p><p>desnaturação ou digestão enzimática</p><p>seguida de incorporação de corante</p><p>DNA-específico.</p><p>Bandeamento G (Corante Giemsa): “Mais</p><p>usado”</p><p>➔ Os cromossomos, na coloração específica</p><p>em que se baseia no bandeamento G, se</p><p>diferenciam pelo padrão de bandeamento.</p><p>Observação: Quanto maior for a resolução do</p><p>bandeamento, maior será o número de bandas</p><p>vistas.</p><p>➔ A tripsina digere proteínas cromossômicas,</p><p>formando as bandas claras (Banda G –) e</p><p>bandas escuras (Banda G +).</p><p>➔ Banda G – (ou Banda Clara): Banda com</p><p>muitos C-G digerem mais e coram menos.</p><p>➔ Banda G + (ou Banda Escura): Banda com</p><p>muitos A-T digerem menos e coram mais.</p><p>Metáfase:</p><p>➔ A colchicina foi usada na metáfase da</p><p>divisão celular, possibilitando a visualização</p><p>dos cromossomos.</p><p>➔ Após a coloração, podemos ver as bandas e,</p><p>assim, identificar cada cromossomo.</p><p>➔ Na imagem acima, não há nenhuma</p><p>anormalidade cromossômica.</p><p>Bandeamento R (Corante Giemsa):</p><p>“Bandeamento inverso de G”</p><p>➔ Por conta de um aquecimento da coloração,</p><p>temos a reversão do padrão do</p><p>Bandeamento G:</p><p>● Banda R – (ou Banda Clara): Banda</p><p>com muitos A-T digerem mais e coram</p><p>menos.</p><p>● Banda R + (ou Banda Escura): Banda</p><p>com muitos C-G digerem menos e</p><p>coram mais.</p><p>Bandeamento C:</p><p>➔ Método que favorece a visualização de</p><p>regiões que estão inativas (regiões</p><p>centroméricas e outras de</p><p>heterocromatina).</p><p>Bandeamento NOR:</p><p>➔ Método de bandeamento que evidencia os</p><p>satélites dos tratamentos</p><p>Bandeamento T:</p><p>➔ Método de bandeamento que destaca</p><p>regiões teloméricas.</p><p>Trocas de Cromátides Irmãs (TCI):</p><p>➔ Avaliar quebras cromossômicas e cultivo</p><p>celular das células por dois ciclos de</p><p>duplicação do DNA.</p><p>Método de Citogenética Molecular:</p><p>➔ O método de citogenética molecular vai</p><p>detectar a localização em nível gênico no</p><p>cromossomo, através do uso de sondas</p><p>específicas que emitem fluorescência</p><p>específica de cor que é analisada em</p><p>microscópio de fluorescência.</p><p>➔ Sonda: Apresenta complementaridade com</p><p>a região de DNA de interesse.</p><p>➔ Exemplos de Métodos: FISH, SKY, CGH</p><p>Array</p><p>FISH (Hibridização in Situ Fluorescente)</p><p>➔ Possui sonda complementar à sequência do</p><p>gene.</p><p>➔ Usado para analisar se a célula do embrião</p><p>possui ou não um cromossomo específico.</p><p>SKY (Técnica de Cariótipo Espectral) ou</p><p>Cariotipagem por Espectro Multicolorido:</p><p>➔ Utiliza sondas de pintura cromossômica</p><p>para detecção de todos os cromossômicos.</p><p>CGH Array (Hibridização Genômica</p><p>Comparativa):</p><p>➔ Detecta regiões de ganhos (duplicação) e</p><p>perdas (deleções) de segmentos</p><p>cromossômicos, perda de alelos ou</p><p>amplificação gênica.</p><p>➔ Exemplo: O material genético do paciente é</p><p>corado com uma sonda verde. Utiliza-se um</p><p>material de referência, sem anormalidades,</p><p>corado em vermelho. Tudo é colocado em</p><p>uma lâmina, buscando-se a</p><p>complementariedade do DNA da lâmina. Se</p><p>tiver mais verde que vermelho, significa que</p><p>houve uma duplicação. Se tiver mais</p><p>vermelho que verde, significa que houve</p><p>deleção.</p><p>Indicações Clínicas para Análise</p><p>Cromossômica:</p><p>➔ Portadores de Malformações, deficiência</p><p>intelectual isolada, Atraso no</p><p>desenvolvimento psicomotor</p><p>➔ Alterações no Desenvolvimento Sexual</p><p>➔ Problemas Reprodutivos: Aborto,</p><p>infertilidade</p><p>➔ História Familiar de Cromossomopatias</p><p>➔ Neoplasias</p><p>Abreviações:</p><p>➔ cen: Centrômero</p><p>➔ del: Deleção</p><p>➔ dup: Duplicação</p><p>➔ inv: Inversão</p><p>➔ mar:Marcador</p><p>➔ mat: Origem materna</p><p>➔ pat: Origem paterna</p><p>➔ p: Braço curto</p><p>➔ q: Braço longo</p><p>➔ t: Translocação</p><p>➔ +: Ganho de</p><p>➔ -: Perda de</p><p>➔ /:Mosaicismo</p><p>➔ r: Cromossomo em anel</p><p>➔ dic: Cromossomo Dicêntrico</p><p>Tipos de Anormalidades:</p><p>Alterações Cromossômicas</p><p>Numéricas:</p><p>Euploidias: Monoploidia, Triploidia,</p><p>Tetraploidia</p><p>➔ Definição: Euploidia corresponde a</p><p>alteração do número de conjuntos haploides</p><p>(n).</p><p>EX:</p><p>3n: Triploidia (69, XXX; 69, XXY)</p><p>4n: Tetraploidia (92, XXXX; 92 XXXY)</p><p>2n/3n: Mosaicismo (46, XX/ 69, XXX), pode</p><p>ser compatível com a vida.</p><p>Mosaicismo: Presença de 2 ou mais</p><p>complementos cromossômicos em um</p><p>indivíduo.</p><p>Origem: Não-disjunção nas divisões</p><p>mitóticas pós-zigóticas iniciais.</p><p>Aneuploidias: Monossomia, nulissomia,</p><p>trissomia, tetrassomia</p><p>➔ Definição: Aneuploidia é uma alteração</p><p>cromossômica numérica que se caracteriza</p><p>pelo aumento ou diminuição de um tipo de</p><p>cromossomo.</p><p>EX:</p><p>Monossomia: 45, X0 (Síndrome de Turner)</p><p>Trissomia: 47, XX, +21</p><p>Tetrassomia: 48, XXXX</p><p>Observação: Mulheres em idade avançada</p><p>possuem mais erros de divisão celular, pois,</p><p>quanto mais velha, mais velho será o</p><p>aparato da divisão celular.</p><p>Alterações Cromossômicas</p><p>Estruturais:</p><p>➔ As alterações cromossômicas estruturais</p><p>resultam de quebras espontâneas ou</p><p>induzidas, seguidas de reconstituição</p><p>anormal.</p><p>➔ As alterações cromossômicas estruturais</p><p>podem ser Balanceadas ou Não</p><p>Balanceadas.</p><p>Alterações Cromossômicas Balanceadas:</p><p>➔ Sem ganho ou perda de material</p><p>cromossômico.</p><p>➔ Casos: Inversão, translocação e inserções</p><p>Alterações Cromossômicas Não</p><p>Balanceadas:</p><p>➔ Com perda ou ganho de material</p><p>cromossômico.</p><p>➔ Rearranjos instáveis e fenótipo anormal</p><p>➔ Casos: Deleções, duplicações,</p><p>isocromossomo, cromossomo em anel,</p><p>cromossomos marcadores e cromossomos</p><p>dicêntricos.</p><p>Anormalidades Estruturais Não</p><p>Balanceadas:</p><p>Deleção:</p><p>➔ Definição: A deleção é a quebra com perda</p><p>de um segmento cromossômico terminal ou</p><p>intersticial.</p><p>➔ A clínica varia com o tamanho do segmento</p><p>e genes contidos no segmento.</p><p>➔ Exemplo:</p><p>● 46, XX, del (6p13): Perda da banda 3 da</p><p>região 1, do braço curto do</p><p>cromossomo 6.</p><p>● 46, XY, del (5p)</p><p>Duplicação:</p><p>➔ Definição: A duplicação se caracteriza por</p><p>um ganho em dose dupla de um segmento</p><p>cromossômico</p><p>➔ A duplicação acontece durante a replicação</p><p>do DNA.</p><p>➔ Exemplo: 46, XX, dup (1) (q42q51): Duplicou</p><p>da banda 2, da região 4, do braço longo até</p><p>a banda 1, da região 5, do braço longo.</p><p>Isocromossomo:</p><p>➔ Definição: O isocromossomo ocorre de um</p><p>erro na divisão do centrômero que ao invés</p><p>de separar as cromátides, separam os</p><p>braços do cromossomo.</p><p>➔ Aspecto metacêntrico</p><p>➔ Exemplo: 46, XX, i(17q): Duplicação do</p><p>braço longo e ausência do braço curto.</p><p>Cromossomo em Anel:</p><p>➔ Definição: Cromossomo em anel resulta de</p><p>duas quebras em um mesmo cromossomo</p><p>com união das extremidades quebradas</p><p>(perda dos telômeros e o cromossomo se</p><p>torna instável).</p><p>➔ Exemplo: 46, XX, r (7) (p22q32):</p><p>Cromossomo 7 em anel. A quebra</p><p>aconteceu na banda 2 da região 2 do braço</p><p>curto, e na banda 2, da região 3 do braço</p><p>longo.</p><p>Cromossomos Marcadores:</p><p>➔ Definição: São cromossomos pequenos</p><p>usados na identificação por FISH.</p><p>➔ Exemplo: 47, XY, +mar</p><p>Cromossomo Dicêntrico:</p><p>➔ Definição: Cromossomo que resulta da</p><p>união de dois segmentos com centrômeros.</p><p>➔ Instabilidade mitótica</p><p>➔ Exemplo: 46, XX, dic (13) (q14q32)</p><p>Anormalidades Estruturais</p><p>Balanceadas:</p><p>Inversão:</p><p>➔ Definição: Na inversão, há duas quebras em</p><p>um cromossomo seguidas de reconstituição</p><p>do segmento resultante.</p><p>➔ Inversão Paracêntrica: Inversão sem o</p><p>envolvimento do centrômero</p><p>➔ Inversão Pericêntrica: Inversão com o</p><p>envolvimento do centrômero.</p><p>➔ Exemplo:</p><p>46, XX, inv (3) (p22p25):Aqui está</p><p>envolvendo apenas o braço curto, não</p><p>envolvendo o centrômero.</p><p>46,XY, inv (7) (q21q22): Aqui está</p><p>envolvendo apenas o braço longo, não</p><p>envolvendo o centrômero. Se tivesse um p e</p><p>um q, então seria policêntrico.</p><p>Translocação:</p><p>➔ Definição: A translocação caracteriza-se</p><p>pela troca de segmentos de dois</p><p>cromossomos.</p><p>➔ A translocação é recíproca, pois não altera</p><p>o número de cromossomos</p><p>➔ Caso envolvam dois acrocêntricos</p><p>(Robertsonianas), alteram o número de</p><p>cromossomos.</p><p>➔ Exemplo:</p><p>46,XX t(1:3) (q11;p15)</p><p>45,XY, t(14;21) (q11;11): Robertsonianas</p><p>Inserção:</p><p>➔ Definição: A inserção caracteriza pela</p><p>introdução de um segmento cromossômico</p><p>em outro cromossomo (exigem 3 quebras).</p><p>➔ Exemplo:</p><p>46, XX, ins (5;13) (q51q55;q22)</p>