AULA PRÁTICA 9 - TITULAÇÃO DE BACTERIÓFAGOS (5)

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<p>10/26/2023</p><p>1</p><p>Titulação de Bacteriófagos</p><p>2</p><p>Titulação de bacteriófagos</p><p>Objetivos:</p><p>1. Determinar o título de bacteriófagos em uma amostra</p><p>2. Verificar o efeito da infecção viral por meio da formação</p><p>de placas de lise</p><p>10/26/2023</p><p>2</p><p>3</p><p>Titulação de Bacteriófagos</p><p>Procedimento experimental:</p><p>Obtenção dos colífagos</p><p>4</p><p>10/26/2023</p><p>3</p><p>5</p><p>Titulação de Bacteriófagos</p><p>Formação de placas de lise:</p><p>6</p><p>Titulação de Bacteriófagos</p><p>Procedimento experimental:</p><p>Mistura/Incubação/Plaqueamento</p><p>Contagem de</p><p>placas de lise</p><p>Sobrecamada em meio sólido</p><p>10/26/2023</p><p>4</p><p>BACTERIÓFAGOS</p><p>0,1 mL0,1 mL0,1 mL</p><p>0,1 mL</p><p>0,1 mL</p><p>20 minutos, 37 °C</p><p>10-1 10-2 10-3 10-4</p><p>10-5</p><p>BACTERIÓFAGO +</p><p>BACTÉRIAS</p><p>0,2 mL</p><p>BACTERIÓFAGO +</p><p>BACTÉRIAS</p><p>0,2 mL</p><p>ÁPÓS A INCUBAÇÃO DE 20 MINUTOS, REALIZAR O PLAQUEAMENTO:</p><p>Meio semi-sólido</p><p>Fundido</p><p>Meio semi-sólido</p><p>(sobrecamada)</p><p>Meio sólido</p><p>Obs.: A mistura de</p><p>bacteriófagos e bactérias fica</p><p>espalhada na sobre-camada de</p><p>meio semi-sólido.</p><p>10/26/2023</p><p>5</p><p>9</p><p>Colônias isoladas</p><p>de bactérias</p><p>Crescimento confluente de bactérias</p><p>Placas de lise</p><p>confluentes</p><p>Placas de lise</p><p>isoladas</p><p>1010</p><p>Crescimento confluente de bactérias,</p><p>com placas de lise</p><p>Isoladas.</p><p>Crescimento confluente de bactérias,</p><p>na ausência de placas de lise.</p><p>10/26/2023</p><p>6</p><p>1111</p><p>Placas de lise</p><p>confluentes</p><p>Placas de lise</p><p>isoladas</p><p>12</p><p>Titulação de Bacteriófagos</p><p>Determinação do título (UFP/mL) - Cálculo</p><p>TÍTULO = Nº de placas de lise x FD</p><p>Volume da alíquota (mL)</p><p>Nº de placas de lise entre 25 e 300</p><p>10/26/2023</p><p>7</p><p>RESULTADOS EXPERIMENTAIS</p><p>14</p><p>Determinação do título - Exemplo</p><p>TÍTULO = número de placas de lise x fator de diluição</p><p>volume da alíquota plaqueada (mL)</p><p>Volume plaqueado foi de 0,1mL.</p><p>Diluição 10-1 : incontável</p><p>Diluição 10-2: > 300 placas</p><p>Diluição 10-3: 132 placas</p><p>Diluição 10-4: 39 placas</p><p>Diluição 10-5: 3 placas</p><p>10/26/2023</p><p>8</p><p>15</p><p>Titulação de Bacteriófagos</p><p>TÍTULO = número de placas de lise x fator de diluição</p><p>volume da alíquota plaqueada (mL)</p><p>Volume plaqueado foi de 0,1mL.</p><p>10-1 : incontável</p><p>10-2: > 300 placas</p><p>10-3: 132 placas</p><p>10-4: 39 placas</p><p>10-5: 3 placas</p><p>TÍTULO = 132 x 103</p><p>0,1 mL</p><p>TÍTULO = 1,3 x 106 UFP/mL</p><p>Obrigado (a)!</p><p>Slide 1: Titulação de Bacteriófagos</p><p>Slide 2</p><p>Slide 3</p><p>Slide 4</p><p>Slide 5</p><p>Slide 6</p><p>Slide 7</p><p>Slide 8</p><p>Slide 9</p><p>Slide 10</p><p>Slide 11</p><p>Slide 12</p><p>Slide 13: RESULTADOS EXPERIMENTAIS</p><p>Slide 14</p><p>Slide 15</p><p>Slide 16</p>