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186 Simétrico Pré-Universitário – Curso de Biologia – Prof. Landim – www.simetrico.com.br 186 estruturas hidrofílicas na superfície da mesma (cabeças hidrofílicas com a água do meio). A bicamada lipídica é o meio onde serão encaixadas as proteínas na disposição em mosaico. Além disso, é ela que determina a fluidez da membrana. A membrana plasmática é fluida devido ao fato de que os fosfolipídios que a compõem são em sua maioria líquidos à temperatura corporal de 37°C. Além dos fosfolipídios, um lipídio de grande importância que aparece em membranas plasmáticas de células animais (não está presente em células vegetais) é o colesterol, desempenhando um papel estrutural e estabilizador. Ele se posiciona na estrutura da membrana da mesma maneira que os fosfolipídios. Proteínas de membrana As proteínas na membrana plasmática desempenhar vários papéis. Assim temos: - proteínas estruturais; - proteínas canais e permeases; - proteínas receptoras; - proteínas reguladoras. As proteínas estão dispostas na membrana com aquela organização em mosaico já citada, isto é, com as proteínas encaixadas na bicamada. Quanto à disposição na bicamada, as proteínas podem ser intrínsecas ou extrínsecas. As proteínas intrínsecas ou integrais são proteínas que atravessam a bicamada de ponta a ponta, estando em contato simultaneamente com o meio intra e o extracelular. São estas proteínas que podem agir como canais, caso elas permitam a passagem de substâncias por seu interior. As proteínas intrínsecas possuem uma organização em aminoácidos que permitem que ela interaja com a bicamada, fixando se ao longo da mesma. Assim, os seus aminoácidos externos (que ficam em contato com a bicamada) são polares na região as cabeças hidrofílicas dos fosfolipídios, apolares na região das caudas hidrofóbicas e novamente polares na outra região de cabeças hidrofílicas. Já os seus aminoácidos internos variam em tipo de acordo com a proteína, sendo que nas proteínas canais estes aminoácidos normalmente são polares, para permitir a passagem de substâncias hidrofílicas. Proteínas intrínsecas estão fortemente aderidas à membrana, devido à sua grande área em contato com a mesma. Correspondem a cerca de 70% das proteínas de membrana. As proteínas extrínsecas ou periféricas são proteínas que se encontram em apenas um dos lados da bicamada (interno ou externo), estando, pois, em contato ou com o meio intra ou com o extracelular. Sua distribuição de aminoácidos pode variar, uma vez que a interação pode acontecer apenas com as cabeças hidrofílicas ou com as cabeças hidrofílicas e parte das caudas hidrofóbicas (de uma camada apenas). Assim, de acordo com esta interação, os aminoácidos em contato com a membrana podem ser polares ou polares e apolares, respectivamente, para cada um dos casos citados logo anteriormente. Os aminoácidos que não estão em contato estão em meio aquoso e são polares. Proteínas extrínsecas estão apenas levemente aderidas à membrana por forças eletrostáticas. Correspondem a cerca de 30% das proteínas de membrana. Açúcares de membrana Em algumas membranas plasmáticas, existem na face externa prolongamentos oligossacarídicos que formam uma camada chamada glicocálix. Esta encontra se covalentemente ligada às estruturas da bicamada. Assim, os oligossacarídeos da face externa correspondem a porções oligossacarídicas de glicolipídios e glicoproteínas de membrana. A presença de açúcares exclusivamente na face externa da bicamada confere uma assimetria à membrana plasmática (isto é, a face externa da bicamada, com oligossacarídeos, é diferente da face interna da mesma, sem oligossacarídeos). O glicocálix ou cobertura célula tem em geral de 10 a 20 nm de espessura (a membrana celular tem cerca de 10 nm de espessura, portanto, o glicocálix também não é visível ao microscópio óptico) e apresenta várias funções como: - proteger a membrana celular; - atuar como filtro em certos capilares sanguíneos e no tecido conjuntivo, ajudando a controlar a entrada de substâncias na célula, através do controle do processo de pinocitose; - promover adesão entre células de um mesmo tecido, o que é bem evidente em tecidos epiteliais e, principalmente, o reconhecimento celular. - atuar no reconhecimento celular uma das principais funções da cobertura celular é atuar no reconhecimento molecular e celular. O número e a posição dos diversos oligossacarídeos de membrana funcionam como urna espécie de "impressão digital" da célula, permitindo que o sistema imune reconheça as células do indivíduo e as células estranhas. Um exemplo de corno o glicocálix está relacionado ao reconhecimento diz respeito aos grupos sanguíneos do sistema ABO. A substância (ou antígeno ou aglutinogênio) A corresponde a um oligossacarídeo particular da membrana da hemácia que termina em galactose, e a substância (ou antígeno ou aglutinogênio) B difere desta por possuir galactosamina no lugar da galactose. Através da análise destas substâncias, o organismo analisa quais hemácias pertencem a ele. Em células sadias, o reconhecimento das células vizinhas através do glicocálix é um fator que inibe a divisão celular, num fenômeno denominado inibição por contato. Isso evita que uma célula se multiplique e com isso invada o espaço de células próximas. Células cancerosas perdem essa capacidade de reconhecimento, de modo que a inibição por contato cessa, e a divisão se dá de modo indefinido, sem que se respeite o espaço das células vizinhas. Parede celular Em células vegetais, existe externamente à membrana celular uma estrutura denominada parede celular, que constitui uma espécie de exoesqueleto para tais células. Esta parede celular apresenta se totalmente permeável, com uma alta resistência, e ao mesmo tempo uma certa flexibilidade e tem funções de suporte mecânico da célula, proteção mecânica e proteção osmótica. A parede celular é formada por microfibrilas compostas principalmente do polissacarídeo celulose (formado por repetidas 187 Simétrico Pré-Universitário – Curso de Biologia – Prof. Landim – www.simetrico.com.br 187 unidades de glicose), e por outros açúcares em menores concentrações, como amilopectina, hemicelulose, celobiose e lignina (este último é o principal componente da madeira e confere a ela sua resistência e rigidez). A maioria das células vegetais apresenta pontes de cito plasma que atravessam as paredes celulares e estabelecem comunicações entre células adjacentes. Estas pontes são chamadas plasmodesmos e muitas vezes possuem túbulos que permitem a livre circulação de líquido e outras substâncias, mantendo a isotonicidade entra as células vizinhas. A formação da parede celular após a divisão celular envolve primeiramente a formação de uma placa celular a partir de vesículas liberadas pelo complexo de Golgi, denominadas fragmoplastos e que se alinham no plano equatorial da célula depois de dividido o núcleo celular. Esta placa celular vai constituir a camada intercelular ou lamela média da parede celular madura, sendo formada por amilopectina. Em cima desta lamela média vão sendo depositadas as demais microfibrilas para formação da parede (dentro da lamela média já existem espaços que futuramente corresponderão aos plasmodesmos). Cada célula filha vai fornecendo material para sua parede de maneira a formar a sua parede celular primária, delgada e pouco resistente. Esta parede celular primária é formada principalmente por amilopectina (presente na lamela média, agora interna à parede), hemicelulose e microfibrilas frouxas de celulose. Ela é fina e elástica, de modo a possibilitar que a célula jovem possa se dividir e crescer mais facilmente. Quando a parede aumenta de volume e chega à sua espessura definitiva, sendo agora bem mais resistente, temos a parede celular secundária, que contém principalmente celulose, hemicelulose, lignina e suberina. Células fúngicas também possuemparede celular, sendo, esta formada por polímeros de glicosamina (que forma um polissacarídeo chamado quitina). Já a parede celular bacteriana é formada por açúcares, peptídios e lipídios, numa estrutura altamente complexa (os chamados peptidioglicanos e lipopolissacarídeos formam a maior parte desta estrutura), que já foi descrita em situações anteriores. Exercícios Questões estilo múltipla escolha 1. (ENEM) Quando colocamos em água, os fosfolipídios tendem a formar lipossomos, estruturas formadas por uma bicamada lipídica, conforme mostrado na figura. Quando rompida, essa estrutura tende a se reorganizar em um novo lipossomo. Disponível em: http://course1.winona.edu. Acesso em: 1 mar. 2012 (adaptado). Esse arranjo característico se deve ao fato de os fosfolipídeos apresentarem uma natureza A) polar, ou seja, serem inteiramente solúveis em água. B) apolar, ou seja, não serem solúveis em solução aquosa. C) anfotérica, ou seja, podem comportar-se como ácidos e bases. D) insaturada, ou seja, possuírem duplas ligações em sua estrutura. E) anfifílica, ou seja, possuírem uma parte hidrofílica e outra hidrofóbica. 2. (ENEM) O DNA (ácido desoxirribonucleico), material genético de seres vivos, é uma molécula de fita dupla, que pode ser extraída de forma caseira a partir de frutas, como morango ou banana amassados, com uso de detergente, de sal de cozinha, de álcool comercial e de uma peneira ou coador de papel. O papel do detergente nessa extração de DNA é A) aglomerar o DNA em solução para que se torne visível. B) promover lise mecânica do tecido para obtenção do DNA. C) emulsificar a mistura para promover a precipitação do DNA. D) promover atividades enzimáticas para acelerar a extração do DNA. E) romper as membranas celulares para liberação do DNA em solução. 3. (UNIFOR) Uma membrana constituída somente de fosfolipídios experimenta uma transição nítida da forma cristalina para forma fluída quando é aquecida. Contudo, uma membrana contendo 80% de fosfolipídios e 20% de colesterol experimenta uma mudança mais gradual da forma cristalina para forma fluída, quando aquecida pela mesma faixa de temperatura. Fonte: PRATT, C. W. & CORNELY, K. Bioquímica Essencial. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2006 Isto ocorre porque A) os fosfolipídios são todos formados por ácidos graxos de cadeias saturadas. B) o colesterol aumenta a flexibilidade da membrana tornando-a mais fluída. C) o colesterol estabiliza a membrana em função de seu sistema plano de anéis. D) o colesterol favorece a compactação íntima das cadeias acilas. E) os fosfolipídios insaturados favorecem a aproximação das cadeias acilas. 4. (UNIFOR) Observe, na figura, uma representação da membrana plasmática. 1 e 2 correspondem, respectivamente, a A) fosfolipídeo e proteína. B) proteína e colesterol. C) colesterol e ácido graxo. D) lipídeo e ATP. E) glicoproteína e hormônio. 188 Simétrico Pré-Universitário – Curso de Biologia – Prof. Landim – www.simetrico.com.br 188 5. (UECE) A membrana plasmática, também chamada de membrana celular, consiste em um envoltório composto por fosfolipídios e proteínas encontradas em todas as células vivas. Nos vegetais, o reforço externo dessa membrana é: A) rígido, quitinoso e denominado de parede celular. B) rígido, celulósico e impermeável quando impregnado de suberina. C) elástico, celulósico e responsável pela proteção das células vegetais. D) elástico, celulósico e de natureza exclusivamente proteica. 6. (UECE) As células apresentam um envoltório, que as separa do meio exterior, denominado membrana plasmática, extremamente fina. A disposição das moléculas na membrana plasmática foi proposta por Singer e Nicholson, e recebeu o nome de Modelo Mosaico Fluido, que pode ser definido como A) dupla camada lipídica com extremidades hidrofóbicas voltadas para o interior da célula e extremidades hidrofílicas voltadas para proteínas globulares, presente apenas em eucariontes. B) uma camada lipídica com extremidades hidrofílicas voltadas para dentro e extremidades hidrofóbicas voltadas para proteínas globulares, em que as proteínas encontram-se estendidas sobre a membrana e ocupam espaços vazios entre lipídios. C) uma camada monomolecular composta apenas por lipídios, presente em todas as células, sejam elas procariontes ou eucariontes. D) dupla camada lipídica com extremidades hidrofóbicas voltadas para o interior e as hidrofílicas voltadas para o exterior, composta por proteínas (integrais ou esféricas) e glicídios ligados às proteínas (glicoproteínas) ou lipídios (glicolipídios). 7. (UECE) A membrana plasmática tem como principal função selecionar as substâncias e partículas que entram e saem das células. Para sua proteção, a maioria das células apresenta algum tipo de envoltório. Nos animais esse envoltório é denominado glicocálix e nos vegetais é denominado parede celulósica. Em relação às células animais, é correto afirmar-se que o glicocálix A) compreende o conjunto de fibras e microvilosidades que revestem as células das mucosas. B) é representado pelo arranjo de estruturas como interdigitações e desmossomos fundamentais à dinâmica celular. C) é composto exclusivamente pelos lipídios e proteínas presentes nas membranas dessas células. D) pode ser comparado a uma manta, formada principalmente por carboidratos, que protege a célula contra agressões físicas e químicas do ambiente externo. 8. (UECE) A respeito da plasmalema podemos afirmar, corretamente, que nas células vegetais: A) a presença de colesterol é tão abundante quanto nas células animais. B) tanto elas quanto as células bacterianas possuem reforço mecânico denominado parede celular. C) a citocinese é centrípeta, ao contrário das células animais, onde é centrífuga. D) a estrutura de mosaico fluido é inconsistente em virtude da rigidez imposta pela presença da celulose na sua constituição. 9. (UECE) O fragmoplasto é uma estrutura: A) que se forma pela fragmentação dos plastídeos durante a autofagia de células vegetais. B) que contém DNA, enzimas e ribossomos, sendo capaz de dar origem aos diversos tipos de plastos. C) que se destaca da membrana plasmática, como uma bolsa, durante o processo de endocitose, dando origem a fagossomos e pinossomos. D) que se forma durante a divisão de células vegetais, apresentando-se em forma de placa, onde as moléculas de celulose começam a se depositar para formar a parede celular 10. (UECE) Em relação à parede celular vegetal podemos afirmar corretamente: A) é de natureza celulósica, rígida e impermeável. B) serve de proteção à célula contra microorganismos “invasores” e é rica em vacúolos heterofágicos. C) serve de proteção à célula e é permeável à passagem de substâncias. D) é constituída exclusivamente de celulose sendo, por isso, rígida e impermeável à água. 11. (FCM-JP) Assinale a alternativa correta correspondente às situações abaixo: (_) as membranas plasmáticas contém proporções de proteínas, lipídios e açúcares que variam consideravelmente de um tipo de célula para outro. (_) forma com o sistema de endomembranas uma continuidade transitória. (_) os glicolipídios são responsáveis por fixar as toxinas bacterianas. (_) as proteínas de membrana são capazes de transportam informações para receptores quer nucleares quer citoplasmáticos. A) FFVV. B) FVFV. C) VVFF. D) FVVF. E) VFFV. 12. (FCM-CG) Uma das características das células vegetais é a existência de pontes citoplasmáticas que interligam células vizinhas. Estas estruturas são conhecidas como: A) Zonula occludens. B) Desmossomos. C) Plasmodesmos. D) Dictiossomos. E) Microvilosidades. 13. (FSM) As células animais possuem revestimento externo que protege a superfície da célula de possíveis lesões; confere viscosidade às células em movimentos, possibilitando “deslizamentos”; participa de sistemas imunitários,pois dá à célula uma identidade, esse revestimento é denominado: A) desmossomos. B) glicocálix. C) microvilosidades. D) interdigitações. E) zônulas de adesão. 14. (UNP) As membranas celulares são estruturas que delimitam todas as células vivas, estabelecendo uma interface entre os meios intra e extracelulares. No caso de pessoas portadoras de diabetes tardio, ou tipo II, as membranas de algumas células possuem poucos receptores para a insulina, diminuindo o transporte de glicose. Esses receptores têm característica de: A) Fosfolipídeos. B) Glicoproteínas. C) Enzimas. D) Esteróides. 15. (UNP) A especificidade do sistema ABO de grupos sanguíneos depende de moléculas de oligossacarídeos de cadeia curta e 189 Simétrico Pré-Universitário – Curso de Biologia – Prof. Landim – www.simetrico.com.br 189 parecidos entre si, presentes na face externa da membrana plasmática das hemácias. Nas hemácias do grupo A, o monossacarídeo terminal da cadeia oligossacarídica é a N- acetilgalactosamina e nas do grupo B o açúcar é a galactose. Quando esses monossacarídeos terminais estão ausentes, as hemácias pertencem ao grupo O. As moléculas de oligossacarídeos constituem o(a): A) parede celular. B) ectoplasma. C) glicocálice. D) cápsula. 16. (UNINASSAU) As duplas capas lipídicas são o fundamento de todas as membranas biológicas e sua estrutura se ajusta ao modelo de mosaico fluido de Singer e Nicholson (1972). A imagem anterior representa o modelo do mosaico fluido. Sobre a morfologia e o funcionamento da membrana plasmática, identifique a alternativa correta a seguir. A) A bicamada de fosfolipídios permite a passagem de substâncias indiscriminadamente através de sua estrutura. B) As proteínas inseridas na bicamada lipídica permitem a passagem de substâncias lipossolúveis (Ex: glicose) pela membrana. C) O glicocálix é formado por polissacarídeos ligados a proteínas ou lipídios e tem como uma de suas funções permitir a passagem de substâncias da parte interna para a parte externa da célula. D) A bicamada lipídica tem uma região polar ou hidrofílica, voltada para periferia da membrana, e uma região hidrofóbica ou apolar, localizada na região central da membrana. E) O colesterol é componente encontrado em todas as membranas celulares promovendo a elasticidade das mesmas. 17. (UPE) Sobre a constituição química da membrana plasmática e de seus envoltórios em diferentes organismos, assinale a alternativa correta. A) O glicocálix, um envoltório externo à membrana plasmática de células animais, vegetais e protistas como as amebas, é constituído por glicoproteínas, que são moléculas de glicídios associadas a proteínas, e por glicolipídios, que são moléculas de glicídios associadas a lipídios. B) A parede da célula bacteriana é uma estrutura complexa e resistente, que, em sua composição, contém peptidioglicano constituído por moléculas do polissacarídio glicosaminoglicano unidas a cadeias formadas por quatro aminoácidos. C) As células vegetais são envolvidas externamente por uma parede celulósica, que contém além de celulose, lignina e quitina, cuja principal função é a de dar rigidez ao corpo das plantas, atuando na sustentação esquelética. D) As membranas celulares são formadas por fosfolipídios organizados em duas camadas, nas quais se incrustam moléculas protéicas. Um fosfolipídio é um glicídio combinado a um grupo fosfato. E) O colesterol, presente nas membranas celulares dos vegetais, animais e micoplasmas, é um esteróide composto por átomos de carbono interligados, formando quatro anéis carbônicos ligados a outros átomos, como hidrogênio e oxigênio. 18. (UNIFESP) No tubo 1 existe uma solução contendo células de fígado de boi. Em 2, há uma solução de células extraídas de folhas de bananeira. Você deseja eliminar completamente todos os constituintes dos envoltórios celulares presentes em ambos os tubos. Para isso, dispõe de três enzimas digestivas diferentes: C: digere carboidratos em geral. L: digere lipídios. P: digere proteínas. Para atingir seu objetivo gastando o menor número possível de enzimas, você deve adicionar a 1 e 2, respectivamente: A) 1 = C; 2 = P. B) 1 = L; 2 = C. C) 1 = C e P; 2 = C e L. D) 1 = C e P; 2 = C, L e P. E) 1 = L e P; 2 = C, L e P. 19. (UFPI) Observe o esquema representativo da membrana plasmática de uma célula eucariótica e marque a alternativa com informações corretas sobre o modelo mosaico fluido. A) O mosaico fluido é descrito como uma bicamada de fosfolipídios (1), na qual as proteínas integrais (4) da membrana atravessam a bicamada lipídica. Os oligossacarídeos (2) estão fixados à superfície somente às proteínas, e o colesterol (5) age somente diminuindo a fluidez da membrana, de forma independente da sua composição de ácidos graxos. B) As proteínas de membrana (3) estão incrustadas na dupla lâmina de colesterol, aderidas ou atravessando a membrana de lado a lado, como as proteínas transportadoras (4), que facilitam o transporte por difusão facilitada. C) Os fosfolipídios (1) e os oligossacarídeos (2) que constituem o glicocálix estão associados às proteínas. As proteínas integrais (3) têm regiões polares que penetram na bicamada fosfolipídica, ao contrário das periféricas (4) que apresentam regiões apolares. O colesterol (5) pode aumentar a fluidez da membrana, não 190 Simétrico Pré-Universitário – Curso de Biologia – Prof. Landim – www.simetrico.com.br 190 dependendo de outros fatores como a composição de ácidos graxos. D) Os fosfolipídios (1) conferem dinamismo às membranas biológicas e os oligossacarídeos (2) que constituem o glicocálix podem estar associados aos lipídios ou às proteínas. As proteínas integrais (3) têm regiões hidrofóbicas que penetram na bicamada lipídica, ao contrário das periféricas (4), que apresentam regiões polares. O colesterol (5) pode aumentar ou diminuir a fluidez da membrana, dependendo de outros fatores, como a composição de ácidos graxos. E) As proteínas da membrana estão incrustadas na dupla lâmina de fosfolipídios, aderidas (1) ou atravessando a membrana de lado a lado, como as periféricas (4), que facilitam o transporte por difusão facilitada. O colesterol (5) não interfere na fluidez da membrana, dependendo de outros fatores, como a composição dos ácidos graxos. 20. (UFPB) Acerca da membrana plasmática e da parede celular, identifique com V a(s) afirmativa(s) verdadeira(s) e com F, a(s) falsa(s). (_) Os fosfolipídios são constituintes importantes das membranas plasmáticas e possuem regiões hidrofílicas e hidrofóbicas. (_) Os carboidratos não fazem parte da composição das membranas plasmáticas. (_) A membrana plasmática das células animais pode apresentar um envoltório externo chamado glicocálix. (_) Celulose e lignina são os principais componentes da parede secundária da célula vegetal. (_) A parede primária, nas células vegetais, fica depositada entre a membrana plasmática e a parede secundária. A sequência correta é: A) VFVVV. B) FVVFF. C) VFFVV. D) VFVVF. E) FVFVF. 21. (UFPB) Os dois exemplos abaixo referem-se a anomalias orgânicas que ocorrem em seres humanos e que estão relacionadas à constituição das membranas citoplasmáticas. Exemplo I: “Os indivíduos com diabetes tipo II possuem, nas membranas citoplasmáticas de suas células, poucos receptores para o hormônio insulina, o que acarreta um acúmulo de glicose no sangue”. Exemplo II: “A fibrose cística é uma doença caracterizada pela secreção de muco muito viscoso e de difícil fluxo pelos ductos glandulares. Esse problema é desencadeado pela alteração molecular que inativa os elementos bombeadores do cloro através das membranas citoplasmáticas das células”. Nos exemplos I e II, os constituintes das membranas destacados em negrito correspondem a A) carboidratos,no exemplo I, e a proteínas, no exemplo II. B) proteínas, no exemplo I, e a lipídios, no exemplo II. C) proteínas, no exemplo I, e a carboidratos, no exemplo II. D) proteínas, nos dois exemplos. E) carboidratos, nos dois exemplos. 22. (UFCG) A membrana plasmática é uma fina película lipoproteica que participa do metabolismo celular e atua no processo de seleção de substâncias que transitam entre os ambientes interno e externo da célula. Dessa forma, a membrana separa o conteúdo celular do meio circundante, garantindo a estabilidade do meio interno. O diagrama abaixo mostra o modelo de mosaico fluido da membrana. Figura adaptada de Adolfo, Crozeta e Lago. Biologia, 2ª Ed. 2005 p. 51. Em relação à membrana plasmática é incorreto afirmar: A) As glicoproteínas são moléculas presentes na membrana plasmática e têm função de mediar mecanismos de transporte passivo de sódio e potássio através da membrana, estabelecendo níveis ótimos de concentração desses íons, e, em última instância, são responsáveis pela homeostase celular. B) Nas membranas celulares se encontram tipos distintos de lipídeos e estes podem ser classificados em dois amplos grupos: os que contêm ácidos graxos (fosfolipídios) e os que não os contêm (colesterol). C) As proteínas integrais estão incrustadas na membrana plasmática e muitas delas a atravessam completamente, sendo acessíveis por dentro e por fora da membrana. D) Os fosfolipídios da membrana plasmática são anfipáticos, têm uma cabeça polar hidrofílica e uma região hidrofóbica, devido às longas cadeias hidrocarbonadas dos dois ácidos graxos. E) As proteínas da membrana plasmática desempenham funções importantes, dentre estas, atividade enzimática, funcionam como carreadores ou canais para o movimento das moléculas e íons, para dentro ou para fora das células. 23. (UFF) Considere a experiência relatada a seguir: - Incubaram-se células de camundongo com anticorpos marcados com rodamina (fluorescência vermelha), os quais reagem com proteínas de membrana de células de camundongo. - Incubaram-se células humanas com anticorpos marcados com fluoresceína (fluorescência verde), os quais reagem com proteínas de membrana de células humanas. - Promoveu-se a fusão das células de camundongo com as células humanas, ambas já ligadas aos anticorpos. - Observaram-se, ao microscópio de fluorescência, as células híbridas formadas logo após a fusão e quarenta minutos depois.