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Biologia Molecular

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Na extração de RNA, todos os cuidados citados abaixo devem ser tomados, exceto:
Uso de solução fenol/clorofórmio em pH ácido.
Todo material deve ser RNAse free e lavado com soluções neutralizadoras de RNAses.
É preferível uso de um aparelho sonicador para a quebra das membranas celulares, ao invés do uso de detergentes.
Na extração de RNA, usamos acetato de amônio para auxiliar a separação entre a fase orgânica e a aquosa.
RNA deve ser rapidamente congelado em nitrogênio líquido.

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mês passado

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Tema 3 Isolamento de Ácidos Nucléicos

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ESTÁCIO

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Ed

mês passado

Na extração de RNA, o cuidado que não deve ser tomado é o uso de solução fenol/clorofórmio em pH ácido. O pH ácido pode degradar o RNA, por isso é preferível usar um pH neutro ou ligeiramente alcalino para preservar a integridade do RNA durante o processo de extração.

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Após completar a extração do DNA de uma amostra de sangue, não há como saber se a extração foi devidamente realizada a não ser que se faça um controle de qualidade do material extraído.
Com relação ao controle de qualidade, podemos afirmar que:
É composto por três etapas: A quantificação, coloração e validação.
Deve ser realizado a partir da observação, estabelecimento de hipóteses, análise, conclusões e divulgação de um relatório final.
A etapa de quantificação apenas pode ser realizada com o uso da técnica de fluorometria.
A espectrofotometria mede a quantidade de luz, na faixa de 260 nm, absorvida pelo DNA e RNA, desta forma é capaz de quantificar e identificar a pureza da amostra.
A eletroforese é feita para medir a integridade do extraído e tem como princípio diferenciar a solubilidade de cada componente.

Hoje em dia, o trabalho com material genético tornou-se rotineiro. Para uma correta extração de ácidos nucleicos, é importante a escolha adequada de protocolos e reagentes para aquele material que se quer extrair e para que fim se destina.
Em um protocolo de extração de DNA ou RNA, não se deve usar como reagente:
A- Proteases
B- Tampão
C- Nucleases
D- Sais
E- Álcool

Um pesquisador está organizando um experimento para testar a eficiência de três métodos de extração de DNA a partir de células bucais coletadas com swab. Para garantir a validade científica dos resultados, ele decide adotar um desenho experimental rigoroso, baseado em amostragem aleatória simples e controle das variáveis independentes.
Considerando os fundamentos do desenho experimental e as boas práticas laboratoriais, qual atitude representa um erro metodológico que pode comprometer a confiabilidade dos resultados?
A- Incluir apenas voluntários que consentiram participar do estudo.
B- Definir previamente a concentração dos reagentes utilizados em cada extração.
C- Utilizar um mesmo técnico para realizar todas as extrações, minimizando a variação.
D- Adotar como critério de seleção apenas os voluntários disponíveis no dia da coleta.
E- Realizar as análises utilizando o mesmo equipamento para todos os testes.

Para selecionar uma amostra aleatória de tamanho n de uma população formada por N unidades, que são numeradas de 1 a N segundo uma certa ordem, escolhe-se aleatoriamente uma unidade entre as k primeiras unidades da população, onde k = N / n e seleciona-se cada k-ésima unidade da população em sequência. Esta técnica de amostragem denomina-se amostragem:
A Sistemática
B Por etapas
C Probabilística
D Não-probabilística
E Aleatória simples

O papel do detergente nessa extração de DNA é:
A - Aglomerar DNA em solução para que se torne visível.
B - Promover lise mecânica do tecido para obtenção de DNA.
C - Emulsificar a mistura para promover a precipitação do DNA.
D - Promover atividades enzimáticas para acelerar a extração do DNA.
E - Romper as membranas celulares para liberação do DNA em solução.

Você foi contratado por uma empresa de coleta de DNA para realizar testes de ancestralidade, a coleta é feita com swab pelo próprio cliente e o tubo chega em suas mãos.
Leia as alternativas e marque a incorreta.
A - A amostra coletada pode ficar por até uma semana em temperatura ambiente.
B - O kit utilizado para a coleta de DNA deve possuir informações claras e objetivas.
C - A coleta pode ser realizada, sem a necessidade de ir ao laboratório.
D - O swab utilizado deve estar limpo, sem detritos, caso tenha marcas de batom ou restos de comida o cliente deve repetir procedimento.
E - O tubo deve conter apenas swab limpo dentro dele.

Com relação à coleta, transporte, armazenamento e processamento de amostras de sangue para posterior extração de DNA, avalie as sentenças e assinale a alternativa INCORRETA:
A amostra de sangue fresca deve ser imediatamente resfriada e mantida a 2-8°C até a extração do DNA.
O agente anticoagulante preferencialmente utilizado é o EDTA ao invés da heparina.
Tubos de vidro devem ser evitados.
O rompimento das hemácias pode liberar grupamento heme, este é um contaminante prejudicial. Portanto, devemos separar plasma.
A amostra de sangue não precisa ser resfriada e pode ser transportada em temperatura ambiente por até 2 dias.

Em um laboratório especializado na extração de RNA a partir de tecidos tumorais, uma bióloga observou que a qualidade do RNA extraído estava comprometida, com sinais de degradação. Após revisar os protocolos, verificou-se que a amostra foi deixada à temperatura ambiente por cerca de 3 horas antes da adição de qualquer solução estabilizante.
Qual das alternativas descreve, de forma mais precisa, motivo da degradação observada?
A- A presença de hemoglobina nas células tumorais acelera a degradação do RNA.
B- A amostra não foi embebida em formol, comprometendo a integridade do RNA.
C- A ausência de solução estabilizante permitiu a ação contínua de ribonucleases.
D- O transporte da amostra foi feito sem gelo seco, aumentando a atividade das DNases.
E- A demora na adição de agentes quelantes impossibilitou a extração adequada do RNA.

Durante uma capacitação em um laboratório de análises clínicas, a equipe responsável pelos testes moleculares está revisando os procedimentos para garantir a qualidade das análises. Um dos técnicos relata que uma amostra de sangue utilizada em um teste de PCR apresentou resultado inválido. Ao investigar o caso, a equipe descobriu que o sangue foi armazenado com heparina como anticoagulante.
Diante dessa situação, qual das opções explica, de forma mais adequada, a razão pela qual o resultado do teste foi comprometido?
A- A heparina impede a separação do plasma, impossibilitando a extração do DNA.
B- A heparina interfere nas reações químicas da PCR, inibindo a amplificação do material genético.
C- A presença de heparina acelera a degradação do RNA, comprometendo os testes moleculares.
D- A heparina causa lise dos leucócitos, impedindo a identificação de polimorfismos genéticos.
E- A utilização de heparina reduz a quantidade de plasma disponível para análise, tornando o teste inconclusivo.