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• Trata-se de cultura de fezes; • Habibitualmente, é pesquisada a presença de agentes bacterianos mais comuns em nosso meio: → Salmonella spp → Shigella spp → Alguns sorotipos de E.coli → Campylobacter Nesse caso, é importante que sejam mencionados na solicitação médica, para direcionarmos o diagnóstico. → Yersinia ssp → vibrio cholerae • 1 a 2g (equivale a 1 colher de sobremesa) no início do quadro diarreico; • Coletar antes de antibioticoterapia; • Fezes sem conservantes devem ser encaminhadas ao laboratório à temperatura ambiente (20-25°C) e processadas em 1h após a coleta; • Fezes com conservante podem ser mantidas refrigeradas de 2 a 8°C por 24 a 48h. ***Shigella não resiste à refrigeração. Não resiste muito tempo em meio sem conservante. GLICERINA TAMPONADA Recomendada para Salmonella spp e Shigella spp, mas não para Campylobacter ou Vibrio spp, a não ser que seja suplementada com CaCl2. CARY BLAIR Para Shigella e Vibrio cholerae. • Utilizado para inibir ou diminuir a quantidade de microrganismos da microbiota intestinal habitual das fezes e favorecer o desenvolvimento dos patógenos entéricos; • São usados na etapa de processamento inicial o Caldo GN: para Shigella e Salmonella o Selenito F: para Shigella e Salmonella o Tetrationato de Kauffman: melhor para Salmonella, exceto Typhi e Parathyphi Permitem o crescimento apenas de patógenos entéricos, inibindo as outras enterobactérias: → SS (Salmonella-Shigella): seleciona Salmonella spp, e algumas vezes pode ser inibitório para Shigella spp Microbiologia Clínica → HE (Hektoen Enteric): recomendado para Salmonella, Shigella e Vibrio → XLD (Xilose-Lisina-Desoxicolato): para Salmonella e Shigella spp Ágar SS (Salmonella e Shigella). As colônias de salmonela irão crescer devido à produção de gás H2S HE (Hektoen Enteric) recomendado para salmonela, shigella e víbrio. Salmonella Shigella XLD (xilose-lisina-desoxicolato) para salmonela e shigella spp. • Meios diferenciais: utilizados para diferenciar bactérias fermentadoras de não fermentadoras. Ágar Mac Conkey Ágar EMB → COLÔNIAS LAC+ (COM COR) → COLÔNIAS LAC– (INCOLORES) Proteus spp (com swarmming ou véu) Colônias H2S + • Não são recomendados para utilizar na rotina, já que não apresentam melhor custo/benefício em relação aos outros • São recomendados para uso em investigação de surtos de Salmonella spp, mas não para o isolamento de Shigella spp o VB (verde brilhante): isolamento de Salmonella, exceto Typhi e Paratyphi o Meio cromogênico: para Salmonela, inclusive, Typhi e Paratyphi Meio VB Meio cromogênico → Skirrow: base de agar sangue, soro lisado de cavalo e solução de antibióticos → AS Campy: base de agar brucella com sangue de carneiro e solução de antibióticos → Meio de Karmali: meio contendo carvão ativado e solução de antibiótico Salmonella, shigella e E. Coli devem ser pesquisadas quanto aos seus sorotipos através da realização de sorologia. • Provas bioquímicas de identificação bacteriana • Ágar TSI (triple sugar iron): • SIM: Meio turvo → motilidade +; Meio límpido: motilidade -; → Teste do indol: detecta a produção de indol pela bactéria em meio de cultivo contendo o aminoácido triptofano através da catálise da enzima triptofanase. ▪ O meio de cultura deve conter triptofano e reagente de Kovac’s (amarelo), que reage com o indol produzindo um composto rosado; ▪ Culturas com anel avermelhado na superfície são indol positivo; → SIM com gás sulfídrico positivo: • Uréia: → Determina a habilidade do microrganismo de degradar a uréia em duas moléculas de amônia pela ação da enzima urease. → Em caso de reação positiva, irá ocorrer alcalinização intensa do meio, tornando-o rosa pink. • Citrato de Simmons: o Verifica a capacidade da bactéria de utilizar o citrato de sódio como única fonte de carbono, juntamente com sais de amônia como fonte de nitrogênio. o No caso de reação positiva, haverá alteração do pH, que se torna alcalino e provoca a viragem do indicador de pH (azul de bromotimol) para azul. • Lisina descarboxilase: o Se a bactéria for produtora dessa enzima, há liberação de CO2 e descarboxilação da lisina com produção de cadaverina (composto alcalino que neutraliza os ácidos produzidos na fermentação da glicose). Ocorre a viragem do indicador de pH novamente: o meio muda de amarelo e volta a ser púrpura (reação positiva). • Fenilalanina: o Algumas bactérias têm a capacidade de realizarem a desaminação oxidativa da fenilalanina através da enzima fenilalanina desaminase; o Como produto, formará o ácido fenilpirúvico, que, pode ser ácido, irá acidificar o meio; o Para a leitura da prova, é necessário a utilização de cloreto férrico a 10%, que irá revelar o resultado do teste; o Quando positivo: apresenta cor verde.