Relatório finalizado

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UNIVERSIDADE CIDADE DE SÃO PAULO - UNICID
CURSO: FARMÁCIA
DISCIPLINA: BIOQUÍMICA
AULA PRÁTICA DE EXTRAÇÃO DE DNA
			 
Ana Carla da Silva Cristo RGM 1999975-5
Ana Maria Barros Augusto RGM 2038296-1
Angela Sabonnge RGM 2068528-9
Milena Eliadi RGM 2019691-1
Rogério da Rocha Silva RGM 1953846-1
Thainá Cardoso Valença RGM 2026179-1
Thayná Rodrigues Ferrato RGM 2003660-4
Wagner Vieira Marques RGM 2024019-8
Prof. Adriano dos Santos Oliveira
São Paulo
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2019
SUMÁRIO
1.	INTRODUÇÃO	2
2.	OBJETIVO GERAL	2
3.	MATERIAIS E MÉTODOS	2
3.1	MATERIAIS E REAGENTES	2
3.2	METODOLOGIA	3
4.	RESULTADOS	3
5.	DISCUSSÃO	4
6.	CONCLUSÃO	9
 REFERÊNCIAS.....................................................................................10 
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1. INTRODUÇÃO
Atividade feita com o objetivo de extrair o DNA das células vegetais, analisar quebra das ligações na molécula de DNA, e separar o DNA das proteínas. O DNA é o suporte físico da informação genética responsável pelo desenvolvimento e funcionamento dos seres vivos, ele que transmite características hereditárias de cada ser vivo. É composto com ácidos. A molécula do DNA é constituída por unidades básicas designadas por nucleotídeos, que por sua vez são formados por uma base nitrogenada, uma pentose (glicídio com 5 carbonos) e um grupo fosfato (ácido fosfórico), designando este conjunto por nucleotídeo. O DNA é formado por uma dupla hélice, com duas cadeias polinucleotídicas que se dispõem em sentidos inversos, sendo assim antiparalelas. Estas duas cadeias dispõem em sentidos inversos, sendo assim antiparalelas. Estas duas cadeias estabelecem uma ligação feita através de pontes de hidrogênio entre as bases nitrogenadas. 
2. OBJETIVO GERAL
 A aula prática teve como objetivo a extração do DNA da cebola, banana e da casca da banana. 
3. MATERIAIS E MÉTODOS 
3.1 Materiais e Reagentes
· Material biológico (banana, casca da banana e cebola)
· Sal
· Detergente
· Álcool etílico
· Filme plástico
· Becker
· Espátula
· Termômetro
· Banho maria
· Gelo
· Funil
· Bacia
3.2 Metodologia
· Coloque água até ¾ do volume do becker. Acrescente o detergente líquido e o sal de cozinha e misture vagarosamente com uma colher (solução de lise).
· Pique o material vegetal em pequenos pedaços, coloque-o dentro do becker com a solução de lise e misture vagarosamente com uma colher. Cubra o copo com filme plástico.
· Incube o becker em banho-maria a 70°C por 20min.
· Retire o becker do banho maria, filtre o material utilizando o funil e recolha o filtrado em outro copo.
· Coloque o becker com o material filtrado em um banho de gelo e deixe esfriar por 5 min.
· Retire o becker do gelo e adicione o álcool gelado escorrendo vagarosamente pela parede do becker. O volume de álcool deve ser aproximadamente equivalente ao do material filtrado.
4. RESULTADOS 
 Após a extração realizada, com a banana, a casca da banana e a cebola foi observado o DNA. Devido ao método realizado através dos agentes físicos e químicos utilizados, com a lide da membrana, a precipitação do NaCl e o isolamento do DNA. Notou-se em maior quantidade o DNA da banana e sua casca, formando uma nuvem esbranquiçada (Figura1). 
 Figura 1. Isolamento do DNA de cada alimento
5. DISCUSSÃO
 As aulas práticas experimentais são de vital importância, servem para serem colocadas em prática hipóteses e ideias aprendidas em sala de aula. No experimento realizado pra extrair e visualizar o DNA dos vegetais utilizados foi necessário seguir à risca as instruções dadas pelo professor em laboratório, utilizando assim o passo a passo que ele nos forneceu, foi obtido o resultado desejado. Abaixo seguem os procedimentos realizados durante o experimento e qual a função e importância de cada para obtenção da meta.
· Solução de lise: Era composta de água, detergente e sal. (Figura 2)
 Figura 2. Solução de Lise
Função do Detergente
As membranas, plasmática e nuclear, são compostas principalmente por lipídios. A função do detergente por ser apolar é desestruturar as moléculas de lipídio das membranas biológica rompendo-as e fazendo com que todo conteúdo celular, inclusive o DNA, fica disperso na solução. 
Função do Sal
 A adição do sal (NaCl) no início da experiência proporciona um ambiente favorável para a extração, pois o sal, depois de dissolvido na água, se dissocia e contribui com íons positivos que neutralizam a carga negativa do grupo fosfato do DNA. As moléculas de DNA passam a não sofrer repulsão de cargas entre si, o que favorece sua aglomeração.
 
· Maceramento: Cebola, casca da banana e o interior da banana foram macerados para que a parede celular (estrutura espessa é rígida presente em células vegetais) fosse rompida. Houve a aplicação de força mecânica para também romper a membrana plasmática de algumas poucas células, embora esta estrutura deva ser desestruturada quimicamente. Além disso, o maceramento dissocia os tecidos, permitindo que a solução de lise (detergente + sal) aja sobre um número maior de células, liberando um grande número de moléculas de DNA. Assim, a cebola, casca da banana e banana deve ser muito bem macerada para garantir um bom rendimento do experimento. (Figuras 3 e 4).
 Figura 3. Retalhamento da casca da banana 
 
 
 Figura 4. Retalhamento da cebola 
 
· Banho-maria
O aquecimento em banho-maria (conforme figura 5) durante 20 minutos, com o aumento da temperatura (70ºC) é promovido uma maior agitação molecular, o que ajuda o detergente a desestabilizar as membranas lipídicas. Além disso, a temperatura inativa as enzimas que podem degradar o DNA (DNAases). 
 Figura 5. Solução em banho-maria 
· A filtragem
Com a filtragem (figura 6) do material é possível separar restos de estruturas celulares da solução, contendo DNA de outras moléculas.
 Figura 6. Filtragem 
 
· Resfriamento
O resfriamento no banho de gelo por aproximado 5 minutos que ajudou na precipitação do DNA (figura 7).
 Figura 7. Resfriamento em banho de gelo
 
· Adição do álcool
 O álcool ele será utilizado após o processo de peneiração, porque ele tem a função de desidratar o DNA, de forma que este não mais fica dissolvido no meio aquoso. Além disso, o DNA tende a ser insolúvel em álcool (conforme a figura 8) e deste modo, suas moléculas se agrupam. Como o DNA tem menor densidade que os outros constituintes celulares, ele surge na superfície do extrato. Quanto mais gelado o álcool, menos solúvel será o DNA. 
 Figura 8. Álcool sendo adicionado
· Resultado final
Foi possível observar o DNA abaixo da pectina (figura 9) na fase alcoólica como filamentos de nuvens conforme a proposta do experimento. O sucesso foi obtido com os três becker’s utilizados, porém o DNA da banana ficou muito mais visível do que o da cebola. (Figura 10 e 11)
 Figura 9. Observação DNA
 Figura 10. Resultado com casca da banana visto de cima 
 
 Figura 11. Resultado da extração da banana visto de cima
 
6. CONCLUSÃO
Com o procedimento finalizado, foi possível extrair o DNA da banana, da casca da banana e da cebola através de um método simples. Para isso, cinco etapas contribuíram na extração dessa molécula. Na primeira, (maceramento) foi possível destruir a parede celulósica que envolve a célula vegetal. Na segunda etapa, (banho-maria) o detergente foi responsável pelo rompimento da membrana citoplasmática e da liberação do DNA do suco. Na terceira etapa (filtragem) foi possível uma visualização mais nítida devido á separação. Na quarta etapa, (resfriamento) o DNA formou precipitado e assim na últimaetapa (adição do álcool), foi possível separar essa molécula do resto do suco. Com esse experimento, provamos a extração do DNA através dos resultados obtidos.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
· http://www.notapositiva.com/old/trab_estudantes/trab_estudantes/biologia/biologia_trabalhos/extraccaodna.htm, acesso em 18/03/2019
· Artigo Cientifico: O ensino da biologia através da experimentação www.scielo.com.br, acesso em 18/03/2019.