AULA_11_TESTE_DE_ANTIGLOBULINA

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Karla Melo 
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TESTES DE ANTIGLOBULINA
PROFª: KARLA MELO
FACULDADE MAURÍCIO DE NASSAU
GRADUAÇÃO EM BIOMEDICINA
DISCIPLINA: HEMOTERAPIA E BANCO DE SANGUE
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Karla Melo 
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Detecta aglutininas (anticorpos) que não causam aglutinação diretamente
Utiliza globulinas anti-humanas (AGH)
Ligam-se a globulinas humanas
IgG
Complemento
TESTE DE ANTIGLOBULINA 
OU TESTE DE COOMBS
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IgM		
PENTAMÉRIA
Aglutinam diretamente
IgG
MONOMÉRICA
Não aglutinantes
TESTE DE ANTIGLOBULINA OU TESTE DE COOMBS
A adição de antiglobulina permite a aglutinação
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POLIESPECÍFICA
Contém anticorpo contra:
1. IgG Humana
2. Fração C3d do complemento humano
Pouca ou nenhuma reatividade contra IgA ou IgM.
TIPOS DE REAGENTES
MONOESPECÍFICA
Contém apenas uma especificidade:
IgG Humana
Ou
Fração do complemento (anti-C3d-C3d)
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PRODUÇÃO POLICLONAL
Mistura de anticorpos de clones de plasmócitos diferentes.
Purificação de Ac a partir de um pool de soros.
Reconhecem determinantes antigênicos diferentes.
TIPOS DE REAGENTES
PRODUÇÃO MONOCLONAL
Derivados de um único clone de plasmócitos.
Tecnologia de hibridoma.
Reconhecem um único epitopo unidos com células de mieloma.
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TESTE DE ANTIGLOBULINA DIRETA (TAD) OU COOMBS DIRETO
Detecta Ac ligados à Hm
Sensibilização “in vivo” de hemácias
Evidencia uma reação já ocorrida no organismo
TESTE DE ANTIGLOBULINA INDIRETA (TAI) OU COOMBS INDIRETO
Detecta Ac livres no plasma
Sensibilização de hemácias “in vitro”.
Utiliza hemácias não sensibilizadas no organismo para serem testadas.
Não houve reação hemolítica no organismo
TIPOS
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TAD OU COOMBS DIRETO
PRINCÍPIO
AGH reage com globulinas ligadas às hemácais ou livres no soro
As hemácias são lavadas e os Ac livres são eliminados
As hemácias cobertas são aglutinadas
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TAD OU COOMBS DIRETO
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APLICAÇÃO
1. Doenças hemolítica do recém-nascido;
2. Reação transfusional hemolítica;
3. Anemias hemolíticas auto-imunes;
4. Anemias induzidas por drogas.
TAD OU COOMBS DIRETO
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TAI OU COOMBS INDIRETO
PRINCÍPIO
Hm não estão sensibilizadas no organismo
Junção Ag/Ac ocorre in vitro
AGH reage com globulinas ligadas às hemácais ou livres no soro
As hemácias são lavadas e os Ac livres são eliminados
As hemácias cobertas são aglutinadas
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TAI OU COOMBS INDIRETO
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APLICAÇÃO
1. Detecção de anticorpos 
Teste de compatibilidade e Triagem de Ac.
2. Identificação de um Ac
Painel de hemácias conhecidas;
3. Identificação de hemácias usando anti-soros conhecidos 
Detecçaõ de Ag eritrocitários (Teste D fraco);
4. Titulação de anticorpos.
TAI OU COOMBS INDIRETO
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TAI OU COOMBS INDIRETO
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TESTES IMUNO-HEMATOLÓGICOS: HEMAGLUTINAÇÃO
REAGENTES INTENSIFICADORES
Adicionados à mistura soro-células.
Objetivos
1. Reduzir o potencial zeta
2. Promover uma melhor ligação Ag-Ac
3. Detectar níveis mais baixos de anticorpos
Não são obrigatórios, mas reduzem o tempo de incubação
1. Salina de baixa potência iônica (LISS)
2. Polietilenoglicol (PEG)
3. Albumina bovina
4. Enzimas (bromelina, papaína)
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ETAPAS
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ROTINA ANTES DE UMA TRANSFUSÃO
ROTINA ANTES DE UMA TRANSFUSÃO:
1. Tipagens ABO eRh
2. Triagem de anticorpos
Pesquisa de anticorpos irregulares (PAI)
3. Teste de compatibilidade
Entre o paciente e o doador
Coombs indireto
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PAI
PESQUISA DE Ac IRREGULARES
IRREGULARES = INESPERADOS
Testa soro/plasma do paciente contra 2 ou 3 amostras de hemácias (células de triagem).
Doadores do grupo O, fenotipadas para os Ag mais comuns e clinicamente importantes.
D, C, E, c, e, M, N, S, s, P1, Le(a), Le(b), K, k, Fy(a), Fy(b), Jk(a), Jk(b).
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METODOLOGIA
Objetivo: detectar anticorpos irregulares clinicamente significantes
1ª fase: incubação a tempertura ambiente
2ª fase: incubação a 37ºC
3ª fase: teste de antiglobilina
PAI
PESQUISA DE Ac IRREGULARES
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TRIAGEM DE ANTICORPOS
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PAI
PESQUISA DE Ac IRREGULARES
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RESULTADO POSITIVO
IDENTIFICAÇÃO DO ANTICORPO
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Realizados para identificar a especificidade do anticorpo.
Pesquisar se é clinicamente significante.
Importância da história do paciente
Realizado com um painel de hemácias
8 a 16 suspensões de hemácias
PAI
PESQUISA DE Ac IRREGULARES
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PAI
PESQUISA DE Ac IRREGULARES
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IDENTIFICAÇÃO DE ANTICORPOS
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ANTICORPO IDENTIFICADO
FORNECIMENTO DE HEMÁCIAS APROPRIADAS PARA A TRANSFUSÃO - FENOTIPADAS
Se clinicamente significante, o sangue doado não pode conter os Ag relacionados
PROVA DE COMPATIBILIDADE (PROVA CRUZADA)
PAI
PESQUISA DE Ac IRREGULARES
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PROVA CRUZADA
MAIOR
É um tipo de TAI
Mistura:
Hm do doador e soro do receptor
Positivo: não pode ocorrer transfusão
Negativo: bolsa liberada para transfusão
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TECNICAS PARA TESTES IMUNO-HEMATOLÓGICOS
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TÉCNICA EM TUBO
Na técnica em tubo são utilizados tubos de vidro ou plástico medindo 10 mm ou 12 mm x 75 mm, onde são dispensados reagentes e amostras. 
Inicia com a suspensão das hemácias
Após centrifugação, procede-se a análise da aglutinação. 
Atentar para:
Certeza que dispensou os reagentes
Correta interpretação da aglutinação 
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Tubo
A
B
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Tubo
AB
O
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Técnica em Gel
Em 1985 foi desenvolvido pelo Dr. Yves La Pierre, Lyon França, na tentativa de encontrar metodologias com reações mais estáveis que os tradicionais em tubo 
São utilizados cartões contendo Gel Sephadex 6100 ou Poliacrilamida, a combinação antígeno-anticorpo é retida pelas micro esferas do gel, o que facilita a identificação da reação após centrifugação. 
Controle de duas variáveis especificas: 
Ressuspensão física dos botões eritrocitários 
Interpretação das reações de hemaglutinações 
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Técnica em Gel
Cada microtubo é composta por uma câmara de reação superior que é mais larga que o próprio tubo, e uma parte longa e estreita chamada coluna, mede de 5a7 cm, contendo 6 microtubos.
Ocorrendo reação antígeno-anticorpo, os aglutinados formados são retidos na superfície da coluna do gel, determinando o padrão de positividade do teste, já as hemácias livres irão se depositar no fundo do gel. 
Essa técnica é a mais utilizada para fenotipagem ABO, pesquisa de anticorpo e prova de compatibilidade.
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Técnica em Gel
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Técnica em Microplaca
Consiste na utilização de microplacas de acrílico com fundo em U, utilizada para automação. 
Esta é uma técnica mais utilizada por hemocentros, pois possuem uma maior demanda e necessidade de resultados rápidos.
O aparelho é maior, requer umas manutenções mais especializadas e reagentes adequados à técnica. 
A interpretação da aglutinação também é diferente: o botão de hemácias no fundo do tubo indica negativo e o tapete de hemácias em todo o poço indica positivo. 
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Técnica em Microplaca
P direta
P reversa
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CUIDADO: Principais causa de erros técnicos
Temperatura inadequada da amostra e de reagentes
Reagentes fora da validade
Contaminação de amostras e reagentes
Mal centrifugação (muito forte ou muito fraca)
Ressuspenção inadequada do botão das hemácias
Presença de hemólisee/ou aglutinação não valorizada
Presença de fibrina 
Preparação de suspensão de hemácias (muito forte ou muito diluída)
Troca de amostras (falha na identificação)
Falta de atenção ao não colocar amostra ou reagente
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Responda V ou F
1. Na DHRN a mãe torna-se sensibilizada pelos eritrócitos fetais que pode ocorrer quando uma mulher Rh+ (RR) tem filho com um homem Rh- (rr). 
2. Existe também incompatibilidade materno fetal ABO.
3. O anticorpo anti-D está presente no soro de todos os indivíduos Rh negativo.
4. O sistema Duffy está relacionado à resistência à malária.
5. A bolsa de sangue de doador que apresenta expressão fraca do antígeno RhD (D fraco) deve ser liberada como Rh negativo.
6. Os antígenos C,E podem induzir a formação de anticorpos e provocar uma sensibilização no receptor do CH 
7. A pesquisa de D fraco utiliza técnica de Coombs direto.
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