Relatório Biologia Molecular -- Aula Prática 7-- Extração DNA Humano 1

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PONTIFÍCIA UNIVERSIDADE CATÓLICA DE MINAS GERAIS 
BIOMEDICINA – 5º PERIODO 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Relatório: Extração DNA Humano 1 
 
 
 
 
 
 
 
 
Ana Clara Gonçalves Pereira 
Ana Luiza de Oliveira 
Andressa Carvalho Silva 
 
 
Março 2025 
POÇOS DE CALDAS 
 
PONTIFÍCIA UNIVERSIDADE CATÓLICA – PUC MINAS 
CAMPUS POÇOS DE CALDAS 
GRADUAÇÃO EM BIOMEDICINA 
DISCIPLINA: BIOLOGIA MOLECULAR 
2025 
 
Aluno(a): Ana Clara Gonçalves Pereira. 
Grupo: Ana Clara Gonçalves Pereira, Ana Luiza de Oliveira e Andressa Carvalho 
Silva. 
Prática 7: Extração de DNA humano 
 
1. INTRODUÇÃO 
O presente relatório descreve os resultados obtidos durante o experimento realizado 
na sexta aula prática de Biologia Molecular, conduzida no dia 12 de março de 2025. 
Sob a orientação do Prof. Lázaro Medeiros, o experimento teve como objetivo 
principal familiarizar os alunos, de forma dinâmica e prática, com as técnicas 
laboratoriais, especificamente no que diz respeito à extração de DNA humano. 
Em contraste com o experimento anterior, desta vez foi utilizado DNA humano como 
material biológico para a realização do procedimento. O grupo em questão adotou a 
técnica de bochecho para a coleta e extração do material genético, seguindo 
rigorosamente os protocolos estabelecidos no roteiro fornecido. 
 
2. OBJETIVO GERAL 
Realizar a extração de DNA humano. 
 
3. OBJETIO ESPECÍFICO 
Realizar os procedimentos de extração do DNA a partir de amostra de células 
humanas. 
 
4. FUNDAMENTO 
As técnicas de otimização da extração de DNA para a utilização na reação da 
polimerização em cadeia (PCR) têm permitido a investigação de diferentes amostras 
biológicas mesmo quando o DNA está presente em pequenas quantidades. Vários 
campos da ciência são beneficiados com esse aperfeiçoamento, como a medicina 
forense, as investigações criminais, exclusão de paternidade, a busca de marcadores 
tumorais ou agentes infecciosos, e o transplante de medula identificando a pega do 
enxerto. Pontas de cigarro, saliva, esfregaço bucal, soro, bulbos capilares, entre 
outros, podem fornecer informações importantes desde que analisados de forma 
adequada (BUENO, 2004 - https://doi.org/10.1590/S1516-84842004000400001) 
 
5. MATERIAIS E MÉTODOS 
• Bastão de vidro; 
• Solução de extração (detergente, NaCl e água); 
• Sal; 
• Espátula de madeira; 
• Água com açúcar (solução de açúcar); 
• Água destilada; 
• Álcool gelado; 
• Tubo cônico; 
• Tubo de ensaio e suporte; 
• Tubo Eppendorf; 
• Micropipeta e ponteira; 
• Pipeta de Pasteur; 
• Banho seco; 
• Centrífuga; 
• Congelador para a amostra de DNA. 
 
Aquisição da amostra 1: 
• Bochechar aproximadamente 10-15ml de água com açúcar (3% - uma colher 
de chá de açúcar em meio copo de água); 
• Adicionar aproximadamente 5 mL do material obtido no bochecho em um tubo 
cônico. 
Aquisição da amostra 2: 
• Raspar a mucosa da bochecha com uma espátula de madeira; 
• Espera-se maiores quantidades de células com este método 
• Adicionar aproximadamente 5 mL do material obtido no bochecho em um tubo 
cônico; 
• Misturar o material raspado com a espátula de madeira na solução de açúcar 
do tubo cônico 
Extração do DNA: 
• Adicione uma pitada de sal de cozinha; 
• Adicione algumas gotas (5-10) de detergente diluído à 25% (1:4) e 
homogeneizar vagarosamente; 
• Aquecer a 55 ºC por 10 min; 
• Resfriar 5 min no gelo; 
• Adicione de 2-3 mL de álcool gelado (absoluto se possível) pelas bordas do 
tubo lentamente; 
• Observar a precipitação do DNA. 
 
Figura 1- Resfriamento da amostra em gelo 
 
Fonte: Arquivos pessoais 
 
Purificação do DNA: 
• Retirar com uma pipeta de Pasteur o aglomerado de DNA mais o álcool do 
tubo cônico; 
• Inserir os materiais em um tubo do tipo “eppendorf”; 
• Centrifugar durante 1 minutos a 5.000 rpm; 
• Retirar o álcool e manter apenas o pellet formato no fundo do tubo; 
• Deixar o álcool secar a temperatura ambiente. 
Reidratação do DNA: 
• Acrescentar 100 a 200 µL de água ultrapura sobre o DNA extraído; 
• Homogeneizar com cuidado; 
• Armazenar o material extraído em temperatura inferior a -20 °C. 
 
 
6. RESULTADOS 
Através do processo, foi possível a obtenção do DNA de células humanas, obtido 
através de amostra da mucosa oral. 
O resultado esperado, apesar de não ser possível visualizá-lo, após colocar-se o 
álcool, é o seguinte: 
Figura 2- Precipitação do DNA pela adição de álcool 
 
Fonte: GOUVEIA, Alexandre Andrade; GOMES, Danielle Cristina - 
Extração de DNA de Cebola (Passei Direto) 
 
Assim, nesta etapa, formam-se três fases: alcoólica, intermediária (contendo DNA 
que, com o tempo, sobe para a superfície, como o representado na imagem) e fase 
aquosa/orgânica (mais densa, contendo restos de organelas, estruturas 
sedimentadas, proteínas, lipídios, etc.). 
 
7. DISCUSSÃO 
Durante o processo de extração do DNA, é possível visualizar a formação de três 
fases: a fase alcoólica/aquosa, a fase intermediária (onde o DNA está contido) e a 
fase orgânica (composta pelo material, com restos de organelas, proteínas, lipídios e 
estruturas sedimentadas). O DNA humano em solução é praticamente não visível 
durante o procedimento, diferentemente do ocorrido na técnica de extração de DNA 
vegetal, cujo DNA se apresentou em formato de uma nuvenzinha branca aglomerada. 
A dificuldade de visualização do DNA pode ser considerada uma dificuldade durante 
a realização desta prática. 
Na prática de extração de DNA, o bochecho é utilizado para coleta de células da 
mucosa da boca, que ficam suspensas na solução. O detergente tem a função de 
romper as membranas celulares, pois dissolve gorduras e desestrutura os 
fosfolipídios que formam essas membranas. Com isso, o DNA, que estava protegido 
dentro das células, é liberado na mistura. O sal (NaCl) se dissocia em íons Na⁺ e Cl⁻, 
que se interagem com os grupos fosfato do DNA, neutralizando suas cargas elétricas. 
Isso reduz sua solubilidade em água e ajuda o DNA a precipitar na solução, tornando-
o mais vulnerável a se agrupar. Já o álcool gelado, ao ser adicionado, desidrata ainda 
mais as moléculas de DNA e as separadas da solução, permitindo sua precipitação. 
(NUNES, 2019) 
Ademais, as membranas plasmática e nuclear são compostas principalmente por 
lipídios. A função do detergente é desestruturar as moléculas de lipídio das 
membranas biológicas. Desta maneira, as membranas sofrem ruptura e todo o 
conteúdo celular - inclusive o DNA - fica disperso na solução. Já o aumento da 
temperatura promove uma maior agitação molecular, o que ajuda o detergente a 
desestabilizar as membranas lipídicas. Além disso, a alta temperatura inativa enzimas 
que podem degradar o DNA (DNAses). (EXTRAÇÃO..., p.1-2) 
A pipetagem para obtenção do DNA, para o prosseguimento da técnica e 
centrifugação, é feita a partir do meio para cima (nunca no fundo do tubo), pois é onde 
o DNA se encontra: precipitado e disperso em meio ao álcool. 
Portanto, resumidamente, o protocolo de extração de DNA humano consiste nos 
seguintes processos: 
• Aquisição do material: 
o Coletar células da mucosa oral para obtenção do DNA através de 
raspado bucal ou bochecho com solução de glicose. 
• Lise de membranas lipídicas: 
o Rompimento da membrana celular e dos compartimentos membranosos 
(organelas); 
o Provocada por uma solução detergente (25%); 
o Adição de NaCl (sal) - promove a precipitação; 
o Aquecer a 55 °C por 10 minutos – inativa DNAses e melhora a 
dissolução de membranas; 
o Resfriar o material em gelo por 5 minutos. 
• Precipitação do DNA: 
o DNA é solúvel em água e insolúvel em álcool. Utiliza-se etanol para 
precipitar o DNA e os íons provenientes do sal auxiliam no processo de 
precipitação; 
o Separa-se o DNA junto com o álcool da solução contendo proteínas e 
contaminantes; 
o Centrifugar durante 2 minutos o DNA com o álcool; 
o Retirar todo o álcool e deixar secar para a formaçãodo pellet. 
• Reidratação do DNA: 
o Após a retirada do álcool, o DNA precisa se solubilizar em algum 
solvente- água ultrapura ou uma solução tampão. Este solvente servirá 
para armazenamento do DNA extraído; 
o Armazenar o DNA a –20 °C. 
Nesta prática, não é possível a visualização da estrutura em dupla hélice da molécula 
de DNA. Portanto, ao final do processo, foi possível a obtenção e extração do DNA, 
que foi, posteriormente, congelado inferior a –20 °C. 
 
8. CONCLUSÃO 
A prática foi realizada com sucesso e o DNA humano foi extraído de maneira 
adequada. Esta técnica envolve muitos cuidados e procedimento adequado, devido 
ao fato de o DNA estar presente no núcleo das células. Assim, devem ser cumpridos 
todos os passos, realizando a prática laboratorial seguindo as medidas de 
biossegurança e cuidados para preservação, obtenção e não degradação da amostra 
para uso posterior. 
A extração de DNA é comumente seguida por sua amplificação por meio da técnica 
de PCR, uma das mais utilizadas por cientistas para investigar alterações em nível 
celular, muito abaixo da quantidade geralmente necessária para estudos sobre 
parasitas. A PCR teve um papel crucial no avanço da sistemática e epidemiologia 
parasitária, no estudo da imunologia e das interações entre parasita e hospedeiro, no 
desenvolvimento de vacinas de DNA recombinante e, mais recentemente, na análise 
de genomas completos. 
 
9. REFERÊNCIAS 
 
1. SANTOS, Vanessa Sardinha dos. DNA: resumo, função, estrutura, 
composição, DNA x RNA - Brasil Escola. Disponível em: 
https://brasilescola.uol.com.br/biologia/dna.htm. Acesso em: 12 mar. 2025. 
2. NUNES, Teresa. Experiência da extração de DNA humano - Ponto 
Biologia. 15 nov. 2019. Disponível em: 
https://pontobiologia.com.br/experiencia-extracao-dna-humano/. Acesso em: 
13 mar. 2025. 
3. EXTRAÇÃO de DNA- Orientação para o professor. USP, p. 1-2. Disponível em: 
https://www.ieb.usp.br/wp-content/uploads/sites/512/2019/08/extração-
professor.pdf. Acesso em: 12 mar. 2025. 
 
 
 
https://pontobiologia.com.br/experiencia-extracao-dna-humano/