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BACTERIOLOGÍA
LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA
Procedimientos que se realizan a las muestras clínicas
· Examen en fresco
· Coloración de gram
· Cultivo (Pruebas bioquímicas)
· Antibiograma
Examen directo en fresco. Consiste en la observación del material recién preparado, entre porta y cubreobjeto, sin ningún tipo de coloración ni sustancia clarificante. 
En los diagnósticos bacteriológicos este procedimiento solo permite identificar la forma de las bacterias y su motilidad o no. No obstante tiene mucha utilidad para hongos, protozoarios y helmintos.
Generalmente se utilizan microscopios ópticos con condensadores de campo claro.
El examen directo en fresco se utiliza cuando el espécimen que se estudia es fluido y se distribuye homogéneamente formando una fina capa al colocárselo entre porta y cubreobjeto. Es necesario en materiales poco concentrados, la centrifugación y en materiales muy espesos, la dilución con suero fisiológico estéril ayudará a analizar el preparado.
El examen directo en fresco tiene gran importancia en la observación de la respuesta inflamatoria debida a la presencia de leucocitos en la muestra analizada del paciente.
Coloración de Gram: Es el procedimiento de mayor uso en bacteriología, permite clasificar a los microorganismos, según su morfología (forma) y estructura (pared celular). 
COLORACIÓN DE GRAM
Descubierto por Hans Christian Gram.
Es un tipo de tinción diferencial.
El fundamento de la técnica es en base a las paredes celulares de las bacterias.
Clasifican a las bacterias en dos grandes grupos: 
· Gram positivos (bacterias coloreadas de violeta o purpura)
· Gram negativos (bacterias coloreados de anaranjado, si se usa safranina y de rojo si se emplea fücsina diluida)
 
Coco gram positivos (en racimo de uva
Cultivo
Para poder estudiar a un microorganismo en necesario cultivarlo. 
Cultivar a un microorganismo es proporcionarle las condiciones adecuadas para su crecimiento y multiplicación. 
Para cultivar a los microorganismos es necesario el uso de medios de cultivo
Que es un medio de cultivo?
Un medio de cultivo es una solución que contiene nutrientes necesarios para el crecimiento y desarrollo de los microorganismos.
Medios de cultivo más utilizados
· Agar sangre (enriquecimiento)	
· Agar chocolate (enriquecimiento)
· Agar Mac Conkey (selectivo)
· Agar Telurito (selectivo)
· Agar Thayer-Martin (selectivo)
· Agar Cled (diferencial)
· Agar SS – Salmonella-Shigella (diferencial)
· Agar Muller-Hinton (antibiograma)
· 
Técnicas de siembra de muestras clinicas
1. Método semicuantitativo: Para recuento de colonias.
Muestras que se siembran con esta técnica:
· Orina: Agar sangre y Mac Conkey
· Lavado broncoalveolar: Agar chocolate, sangre y Mac conkey
· Secreción traqueal: Agar chocolate, sangre y Mac conkey
2. Técnica de siembra por agotamiento: para obtener colonias aisladas.
Muestras sembradas con esta técnica:
· Hemocultivo
· Líquido pleural
· Secreciones purulentas
· Hisopado faringeo
· Esputo
· Coprocultivo
· LCR
· Secreciones genitales
3. Siembra por método de maki:
La única muestra que se siembra por este método es la punta de cateter. 
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Consisten en distintos test químicos, que nos permiten identificar y clasificar microorganismos presentes. 
Prueba de la Coagulasa
Prueba de PYR
TSI (triple sugar iron): agar que permite el estudio de la capacidad de producir ácido y gas a partir de moléculas de glucosa, lactosa y sacarosa. 
LIA (lysine iron agar): Permite diferenciar los microorganismos que producen descarboxilación o desaminación de la lisina y gas.
MIO (movilidad indol ornitina): medio semisólido que permite evidenciar la movilidad, la producción de indol y la descarboxilación de la ornitina.
SIM (sulfuro indol motilidad): se utiliza para comprobar la motilidad, la formación de gas y la producción de indol por parte de la bacteria.
Citrato: determina la capacidad de um microorganismo de utilizar citrato, como única fuente de carbono.
Urea: detecta la presencia de la enzima ureasa, la degrada y produce amonio el cual alcaliniza el medio y se ve rosado.
ANTIBIOGRAMA
Es la prueba microbiológica que se realiza para determinar la susceptibilidad de una bacteria a un grupo de antibióticos.
Método de difusión en Disco:
-Es el mas utilizado
-Prueba la inhibición o resistencia de los microorganismos, enfrentándolos con los medicamentos que se encuentran impregnados en pequeños discos.
Lectura e interpretación de los resultados:
· Sensible: El microorganismo presenta un gran área de inhibición causada por el fármaco. (antibiótico eficaz) 
· Intermedio: Se presenta un halo de inhibición mas reducido. (antibiotico eficaz en ciertas condiciones)
· Resistente: presenta muy poco o casi nada de halo (antibiótico ineficaz)
COCOS GRAM POSITIVOS DE INTERÉS MÉDICO
Género Streptococcus
COLORACIÓN DE GRAM
Los estreptococos tienen en su mayoría un diámetro que oscila alrededor de l μm. 
Se asocian en cadenas más o menos largas y, pueden observarse cápsulas en
algunas especies. 
Son uniformemente 
Gram positivos.
Para la clasificación del género Streptococcus se tienen en cuenta en especial las propiedades fisiológicas del microorganismo, entre las que se destaca la producción de hemolisinas.
· Alfa-hemoliticos
· Beta-hemoliticos	
· Gamma-hemoliticos: (sin hemolisis)
CULTIVO
Los estreptococos crecen en medios artificiales con mediana facilidad. La mayoría lo hace en medios de cultivo comunes, siempre se cultivan mejor con el Agar sangre.
En agar sangre puede observarse la hemólisis y la no hemólisis.
La hemólisis alfa, presenta un típico color verde alrededor de la colonia y destrucción parcial de los hematíes.
La hemólisis beta, produce destrucción total de los hematíes y decolora totalmente la zona vecina a la colonia.
La hemolisis gamma, no produce hemolisis por lo que no se observa cambio del medio.
Estreptococo del grupo A
Streptococcus pyogenes
Los estreptococos de este grupo pueden ser agentes de infecciones localizadas, infecciones generalizadas y de secuelas tardías.
Tipos de Infecciones más frecuentes 
Faringitis: Es una infeccion del tracto respiratorio superior, generalmente exudativa, caracterizada por fiebre elevada, dolor espontáneo de la garganta que se exagera con la deglución, adenitis de los ganglios regionales del cuello y de la región submaxilar, observándose la faringe roja y edematosa con exudado gris amarillo.
Los estreptococos del grupo A son responsables del 95% de todas las faringitis bacterianas
Tipos de Infecciones más frecuentes 
· Impétigo. 
· Celulitis
· Erisipela. 
· Escarlatina.
· Fiebre reumática. 
· Glomerulonefritis 
Streptococcus pneumoniae
El neumococo cuyo hábitat principal es la rinofaringe, es el agente bacteriano más frecuente de la neumonía.
Produce infecciones de las vías respiratorias inferiores como laringitis, traqueitis y bronquitis.
La infección bacteriana aguda no epidémica de las meninges en adultos, tiene a Streptococcus pneumoniae como el agente de mayor frecuencia (meningitis neumocóccica).
INFECCIONES DE LAS VÍAS RESPIRATORIAS
	
INFECCIÓN DE LAS VIAS RESPIRATORIAS SUPERIORES
· Toma de muestra: Hisopado faríngeo
 Hisopado nasofaringeo
· Investigación de estreptococos beta-hemoliticos del grupo A.
Proceso en el laboratorio
· Examen en fresco: se realiza examen directo para constatar la presencia de leucocitos que indican reacción inflamatoria.
· Coloración de Gram
· Cultivo: 
- Siembra en agar sangre para búsqueda de estreptococo beta-hemolítico
- Se incuban por 48 hs.
- A las 24 hs de incubación se observa colonias beta-hemolíticas y se procede a realizar prueba de catalasa y realizar una estría de cultivo y colocar un disco de Bacitracina sobre las estrías y volver a incubar por 24 horas más
Resultados obtenidos
· Colonias beta-hemolíticas de estreptococos del grupo A
· Catalasa (-) (Negativa)
· Bacitracina (S) (Sensible)
· Microorganismo aislado: Streptococcus pyogenes
RESULTADO LABORATORIAL
· Examen en fresco: - Leucocitos (Respuestainflamatoria)
 - Células epiteliales planas
· Coloración de gram: Se observan cocos gram positivos
· Cultivo:
· Se aisla Streptococcus pyogenes (Positivo)
· No se aisla Streptococcus pyogenes (Negativo)
FARINGITIS
· FARINGITIS NO ESTREPTOCOCICA
Otras etiologías bacterianas poco frecuentes y situaciones especiales debe indicarse en la solicitud del análisis.
· Faringitis gonocócica
- Ante sospecha por hábitos sexuales (sexo oral) del paciente.
- Investigación de Neisseria gonorrhoeae
· Difteria
- Daño cardiaco y nervioso
- Investigación de Corynebacterium diphteriae
· Epiglotitis
-Muy grave en niños
- Investigación de Haemophilus influenzae (H. influenzae) tipo B
· Gingivoestomatitis ulcerosa necrosante aguda o Ulcera de Vincent
DIAGNOSTICO LABORATORIAL
Pruebas serológicas.
Métodos indirectos. 
La investigación de anticuerpos anti-estreptocócicos, elaborados preferentemente contra las toxinas y las enzimas producidas por estreptococos del grupo A, es un procedimiento útil para el diagnóstico de la fiebre reumática y la glomerulonefritis aguda, que son enfermedades post-estreptocóccicas.
Los anticuerpos que se detectan son: antiestreptolisinas O ASLO o ASTO
INFECCIÓN DE LAS VIAS RESPIRATORIAS SUPERIORES
Faringitis Estreptocócica (Aguda)
· Infección más común 
· Considerar flora. Microorganismos como, estreptococos alfa-hemoliticos (St. viridans y St. pneumoniae) neumococos u otros cocos gram positivos no tiene rol patogénico, por lo que no deben ser considerados clínicamente.
Toma de Muestras
· Muestras cuestionables (puede haber contaminantes)
· Secreción traqueal
· Esputo
· Muestras incuestionables (de preferencia)
· Lavado broncoalveolar (BAL)
· Broncoscopía con cepillo envainado
INFECCIÓN DE LAS VIAS RESPIRATORIAS INFERIORES
Muestras:
· Lavado broncoalveolar (BAL)
· Broncoscopía con cepillo envainado
Patógenos potenciales
· Streptococcus pneumoniae
· Haemophilus influenzae
· Moraxella catarrhalis
· Staphylococcus aureus
Proceso en el laboratorio
· Examen en fresco: se realiza examen directo para constatar la presencia de leucocitos que indican reacción inflamatoria.
· Coloración de Gram
· Cultivo: 
- Siembra en agar sangre para búsqueda de estreptococo alfa-hemolítico
- Se incuban por 48 hs.
- A las 24 hs de incubación se observa colonias alfa-hemolíticas y se procede a realizar prueba de catalasa y realizar una estría de cultivo y colocar un disco de Optoquina sobre las estrías y volver a incubar por 24 horas más. 
Resultados obtenidos
· Colonias alfa-hemolíticas
· Catalasa (-) (Negativa)
· Optoquina (S) (Sensible)
· Microorganismo mayormente aislado: Streptococcus pneumoniae
INFORME LABORATORIAL
· Examen en fresco: 
- Leucocitos: >25 /campo (Respuesta inflamatoria)
- Células epiteliales escamosas: (contaminación orofaringea)
· Coloración de Gram: Se observan Cocos gram positivos
· Cultivo: 
- Se aisla Streptococcus pneumoniae
La infeção de las vías inferiores puede involucrar
-Tráquea: traquítis
- Bronquios: bronquitis y bronquiolitis
- Tejido pulmonar: Neumonía
· Sintomas
· Tos y varios grados de producción de esputo
· Dolor de pecho
· Disnea o respiraciones cortas
· Puede haber fiebre o no
Neumonía 
· Infección más común de las vías respiratorias inferiores
· Requiere de evidencias clínicas, radiográficas y de laboratorio de infección pulmonar.
· Dos categorías principales de Neumonías:
 - Neumonía Adquirida en la Comunidad
 - Neumonía Intrahospitalaria
Neumonía Adquirida en la Comunidad
· La etiología de las neumonías agudas depende mucho de la edad.
· Los niños presentan neumonías bacterianas con menor frecuencia, más del 80% son causadas por virus.
· En los adultos sin tener en cuenta la edad o la presencia de enfermedades coexistentes, la mayoría de los casos de neumonía adquirida en la comunidad se debe a infecciones bacterianas.
· El microorganismo más frecuente y que causa el 80% de todas las neumonías bacterianas adquiridas en la comunidad es el Streptococcus pneumoniae
· 
Neumonía Intrahospitalaria
· La neumonía es la principal causa de muerte entre los pacientes con infecciones nosocomiales.
· La mortalidad alcanza el 50% entre los que se encuentran en UTI.
· Los microorganismos asociados con estas infecciones pueden ser muy específicos del hospital, pero en general los más frecuentes son especies de:
· Klebsiella pneumoniae productora de carbapenemasa (KPC)
· Acinetobacter 	Pseudomonas aeruginosa
· Legionella	Staphylococcus aureus
Género Staphylococcus
El género Staphylococcus es el más importante de la familia Micrococcaceae por ser patógeno tanto para el humano como para los animales.
Los estafilococos habitan naturalmente en la piel y en las mucosas de los mamíferos, teniendo una agresividad latente, que se manifiesta rápidamente cuando el microorganismo invaden el organismo.
Es el microorganismo que ha persistido hasta ahora como un agente patógeno de mayor importancia médica y estando como microorganismo causal de las infecciones nosocomiales.
Se describen 3 especies principales:
Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus saprophyticus.
Staphylococcus aureus, también llamado estafilococo patógeno o dorado, es el más patógeno de su género
Staphylococcus aureus
· COLORACIÓN DE GRAM
Son cocos gram positivos agrupadas en racimos de uva irregulares, inmóviles.
· CULTIVO
El cultivo de todos los miembros del género Staphylococcus es sumamente fácil. Para el efecto se usan medios de cultivo comunes en los que crecen exuberantemente en 24 horas produciendo enturbiamiento uniforme en los medios.
El Sthaphylococcus aureus produce habitualmente pigmento amarillo dorado
INFECCIONES PURULENTAS
Son muchos los microorganismos que producen infecciones purulentas.
El pus, motivo de estudio bacteriológico puede hallarse en un absceso abierto, como una herida supurante, una fistula o en un absceso cerrado.
El pus constituido por una mezcla de espesa de piocitos, leucocitos, fibrina, partículas grasa y principalmente microorganismos.
HERIDAS Y ABSCESOS
· Acumulación de pus
· Enrojecimiento, dolor e hinchazón
· Asociadas con infecciones oculares (conjuntivitis purulenta), cutáneas (foliculitis, forunculos, celulitis), respiratoria (pericarditis), articulaciones (osteomelitis) entre otros. 
· Muestra: Secreción Purulenta
· Recolección de muestras:
· Absceso abierto, heridas, fistula: hisopado
· Absceso cerrado: aspirado
· Medio de transporte: Stuart
PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA
· Examen en fresco
· Coloración de gram: grand positivos
· Cultivo: Siembra en medio de aislamiento: 
Rutinariamente en Agar sangre, Agar Chocolate, Agar Mac Conkey 
Pruebas bioquímicas: Identificación bacteriana: Catalasa Coagulasa (prueba de confirmación de especie del género Staphylococcus)
- Crecimiento de colonias amarillas, doradas.
Pruebas bioquímicas:
Catalasa: +
Coagulasa: +
RESULTADOS en el Laboratorio
· Examen en fresco: Presencia de leucocitos, hematíes, bacterias.
· Coloración de gram: Cocos gram Positivos
· Cultivo: Se aísla Staphylococcus aureus
BACILOS GRAM NEGATIVOS
Familia Enterobacteriaceae
La familia Enterobacteriaceae está constituída por Bacilos Gram negativos biologicamente relacionados entre sí, habitantes del intestino del humano.
Entre sus miembros se encuentran agentes patógenos obligados y oportunistas.
En medios de cultivo comunes, las características coloniales son muy parecidas en todos los miembros de esta familia, por lo que debe recurrirse a los medios selectivos para detectar diferencias.
ENTEROBACTERIAS
· Género Escherichia
· Género Proteus
· Género Salmonella
· Género Shigella
Género Echerichia coli
· El género Escherichia comprende la especie más frecuente en el intestino humano, la E. coli.
· Son patógenos del tipo oportunistas.
COLORACIÓN DE GRAM. Son Bacilos Gram negativos.
CULTIVO. Crecen bien en medios comunes, por lo que es recomendable su aislamiento en medio selectivo como el Agar MacConkey o diferencial como el Agar CLED, las colonias en mediossólidos son habitualmente lisas. 
Pruebas bioquímicas: Observar la capacidad de los bacilos gram negativos de fermentar carbohidratos, de producir H2S y producir gas, su movilidad, determinación de enzimas con capacidad de desaminar , descarboxilar o hidrolizar, entre otros.
Género Proteus
El género Proteus conserva solamente dos de las especies primitivas que son Proteus mirabilis y Proteus vulgaris.
COLORACIÓN DE GRAM. Son Bacilos Gram negativos.
CULTIVO. De crecimiento fácil en medios comunes, por lo que es recomendable su aislamiento en medio diferencial. Desarrollan colonias que se extienden muy rápidamente a distancia, desarrollándose en sucesivas ondas de crecimiento.
Pruebas bioquímicas: La ureasa es producida por todos los Proteus. 
INFECCIONES DEL TRACTO URINARIO
· ESTUDIO: UROCULTIVO
· TOMA DE MUESTRA: ORINA
· FORMAS DE RECOLECCIÓN
· INDICACIONES PREVIAS
SIGNOS SINTOMAS
· INFECCIONES DE LAS VIAS URINARIAS ALTAS
- Dolor lumbar		- Fiebre
- Nauseas 		- Vómitos
- Posibilidad de bacteriemia
· INFECCIONES DE LAS VIAS URINARIAS BAJAS
- Disuria (ardor quando ao urinar)	- Orina turbia y con mal olor
- Hematuria recurrente	- Casos asintomáticos.
INFECCIONES DEL TRACTO URINARIO
FLORA COMENSAL (contaminantes)
· Estafilococos coagulasa negativas
· Lactobacillus sp
· Estreptococos alfa-hemoliticos
PATOGENOS POTENCIALES
· Escherichia coli
· Proteus mirabilis
· Serratia
· Klebsiella sp
· Pseudomonas aeruginosa
· Neisseria gonorrhoeae
ETIOLOGÍA
· Los gérmenes aislados con más frecuencia son Bacilos Gram Negativos.
· 80 – 95% E. coli en infecciones en la comunidad y 50 – 80% de las hospitalarias.
· En las hospitalarias: Pseudomonas, Serratia, Acinetobacter, Klebsiella 
Procesamiento en el laboratorio:
· Examen en fresco: Sedimento urinario
· Coloración de Gram: Se observan Bacilos gram negativos
· Cultivo: 
· Siembra para aislamiento en agar Agar Mac Conkey medio selectivo para BGN, o de preferencia en un medio diferencial exclusivo para crecimiento de patógenos urinarios, el Agar CLED (Cistina Lactosa Electrolitos Deficiente) en donde se determinara las bacterias fermentadoras de la lactosa.
· Siembra para Recuento de colonias en Agar sangre. Incubar por 48hs.
· Pruebas bioquímicas. A las 24 horas realizar las pruebas de TSI, INDOL, MIO, Urea, Lisina, Citrato, Ornitina. 
· Antibiograma
Resultados en el laboratorio
· EXAMEN EN FRESCO (Sedimento): Presencia de leucocitos (respuesta inflamatoria), hematíes, células epiteliales, bacterias.
· COLORACIÓN DE GRAM: Bacilos gram Negativos
· CULTIVO
En Agar MacConkey y Agar CLED para observar el aislamiento y la fermentación de lactosa de la bacteria.
En Agar sangre calcular el Recuento de colonias n x f = UFC/ml
Los resultados observados en el recuento de colonias pueden clasificarse de la siguiente forma:
- Menor a 104 (10.000) UFC/ml: probable contaminación y ausencia de infección
- Mayor a 105 (100.000) UFC/ml: sugestivo a infección urinaria
Las pruebas bioquímicas y el antibiograma se realizarán luego de considerar el recuento de colonias.:
· Pruebas bioquímicas:
TSI: Acido/Acido Gas (+)			
H2S (-) 	
Indol: (+)				
Movilidad (SIM-MIO): (+)		
Ornitina: +/-									
Citrato: (-)
Urea: (-)
LDA (Lisina desaminasa): (-) 				
· Cultivo: Se aisla Escherichia coli.
· Antibiograma( detectar el antibiótico mas eficaz)
Agar MacConkey
 
La Escherichia coli bacterias fermentadoras de lactosa  produce colonias rosadas y el Proteus sp bacterias no fermemtadoras de lactosa colonias transparentes.
Agar CLED
La Escherichia coli fermentadores de lactosa producen colonias amarillas; Proteus sp las NO fermentadoras de lactosa dan colonias azules.
Género Salmonella
La clasificación del género Salmonella ha sido controversial, por lo que ha mudado constantemente.
Clásicamente se distinguían tres especies patógenas primarias: S. typhi, S. choleraesuis y S. enteritidis.
COLORACIÓN DE GRAM. Son Bacilos Gram negativos móviles.
CULTIVO. Crecen en medios comunes, aunque preferiblemente se realiza su aislamiento en medio selectivo. 
Género Shigella
Los bacilos disentéricos son habitantes patógenos del intestino del humano.
Los microorganismos del género Shigella constituyen uno de los principales agentes de procesos diarreicos en todo el mundo.
La clasificación del género Shigella se establecen la existencia de 4 especies: Shigella dysenteriae, S. flexneri, S. boydü y S. sonnei 
COLORACIÓN DE GRAM. Son Bacilos Gram negativos inmóviles.
CULTIVO. Crecen en medios comunes, aunque preferiblemente se realiza su aislamiento en medio selectivo
Género Campylobacter
Dentro del género Campylobacter se han descrito varias especies y subespecies. La especie aislada con mayor frecuencia en humanos es Campylobacter jejuni.
COLORACIÓN DE GRAM. Son Bacilos Gram negativos de forma curva (en forma de S)
CULTIVO. Se utiliza como medio de cultivo el Campy-Bap que emplea 5% de glóbulos rojos ovinos, más diversos antibióticos.
El medio líquido Campy-tio es un caldo de tioglicolato con agar 0,15 g/dl, más los antimicrobianos citados. Su crecimiento mejora con el agregado de C02 al 10% y la temperatura de incubación favorable es de 42ºC.
Pruebas bioquímicas: debe recurrirse a las siguientes pruebas: ureasa, oxidasa e hidrólisis del hipurato.
Helicobacter pylori
La especie antiguamente designada como Campylobacter pylori, ha sido reclasificada con la nueva denominación de Helicobacter pylori, descrito como habitante de la mucosa epitelial del antrogástrico en pacientes con gastritis crónica asociada a úlceras estomacales.
COLORACIÓN DE GRAM. H. pylori es un bacilo Gram negativo muy parecidos en su forma y tamaño con las especies del género Campylobacter.
CULTIVO. Muy poco utilizado, por realizarse mas a menudo el diagnóstico mediante Endoscopias, que muestran los microorganismos en la superficie de las células y su invasión en los tejidos y Pruebas serológicas determinación de Ag y/o Anticuerpos.
De realizarse el Cultivo para su confirmación es fundamental detectar la producción de ureasa para confirmar el diagnóstico.
INFECCIONES DEL TRACTO GASTROINTESTINAL
Las afecciones gastrointestinales de etiología microbiana pueden estar producidas por una gran variedad de protistas ya sea directamente por si mismos, o indirectamente por la secreción de diversas toxinas que alterna la motilidad y permeabilidad.
· Toxiinfección alimenticia: producción de toxinas por el microorganismo después de la ingestión de alimentos
· Infección alimentaria: producción de toxinas por el microorganismo antes de la ingestión de alimentos.
· Infección intestinal: penetra en el intestino en una determinada proporción, establece cambio etiológicos importantes, desplazando a la flora autóctona ahí existente.
· Gastroenteritis: Este cuadro puede ser a predominio alto (gastritis), medio (enteritis) o bajo (colitis).
Entre los principales patógenos intestinales podemos considerar:
· Virus: Rotavirus, Norovirus, Enterovirus
· Protozoos: Entamoeba coli, Giardia lamblia
· Bacterias: Salmonella sp, Shigella sp, Campilobacter
Las gastroenteritis y las toxiinfecciones alimentarias se diagnostican mediante el
· Estudio: COPROCULTIVO
· Toma de muestra: 
· material fecal
· hisopado rectal
· Medio de transporte: Cary Blair
· Rutinariamente se investiga presencia de 
· Salmonella, Shigella y Campylobacter
COPROCULTIVO
Para realizar la siembra de muestras fecales se recoge aquellas partes del contenido intestinal que llamen más la atención por su aspecto sanguinolento o mucoso, pues allí donde abundan los microorganismos patógenos.
Para cultivo de géneros Salmonella y Shigella se efectúa en Agar MacConkey (medio de cultivo selectivo) y preferentemente en Agar SS, Salmonella-Shigella (medio de cultivo diferencial) y medio de enriquecimiento (caldo selenito). Para busqueda del género Campilobacter se utiliza el medio de cultivo Campy BAP (selectivo). 
Las cepas aisladas se identificarán por pruebas bioquímicas como TSI, Oxidasa, Citrato, SIM-MIO y se confirmará especie serológicamente. 
Procesamiento y Resultados en el Laboratorio
Examen en fresco:Presencia de leucocitos, hematíes, células epiteliales, esporos micóticos, mucus, parásitos, bacterias.
Coloración de gram: Bacilos gram negativos 
Cultivo: Siembra en Agar MacConckey y/o Agar SS.
En el Agar SS se observan colonias oscuras (negras).
Pruebas Bioquímicas: 
- TSI: Alc/Ac Gas(+)
- Citrato: +
- Movilidad (SIM-MIO): +
- LDC (Lisina descarboxilasa): +
- Ornitina: +
Microorganismo aislado: Salmonella sp. 
Procesamiento y Resultados en el Laboratorio
Examen en fresco: Presencia de leucocitos, hematíes, células epiteliales, esporos micóticos, mucus, parásitos, bacterias.
Coloración de gram: Bacilos gram negativos 
Cultivo: Siembra en Agar MacConckey y/o Agar SS.
En el Agar SS se observan colonias transparentes.
Pruebas Bioquímicas: 0
- TSI: Alc/Ac Gas (-)
- Citrato: -
- Movilidad (SIM-MIO): -
- LDC (Lisina descarboxilasa): -
- Ornitina: +
Microorganismo aislado: Shigella sp. 
INFORME LABORATORIAL
Examen: COPROCULTIVO
Muestra: Materia fecal
· Examen en fresco: Presencia de leucocitos, hematíes, células epiteliales, esporos micóticos, moco, parásitos, bacterias.
· Coloración de gram: Bacilos gram negativos 
· Cultivo: 		
Se aísla Salmonella sp.
Se aísla Shigella sp
No se aísla Salmonella sp ni Shigella sp.
Procesamiento y Resultados en el Laboratorio
Examen en fresco: Presencia de leucocitos, hematíes, células epiteliales, esporos micóticos, mucus, parásitos, bacterias.
Coloración de gram: Bacilos gram negativos 
Cultivo: medio de Campy BAP 
Pruebas Bioquímicas:	
- Urea (+)
- Oxidasa (+)
La especie más frecuentemente aislada es el Campylobacter jejuni que es hipurato positiva, por lo que la realización de esta prueba permite diferenciar esta especie.
- Hidrolisis del hipurato (+)
Microorganismo aislado: Campylobacter jejuni
Diagnostico laboratorial para Helicobacter pylori
Teste rápido:
SD PRUBE RAPIDA PARA EL H. PYLORI
SD H.PYLORI
Género Streptococcus
Estreptococo del grupo B Streptococcus agalactiae
Los estreptococos del grupo B constituyen una causa importante de infección en los periodos neonatal y perinatal; siendo responsable en muchos casos de abortos, además, han sido señalados en diversos procesos infecciosos en niños recién nacidos.
Las mujeres son colonizadas por el microorganismo en la vagina y el recto, se observa colonización vaginal en el 10-35% de las embarazadas. 
Procesamiento y Resultados en el laboratorio:
· Cultivo: 
· Colonias beta-hemolíticas
· Catalasa (-) (Negativa)
· Prueba de CAMP: Positivo
· Microorganismo aislado: Streptococcus agalactiae
Género Neisseria
Cocos Gram negativos, en pares, que adoptan la forma de granos de café. Son diplococos inmóviles que se encuentran adosados por sus lados aplanados.
· Neisseria patogenas: 
N. gonorrhoeae y N. meningitidis
Neisseria gonorrhoeae
· COLORACIÓN DE GRAM
En los materiales purulentos agudos se presentan como diplococos Gram negativos intracelulares, los que por su gran abundancia llenan el citoplasma de neutrófilos, existiendo también un buen número de microorganismos libres.
· CULTIVO:
· El Genero Neisseria son de cultivo algo difícil, aerobios. Las especies patógenas necesitan medios especiales.
· Necesitan para su crecimiento medios de cultivos que contengan proteínas animales y presencia de CO2. 
· El medio de cultivo selectivo utilizado es el Thayer-Martin
En los humanos es el agente de la enfermedad conocida con el nombre de gonorrea o blenorragia.
Los cuadros determinados por N. gonorrhoeae son los siguientes:
· Infección aguda de las vías urinarias. En el hombre se manifiesta como una uretritis aguda, que aparece entre los 5 y 8 días después del contacto sexual infectante.
· Conjuntivitis del recién nacido. Se realiza por contagio en el canal materno durante el nacimiento. Puede ocasionar ceguera.
· Faringitis. Se produce por el contagio orogenital.
· Rectitis. Es producido por el contacto genito-rectal.
Gonorrea
Es una enfermedad de transmisión sexual.
Es causada por la bacteria gonococo Neisseria gonorrhoeae y adquirida por vía oral, anal o vaginal.
La bacteria responsable se localiza en el cuello del útero o en la uretra en las mujeres, y uretra en los hombres
Procesamiento y Resultados en el laboratorio:
· Examen en fresco: Presencia de leucocitos, hematies, células epiteliales, esporos micóticos, Trichomonas vaginalis.
· Coloración de Gram: Se observan diplococos gram negativos 
· Cultivo: 
· Siembra en agar Thayer Martin (selectivo).
· Las colonias se forman mejor a las 48 horas de la siembra, siendo lisas mucoides, incoloras, o algunos casos blanco-grisáceas.
· Pruebas Bioquímicas: Se realiza la Prueba de Oxidasa, las colonias desarrollan un color púrpura, en contacto con una solución de tetrametil para-fenilendiamina. Oxidasa (+) (Positivo).
· N. gonorrhoeae fermenta solamente glucosa. (Las pruebas de fermentación de azúcares establecen las diferencias entre las dos especies patógenas).
INFECCIONES DEL TRACTO GENITAL
Infecciones y agentes etiológicos del tracto genital
· Endógenas (microbiota):
· Candidiasis 
· Vaginosis bacteriana debida al complejo GAMM 
· Vaginitis bacteriana por Streptococcus agalactiae (St. del grupo B) 
· Exógenas Enfermedades de transmisión sexual (ETS):
· Clamidia
· Gonorrea
· Tricomoniasis
Toma de muestra: SECRECIÓN VAGINAL
 SECRECIÓN URETRAL
· Signos y sintomas compatibles:
Mujeres: 
· Exudado vaginal homogéneo grisáceo (flujo vaginal) abundantes,
· Sensación de quemadura
· Irritación
· Mal olor
· Prurito
· Disuria
· Dolor en región pelvica
Hombres: Síntomas inespecíficos, discreto prurito, molestias en la micción
Vaginosis Bacteriana
Es una patología endógena fruto del desequilibrio que se produce en la flora vaginal.
Es un síndrome clínico de origen polimicrobiana que resulta de la sustitución de la flora vaginal normal Lactobacillus productora de HO2 por altas concentración de Gardnerella Vaginalis, bacterias anaerobias, Mobiluncus sp y Micoplasma hominis. Conocido por complejo GAMM.
Gardnerella vaginalis
· Procesamiento en el laboratorio:
· Examen en fresco: Presencia de leucocitos, hematíes, células epiteliales, esporos micóticos, Trichomonas vaginalis. Se caracteriza por la presencia de células clave (clue cells).
· Prueba de aminas: se agrega KOH a la muestra y desprende olor a pescado.
· Coloración de GRAM: Presencia de células clave (células epiteliales desprendidas y cubiertas por bacilos gram positivos delgados y cocobacilos gram variable).
· CULTIVO.	
Proliferan en agar sangre a 37ºC con o sin CO2.
Son anaerobios facultativos y exigen medios especiales para su cultivo. 
Vaginitis bacteriana
· Producida por Streptococcus del grupo B.
· No es una enfermedad de transmisión sexual.
· Factor de riesgo en embarazadas. Puede provocar aborto.
· Principal causa de morbilidad y mortalidad en neonatos.
· Se realiza la busqueda en todos los casos de parto prematuro, ruptura de membrana.
· Procesamiento y Resultados en el laboratorio:
· Toma de muestra: Secreción vaginal
El protocolo de cultivos recomendado por el CDC y FDA comprende la recolección de muestras de hisopados vaginales en embarazadas durante las semanas 35 y 37 de gestación. 
Medio de transporte Stuart (sin refrigerar).
· Examen en fresco: Presencia de leucocitos, hematies, células epiteliales, esporos micóticos, Trichomonas vaginalis.
· Coloración de Gram: Se observan Cocos gram positivos 
· Cultivo: 
 Siembra en agar sangre para búsqueda de estreptococo beta-hemolíticos. Se incuban por 48 hs.
A las 24 hs de incubación se observa colonias beta-hemolíticas y se procede a realizar prueba de catalasa y realizar una estría de cultivo de Reacción de CAMP.
La Prueba de CAMP (Prueba de Christian Atkins Munch Petersen) consiste en el agrandamiento de la zona de hemólisis de una beta-lisina de Staphylococcus aureus, debido a la acción del factor CAMP secretado por el estreptococo del grupo B.
Clamidia
Es causada por la bacteria llamada Chlamydia trachomatis.
Es transmitida por relaciones sexuales, también de madre a hijo durante el parto vaginal.
Causalesiones irreversibles en los órganos genitales.
Presenta sintomas 1 a 3 semanas después del contagio.
Otro mecanismo de contagio, como el conjuntival. Es una enfermedad que tiene distribución mundial.
La exposición permanente de la conjuntiva lleva a la contaminación y supuración crónica de la misma por microorganismos comunes, causando la enfermedad Tracoma.
La Conjuntivitis de inclusión el cuadro puede verse en niños recién nacidos, caracterizándose por conjuntivitis papilar.
Diagnóstico laboratorial:
Para el diagnóstico los métodos directos tales como los frotis coloreados con Giemsa y la inoculación en ratones son poco utilizados.
Más utilizados son los procedimientos indirectos entre los que se destacan la inmunofluorescencia directa (IFD) e inmunofluorescencia indirecta (IFI) y el ELISA.
Cultivo muy poco utilizado. No crecen en medios sin células vivas.
MICOBACTERIAS
Género Mycobacterium
Teniendo en cuenta sus necesidades nutritivas y la velocidad de crecimiento, las especies del género Mycobacterium pueden clasificarse en Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, Mycobacterium bovis.
COLORACIÓN. Se utiliza la coloración de Ziehl-Neelsen.
Son Bacilos Acido-Alcohol-Resistentes (BAAR).
CULTIVO. Pueden crecer en medios de cultivos corrientes de bacteriología, todos crecen mejor en medios especiales y algunos solamente lo hacen bajo estrictas exigencias de cultivo.
Como medios especiales se usan de preferencia el de Lowenstein-ensen y el de Petragnani.
Pruebas laboratoriales
· PPD – Prueba de la tuberculina
· Baciloscopía (COLORACIÓN DE ZIEHL-NEELSEN) 
· Cultivos, para demostrar la presencia de los microorganismos del género Mycobacterium que son BAAR.
· GeneXpert (Prueba de amplificación de ADN)
COLORACIÓN DE ZIEHL-NEELSEN
· Fue descrita por dos médicos alemanes: Franz Ziehl (bacteriólogo) y Friedrich Neelsen (patólogo)
· Es un tipo de tinción diferencial.
· El fundamento de la técnica se basa en que las bacterias con morfología Bacilos resisten la decoloración fuerte con alcohol ácido, por ese motivo estas bacterias se conocen como BacilosAcidoAlcoholResistente (BAAR)
· Esta coloración se utiliza para la identificación de microorganismos patógenos principalmente de Micobacterium tuberculosis, bacteria responsable de la mayor cantidad de casos de tuberculosis en el mundo.
· La prueba laboratorial solicitada para detectar es la Baciloscopia.
· La muestra colectada a analizar es el Esputo (3 muestras seriadas)
Coloración de Ziehl-Neelsen. Esta coloración se usa para reconocer las bacterias BAAR del género Mycobacterium
 
BAAR - Negativo BAAR – Positivo
Resultado Laboratorial
Estudio de Baciloscopia
Muestra: Esputo
Coloración de Ziehl Neelsen
Resultado Examen microscópico e Interpretación	
(-) (Negativo) Ningún BAAR en 100 campos observados
BAAR (+) 	0 – 1 en 100 campos
BAAR (++) 	1 – 10 en 50 campos
BAAR (+++) mayor a 10 en 20 campos
Procedimientos a seguir frente al hallazgo de menos de 5 BAAR en 100 campos observados, o confirmar el resultado obtenido por la Baciloscopia.
Se recomienda confirmar por Cultivo y/o Detección de acido nucleico (GeneXpert).
Cultivo y GeneXpert
Incrementa la posibilidad de detectar el bacilo de la tuberculosis en las muestras de casos que están afectados por un bajo número de bacilos, como los niños (tuberculosis primaria) o pacientes con tuberculosis extrapulmonar.
Permite diferenciar el bacilo de la tuberculosis de otras micobacterias en muestras donde se pueden encontrar ambos, como en orina, contenido gástrico, o las de pacientes que viven con VIH .
Permite conocer la sensibilidad de bacilos a drogas antituberculosas e identificar los casos que pueden no responder al esquema de tratamiento de primer línea. Esto puede ocurrir entre pacientes tratados en forma irregular o con dosis insuficientes, y entre sus contactos.
Cultivo: Crecimiento en medio de cultivo de Lowenstein-ensen
GeneXpert
Es una prueba de amplificación de ácidos nucleicos basada en cartuchos para el diagnóstico simultáneo de tuberculosis rápida y la prueba rápida de sensibilidad a antibióticos (rifampicina) 
ESPIROQUETAS
Treponema pallidum
Morfología. Es una espiroqueta. Para el estudio morfológico de Treponema pallidum subespecie pallidum, al igual que para todos los espiroquetídeos, se utilizan fundamentalmente dos procedimientos, el campo oscuro para los exámenes en fresco de la motilidad y la impregnación con plata mediante el procedimiento de Fontana para los frotis fijados.
Cultivo. Hasta la fecha no se lo ha aislado y mantenido en cultivos exentos de células. Se trata de un microorganismo con muy lenta de multiplicación, estimándose que su división se realiza cada 30 horas.
Contagio. En el 95% de los casos, el contagio es por la vía sexual. Menos frecuente es el contagio a través de otras mucosas como la oral o anal. También puede contagiarse la sífilis de la madre al hijo, a través de la placenta y por vía transfusional.
No se propaga por contacto de objetos al ser muy lábil e incapaz de sobrevivir a la desecación.
Período de incubación. Alrededor de 20 días.
Causan infecciones veneras como la SIFÍLIS.
PATOGENIA
· El microorganismo entra al organismo a través de pequeñas abrasiones en la piel o las mucosas
· El curso de la infección se divide en 3 estadios.
· Sífilis primaria
· Sífilis secundaria
· Sífilis terciaria
· Sífilis congenita
Sin embargo no todos los pacientes pasan por los 3 estadios
Sífilis congénita
· La mujer puede transmitir T. pallidum al feto después de los tres primeros meses de embarazo.
· Las manifestaciones de la enfermedad oscilan desde la infección grave que produce muerte intrauterina, hasta anomalías congénitas que pueden ser obvias en el nacimiento, o la infección silente que no se pone de manifiesto hasta aproximadamente los 2 años de edad (deformidades faciales o dentales).
Diagnóstico laboratorial
· Puesto que no se puede cultivar T. Pallidum en el laboratorio, el diagnóstico se basa en microscopía y serología.
· Microscopía:
· Se debe examinar mediante microscopia de campo oscuro inmediatamente después de la recogida.
· T. pallidum es muy fino y no puede verse en la coloración de GRAM.
SEROLOGÍA
· Constituyen la clave del diagnóstico de la sífilis y se dividen en inespecíficas y especificas, según el tipo de antígenos usados para detectar anticuerpos en el suero del paciente.
· Inespecíficas: son de tamizaje
· Específicas: confirmatorio
Pruebas inespecíficas (No treponémicas)
· Se usa el termino inespecífico debido a que los antígenos no tienen origen treponémico. Permite detectar anticuerpos IgG IgM anti lipidicos, presentes em la superficie de T. pallidum.
· La prueba No treponémica de uso común es:
· VDRL (Veneral disease research laboratory test)
INFORME LABORATORIAL
Muestra: Suero
Método: Floculación
VDRL: No Reactiva
INFORME LABORATORIAL
Muestra: Suero
Método: Floculación
VDRL: Reactiva 1:16
Pruebas Especificas (Treponémicas)
· Estas pruebas utilizan antígenos treponémicos extraídos de Treponema pallidum.
· El más utilizado:
· FTA ABS (Absorción de anticuerpos treponémicos fluorescentes): en la que el suero del paciente se absorbe primero con treponemas no patógenos para eliminar anticuerpos de reacción cruzada y después se hace reaccionar con antígenos de Treponema pallidum, para la detección de anticuerpos IgG e IgM.
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