Atividades - Biologia Molecular UNIDADE 3

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ATIVIDADES – BIOLOGIA MOLECULAR
UNIDADE 3
TÓPICO 1 
1. Porque o teste NIPT (teste pré-natal não invasivo) é considerado não invasivo? Qual princípio justifica esse tipo de amostragem?
R.: Mesmo que o teste seja realizado para verificar alterações no feto, a amostragem é realizada com coleta de sangue materno, portanto, de maneira não invasiva. Esse tipo de amostragem é eficiente para a avaliação proposta, pois, no sangue materno, além do próprio DNA materno, também pode ser encontrado DNA fetal livre e, dessa forma, com a extração e isolamento do material genético fetal, é possível proceder com as análises de alterações cromossômicas fetais.
2. Com os crescentes avanços em biotecnologias, o painel de doenças possíveis de serem testadas na triagem neonatal, ou teste do pezinho, aumentou expressivamente. No entanto, algumas discussões bioéticas apontam motivos que contrapõem a necessidade de expansão desses testes, entre elas:
a) (X) Ainda é desconhecida a severidade de muitas das doenças testadas.
b) ( ) O conhecimento precoce de diversas doenças representa avanços nos seus tratamentos.
c) (X) O diagnóstico precoce de muitas doenças não representa melhora no tratamento.
d) (X) Ausência de tratamento disponível para várias doenças testadas.
3. Complete as lacunas da seguinte frase: 
O teste de diagnóstico rápido para a surdez hereditária é realizado com a técnica de _____ para a avaliação de uma mutação no gene _______.
a) ( ) sequenciamento, GJB2.
b) ( ) PCR, conexina 30.
c) (X) PCR, GJB2.
d) ( ) Espectrometria de massas, conexina 30.
4. Explique, brevemente, o que é avaliado no sequenciamento de produtos da concepção e por que esse teste deve ser indicado especialmente em casos de abortos repetidos.
R.: Nessa avaliação de produtos da concepção, é realizado o sequenciamento do DNA em busca de alterações cromossômicas. Esse exame é indicado em casos de abortos, em especial em casos de abortos de repetição, pois se sabe que alterações cromossômicas no embrião são uma das principais causas relacionadas à ocorrência de abortos.
TÓPICO 2 
1. Uma das técnicas de biologia molecular aplicável ao teste diagnóstico de mutações relacionadas a diversos tipos de canceres é a amplificação multiplex de sondas dependentes de ligação, ou MLPA. Explique, brevemente, como essa técnica é capaz de detectar deleções ou duplicações de regiões gênicas.
R.: Na MLPA, em cada região do gene que será avaliada, tem que existir um par de iniciadores, os quais, quando ligados à sua respectiva região do gene, formam uma sonda capaz de emitir fluorescência. Então, essa fluorescência é detectada na forma de picos e comparada aos picos de fluorescência apresentados pela amplificação de uma amostra controle. Dessa forma, é possível observar a ausência de determinados picos ou a sua duplicação na amostra em teste e, assim, determinar se há mutações do tipo deleção ou multiplicação das regiões testadas.
2. Sabe-se que grande parte dos casos de câncer colorretal apresentam um componente hereditário. Dessa forma, a investigação de mutações em genes como o MLH1, MSH2 e MSH6 pode ser indicada para pacientes com o histórico familiar desse tipo de câncer. Nesse sentido, qual técnica de biologia molecular é comumente aplicada para a avaliação de alterações nesses genes?
a) ( ) PCR.
b) ( ) qPCR.
c) ( ) MLPA.
d) (X) Sequenciamento.
3. A biópsia líquida é uma ferramenta que pode ser aplicada no monitoramento da evolução do tratamento de pacientes oncológicos. Quais os benefícios que essa técnica apresenta em relação à biópsia convencional e qual o princípio amostral que possibilita a aplicação dessa técnica?
R.: Em se tratando da biópsia convencional, a biópsia líquida apresenta menor risco ao paciente, já que a amostra coletada é uma amostra de sangue coletada por meio de técnica de coleta minimamente invasiva, o que também implica em dor reduzida a qual o paciente é submetido durante a amostragem. A aplicação dessa técnica é possível devido à presença de DNA tumoral livre circulante, o qual é obtido da amostra de sangue do paciente e, então, submetido às avaliações moleculares para a verificação de alterações gênicas que possam ocorrer no DNA tumoral, as quais podem, inclusive, estar associadas à resistência tumoral.
4. Cite exemplos de alterações gênicas que podem ser detectadas no DNA tumoral por meio da biópsia líquida e qual a metodologia aplicada para a análise dessas alterações.
R.: Por meio da aplicação da técnica de sequenciamento NGS, no exame de biópsia liquida, podem ser detectadas alterações, como inserções, deleções e polimorfismos presentes no DNA tumoral.
TÓPICO 3
1. Qual(is) das seguintes técnicas de biologia molecular pode(m) ser aplicada(s) como ferramenta no diagnóstico de doenças?
a) (X ) Sequenciamento NGS.
b) (X ) Sequenciamento Sanger.
c) (X ) qPCR.
d) (X ) PCR.
e) (X ) Espectrometria de massas.
2. Explique, em linhas gerais, como o sequenciamento do DNA auxilia no diagnóstico de doenças autossômicas recessivas em indivíduos portadores e pode ser uma ferramenta para o aconselhamento genético.
R.: O portador de uma doença recessiva não apresenta sinais e sintomas associados à doença, pois, para a sua manifestação, é necessário que os dois alelos de um gene apresentem a mutação associada à doença. No entanto, devido ao padrão de herança mendeliana, existe a probabilidade de que o alelo mutado seja herdado pela prole do indivíduo portador. Assim, no caso de casais em que ambos sejam portadores de um alelo mutado, existe a probabilidade de que os filhos recebem um ou ambos os alelos mutados e, portanto, sejam também portadores ou manifestem a doença, respectivamente. Assim sendo, o sequenciamento do DNA para a avaliação das mutações em genes associados a doenças autossômicas recessivas auxilia no aconselhamento genético, demonstrando a probabilidade da ocorrência de tais doenças na prole de indivíduos portadores, especialmente nos casos em ambos os indivíduos sejam portadores da mesma doença autossômica recessiva. 
3. Considerando as etapas envolvidas na utilização das técnicas de biologia molecular para o diagnóstico e outros exames, qual das seguintes opções não pode ser executada pelo biomédico?
a) ( ) Coleta de amostra biológica (sangue, saliva, urina etc.).
b) ( ) Preparação do material genético (extração, amplificação, clonagem etc.).
c) ( ) Execução e desenvolvimento de testes moleculares (PCR, sequenciamento, microarranjo, hibridação etc.).
d) ( ) Emissão de laudos referentes aos exames executados. 
e) (X ) Confirmação do diagnóstico da doença em conjunto com a avaliação clínica do paciente.
4. Ao tratarmos dos exames que realizam a identificação de microorganismos presentes no endométrio e no trato gastrointestinal, falamos sobre a análise do metagenoma. Sucintamente, descreva do que se trata uma análise metagenômica.
R.: A metagenômica é a avaliação do material genético proveniente de uma amostra ambiental, ou seja, composta por diferentes organismos ou micro-organismos, como no caso de amostras do endométrio e do trato gastrointestinal. Na análise, todo o material genético é extraído da amostra e avaliado com o objetivo de identificar os diferentes organismos presentes na amostra, bem como sua abundância relativa.