MET LABV 01 -Determinacao-de-Acucares-em-bebidas

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<p>MAPA/SDA/CGAL</p><p>Laboratório Nacional Agropecuário - LANAGRO/RS</p><p>Laboratório de Análises de Bebidas e Vinagres</p><p>Método de Ensaio - MET</p><p>Código: MET LABV/01/04/01</p><p>Página 1 de 4</p><p>Emissão: 08/10/2013</p><p>Determinação de Açúcares Redutores (AR) em bebidas: método de Fehling</p><p>com uso do Redutec</p><p>1 Escopo</p><p>Aplicável para bebidas em geral. Através do método da titulação de oxirredução</p><p>podem ser determinados apenas os açúcares que têm capacidade redutora; no entanto,</p><p>quando a amostra for submetida à hidrólise ácida (adquire capacidade redutora),</p><p>determinam-se os açúcares totais.</p><p>Amostras de vinhos com teor de açúcares menor que 20g/L, são analisadas sem a</p><p>necessidade de hidrólise prévia, pois o meio ácido da bebida garante a completa inversão</p><p>dos açúcares.</p><p>2 Fundamentos</p><p>Os açúcares redutores reagem com os íons cúpricos da solução de Fehling,</p><p>reduzindo-se a íons cuprosos, sob a ação do calor em meio alcalino. Ao reagir com os íons</p><p>cúpricos, os açúcares sofrem oxidação, enquanto que o cobre é reduzido, formando-se um</p><p>precipitado vermelho de óxido cuproso.</p><p>Os açúcares não redutores devem sofrer uma prévia hidrólise com ácido clorídrico</p><p>dissociando o dissacarídeo em seus monossacarídeos com capacidade redutora.</p><p>3 Reagentes, padrões e materiais</p><p>• Solução de glicose padrão 0,5% (manter em geladeira)</p><p>• Água tipo destilada ou melhor</p><p>• Licor de Fehling (A e B)</p><p>• Bureta de 25 mL</p><p>• Proveta graduada</p><p>• Béqueres</p><p>• Vidro de relógio</p><p>• Bastão de vidro</p><p>• Balão volumétrico 100mL</p><p>4 Equipamentos</p><p>• Determinador de Açúcares Redutores – Redutec (LABV-045)</p><p>5 Precauções analíticas</p><p>• Uso de EPI’s</p><p>• Descarte segregado de resíduos das soluções de Fehling.</p><p>MAPA/SDA/CGAL</p><p>Laboratório Nacional Agropecuário - LANAGRO/RS</p><p>Laboratório de Análises de Bebidas e Vinagres</p><p>Método de Ensaio - MET</p><p>Código: MET LABV/01/04/01</p><p>Página 2 de 4</p><p>Emissão: 08/10/2013</p><p>Determinação de Açúcares Redutores (AR) em bebidas: método de Fehling</p><p>com uso do Redutec</p><p>6 Procedimentos</p><p>6.1 Inversão da Amostra</p><p>6.1.1 Pipetar uma alíquota de 25mL da amostra em béquer de 50-100mL.</p><p>6.1.2 Adicionar 1 mL de ácido clorídrico concentrado, homogenizar e cobrir o béquer com</p><p>vidro de relógio .</p><p>6.1.3 Levar ao banho maria, de modo que a solução mantenha uma temperatura entre 67</p><p>e 70 ºC por 15 minutos. Em seguida, esfriar a temperatura ambiente.</p><p>6.1.4 Neutralizar com hidróxido de sódio 5 N, usando papel tornassol como indicador. O</p><p>papel tornassol vermelho muda para a cor azul.</p><p>6.1.5 Transferir quantitativamente para um balão volumétrico de 100 mL.</p><p>� Deve-se utilizar diluição diferente nos teores extremos de ART, conforme indicado no</p><p>Quadro 2 do Anexo A, baseando-se na leitura de açúcares pelo Wine Scan ou pela</p><p>estimativa do Extrato Seco Total.</p><p>6.1.6 Completar o volume do balão com água destilada ou de melhor qualidade.</p><p>6.2 Preparação do Licor de Fehling</p><p>6.2.1 Preparar o licor de Fehling, dosando quantidades iguais dos reativos Fehling A e B</p><p>(relação 1:1), em proveta graduada, na quantidade suficiente para as amostras e</p><p>para 3 provas de branco.</p><p>� Considerar que para cada amostra são necessários 20mL do reagente final e, pelo menos</p><p>uma das amostras do lote será ensaiada em duplicata.</p><p>6.3 Titulação do Branco</p><p>6.3.1 Tarar a bureta, previamente ambientada, com solução de glicose padrão 0,5%.</p><p>6.3.2 Pipetar volumetricamente 20mL do Licor de Fehling para a ampola do Redutec.</p><p>6.3.3 Adicionar água para arrastar frações de Licor e encobrir o eletrodo.</p><p>6.3.4 Proceder segundo as instruções da IU LABV/15 – Redutec.</p><p>6.3.5 Iniciar a titulação, gotejando a glicose rapidamente (cerca de 1mL a cada dois</p><p>segundos) com o potencial mantendo-se estável; com a aceleração do potencial</p><p>diminuir o fluxo do titulante, finalizando gota a gota até o potencial disparar.</p><p>→ O ponto final da titulação é observado pela variação abrupta do potencial químico e NÃO</p><p>por um valor constante do potencial. Embora amostras semelhantes tendam a reproduzir um</p><p>valor, ao lidar-se com diferentes matrizes, a composição iônica afeta o potencial indicado,</p><p>podendo-se antecipar ou retardar erroneamente o ponto final da titulação.</p><p>6.3.6 Finalizar a titulação quando o potencial tende a disparar. Proceder de modo idêntico</p><p>com brancos e amostras.</p><p>→ Titular o branco em duplicata e, se a diferença entre as 2 provas for superior a 0,20mL,</p><p>realizar uma terceira prova de branco.</p><p>MAPA/SDA/CGAL</p><p>Laboratório Nacional Agropecuário - LANAGRO/RS</p><p>Laboratório de Análises de Bebidas e Vinagres</p><p>Método de Ensaio - MET</p><p>Código: MET LABV/01/04/01</p><p>Página 3 de 4</p><p>Emissão: 08/10/2013</p><p>Determinação de Açúcares Redutores (AR) em bebidas: método de Fehling</p><p>com uso do Redutec</p><p>6.3.7 Proceder a leitura do volume de glicose gasto na titulação anotando-o no formulário</p><p>de Determinação de Açúcares Redutores (Anexo B);</p><p>6.4 Titulação da Amostra</p><p>6.4.1 Colocar 20 mL de licor de Fehling na ampola.</p><p>6.4.2 Adicionar a alíquota de amostra conforme a leitura de açúcares pelo Wine Scan ou</p><p>pela estimativa do Extrato Seco Total. Pode-se consultar o Anexo A, segundo o tipo</p><p>de amostra.</p><p>6.4.3 Realizar a análise (titulação) da amostra do mesmo modo que descrito na prova do</p><p>branco.</p><p>6.5 Controle de qualidade:</p><p>6.5.1 No preparo do ensaio do Branco, a titulação é repetida até um valor em duplicata</p><p>que respeite a diferença de no máximo 0,2 mL entre as repetições.</p><p>6.5.2 A cada bateria de ensaios está prevista a realização de, no mínimo, uma amostra</p><p>em duplicada a cada dez amostras.</p><p>6.5.3 A determinação de AR também está prevista no Programa de Ensaio de Proficiência</p><p>que o laboratório participa anualmente. A amostra do Interlaboratorial é analisada,</p><p>preferencialmente, por todos os analistas capacitados, sendo que estes dados são</p><p>compilados para análise da reprodutibilidade do LABV (Intralaboratorial).</p><p>7 Resultados</p><p>A concentração de açúcares redutores totais é calculada em gramas de açúcar por</p><p>litro da bebida (g/L), segundo a fórmula:</p><p>A</p><p>V</p><p>a</p><p>C ×××= v)-(B10</p><p>(g/L) AR</p><p>C: concentração da glicose padrão (%)</p><p>B: volume médio gasto no BRANCO</p><p>v: volume gasto de glicose (ml)</p><p>a: alíquota titulada (ml)</p><p>V: volume do balão na diluição (ml); sem diluição = 1</p><p>A: alíquota de amostra na diluição (ml); sem diluição = 1</p><p>Os dados brutos da determinação de AR são reportados segundo IT LABV/23 -</p><p>Sistema de Gerenciamento da Amostra, através da planilha eletrônica do Anexo C.</p><p>8 Arquivamento dos registros</p><p>Os registros originados pelo preenchimento do Anexo B devem ser arquivados na</p><p>pasta “MET LABV-01 - Açúcares” na Sala de Análise. O anexo C é arquivado</p><p>eletronicamente na pasta “R:\Docs\LABV\FFA\SGA ano”.</p><p>MAPA/SDA/CGAL</p><p>Laboratório Nacional Agropecuário - LANAGRO/RS</p><p>Laboratório de Análises de Bebidas e Vinagres</p><p>Método de Ensaio - MET</p><p>Código: MET LABV/01/04/01</p><p>Página 4 de 4</p><p>Emissão: 08/10/2013</p><p>Determinação de Açúcares Redutores (AR) em bebidas: método de Fehling</p><p>com uso do Redutec</p><p>9 Referências</p><p>BRASIL, Manual Operacional de Bebidas e Vinagres; Anexo: Fermentados alcoólicos,</p><p>Método 13;. Destilados, método 8; Não-alcoólicos, Método 14; Vinagres, Método 11.</p><p>Instrução Normativa Nº24, de 08 de setembro de 2005. DOU de 20/09/05, Seção 1, pp 11.</p><p>10 Anexos</p><p>Anexo A MET LABV/01/04 – Tabela “Orientação para tomada de amostra”</p><p>Anexo B MET LABV/01/04 – Formulário “Determinação de Açúcares Redutores (via Redutec</p><p>LABV-045)”</p><p>Anexo C MET LABV/01/04 – Planilha AçúcaresRedutores 13.0.xls</p><p>11 Alterações</p><p>Alteração do título, incluindo a matriz bebidas.</p><p>Excluído o item 6.1.7.</p><p>Alterado o anexo B para incluir no formulário informações referente a rastreabilidade das</p><p>soluções.</p><p>12 Responsabilidades</p><p>O Responsável Técnico (RT) do LABV, ou pessoa por ele autorizada, responde pela</p><p>elaboração, emissão, distribuição de cópias, arquivamento, análise crítica e revisão desta</p><p>MET, bem como pelo gerenciamento das não-conformidades decorrentes. É de</p><p>sua</p><p>responsabilidade assegurar a implementação e o cumprimento deste documento.</p><p>A UGQ é responsável pela verificação deste método de ensaio.</p><p>Elaboração/Revisão: Aprovação: Verificação:</p><p>Paulo Gustavo Celso - LABV Aline Torres Venturini - LABV Eliana Menezes - UGQ</p><p>Data: 07/10/2013 Data: 07/10/2013 Data: 08/10/2013</p>