Técnicas e Aplicações Biomoleculares

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PCR Taq DNA polimerase:
Enzima que trabalhar em
altas temperaturas, que
amplia o DNA a partir do
anelamento com os primers
em altas temperaturas. 
Técnicas e Aplicações BiomolecularesTécnicas e Aplicações Biomoleculares
Biologia Molecular
Por: Beatriz de Souza Penha
 Exames de DNA
•Fins de identificação pessoal - avanço do século na área de genética;
•Determinar paternidade com confiabilidade;
•Disputas legais para fins de pensão alimentícia;
•Casos Criminais;
•Aconselhamento genético;
•Detecção de infecções.
 técnicas de biologia molecular
-Extração de DNA: amostras de tecidos (por exemplo. animais) devem ser
colocados em álcool absoluto imediatamente após a coleta, e trocado após 24h;
Amostras de partes vegetais devem ser lavadas e secadas em sílica; 
Para todos amostras congeladas em estoque, é preferível o fracionamento em
pequenas alíquotas para que o material não sofra descongelamentos sucessivos,
que poderiam contribuir para a oxidação do tecido e para a degradação do DNA.
-Extração de DNA/RNA:
Uso de DNA para estudos de natureza variada:
Diagnostico; medicina; processo evolutivo; genoma; investigação de perícia.
Uso de RNA para estudos de natureza variada: 
Transcrição reversa do RNA; análises de expressão gênica;
Northern (rna), rt-pcr, construção de bibliotecas de cdna.
Após obtenção de DNA, o que fazer?
-O DNA possui leitura de absorbância em um comprimento de onda na faixa de
260nm; Proteínas à absorbância em comprimento de onda na faixa de 280nm;
Razão 260/280nm mostra a pureza do DNA.
Reação em cadeia da polimerase (PCR)
Amplificação in vitro de uma sequência específica de DNA (*replicação in vitro)
Reação em cadeia da polimerase (PCR): realizada para fazer muitas cópias de
DNA.
03 ETAPAS:
1- Desnaturação
2-Anelamento
3- Extensão
A alta sensibilidade do método de PCR, bem como a sua especificidade, nos
permite amplificar uma sequência alvo mesmo a partir de amostras com
baixo grau de pureza e de quantidades mínimas de DNA, o que torna o
método viável não só para a pesquisa básica mas também para a pesquisa
aplicada.
Princípio da PCR: Amplificação enzimática de uma sequência de DNA, explorando
a sua capacidade de duplificação;
Uma fita simples é o molde para síntese de novas cadeias complementares
(Enzima de DNA polimerase adiciona os nucleotídeos) para produção de milhões
de cópias ao final da reação.
Controle de Contaminação em laboratório de diagnóstico: Fluxo laminar;
separação de áreas, desinfeção frequentes e luz ultravioleta, autoclave,
acondicionamento com lixo hospitalar. Roupas e cabelos adequados, uso de
EPI's. 
Gel de poliacrilamida neurotóxico: usado em separação de proteínas ou
partículas muito pequenas.
Gel de agarose: utilizado para a separação de partículas relativamente
pequenas e partículas grandes.
 Técnica de eletroforese
•Eletroforese é migração e separação de partículas em uma matriz (suporte),
submetidas a uma diferença de potencial elétrico.
•Os suportes podem ser: 
-papel de filtro
-acetato de celulose
-gel de agarose
-gel de poliacrilamida
•A migração das partículas depende do seu tamanho e carga.
 Eletroforese em gel: 
-Eletroforese em gel é eficiente em promover a separação de partículas de
acordo com seu tamanho.
•O DNA contém carga negativa, portanto migra para o polo positivo
•Quando mais concentrado o gel, mais ''fechada'' é sua malha, portanto a
partícula terá mais dificuldade em atravessá-la.
Brometo de etídio=
cancerígeno
Biologia Molecular
Por: Beatriz de Souza Penha
•Q uando submetidas a luz
UV o gel apresenta um
padrão de bandas. Cada
banda é um fragmento de
DNA de determinado
tamanho
 Enzimas de restrição
-Procedimento: Submetendo o gel a corrente elétrica, os fragmentos separam-se
em função do seu tamanho, sendo visualizados com brometo de etídio sob a forma
de bandas num transiluminador.
-Corre-se paralelamente no gel o marcador de peso molecular.
-A descoberta das enzimas de restrição revolucionou a biologia molecular, pois
possibilitou a montar moléculas de DNA recombinant .
EXEMPLO: Produção de Insulina.
 biotecnologia
-Qualquer aplicação tecnológica que utilize organismos vivos ou derivados destes
para obtenção ou modificação de processos e produtos de interesse para a
humanidade
•Engenharia Genética: Tecnologia de manipulação de DNA, com alteração
genética de seres vivos.
 PROJETO GENOMA FOI ESSENSIAL PARA AVANÇOS!!!
 
•Clonagem Molecular: Permite estudar os genes e os seus produtos, obter
organismos transgênicos e realizar terapia gênica.
 Biobalística
•Técnica que consiste em disparar microprojéteis em alta velocidade, para
introduzir DNA em tecidos vivos. - como se fosse injetar um dna recombinante
nos tecidos dos animais.
 Transgênicos
•O transgênico é um organismo que recebe um gene retirado de outro, o que lhe
confere uma característica nova. A depender do gene adicionado, a planta pode
se tornar mais nutritiva ou mais resistente à seca, a pragas ou a agrotóxicos.
 edição genômica
•A técnica de edição genética CRISPR/Cas9, mecanismo em bactérias que
permite modificar os genes de forma rápida e eficiente, cortando algumas partes
do DNA e inserindo nova.