antigeno anticorpo

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Ligação Ag-Ac e 
anticorpos monoclonais 
Professora: Milena Martins 
Antígeno: 
•  Os antígenos possuem duas 
propriedades: 
•  Imunogenicidade: 
capacidade de induzir uma 
resposta imune especifica, 
•  Antigenicidade: capacidade 
de interagir com os linfócitos 
T ou linfócitos B 
sensibilizados. 
•  Substancia solúvel, celular ou particulada que pode ser 
especificamente ligada por um anticorpo ou por um receptor de 
antígeno de célula T. 
Imunógenos 
•  Imunógenos: antígenos que desencadeiam a resposta imune e memória. 
•  Hapteno: Pequenas substancias químicas incapazes de estimular uma 
resposta 
•  Complexo hapteno-carreador: hapteno liga-se a uma macromolécula 
para induzir uma resposta imune (pode atuar como um imunógeno). 
Determinante antigênico 
•  Determinante antigênico ou 
epitopo: área muito pequena das 
macromoléculas antigênicas que 
interagem com sítios de ligação dos 
anticorpos e dos TCRs 
•  A presença de vários determinantes 
iguais e chamada de polivalência 
ou multivalência e cada um pode 
ser ligado por uma molécula com 
região variável. 
•  As superfícies celulares, incluindo 
os microrganismos, geralmente 
possuem uma grande quantidade 
de determinantes antigênicos. 
Antígeno: peso molecular e 
complexidade 
•  Quanto maior for a molécula, maior será o numero de epitopo; 
•  Quanto maior a complexidade, maior será imunogenicidade. 
•  Um antígeno complexo contem vários determinantes antigênicos, 
onde alguns dos quais são mais eficientes na indução da resposta 
imune e são chamados imunodominantes. 
•  Glicoproteínas com função imunitária 
•  Pertencem superfamília das imunoglobulinas; 
•  Sintetizados por linfócitos B e plasmócitos; 
•  Interagem, especificamente, com os imunógenos, que 
estimulam sua biossíntese; 
•  Desencadeiam vários mecanismos na resposta imune 
•  Ativação do sistema complemento, 
•  Opsonização dos antígenos para fagocitose, 
•  Citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC), 
•  Reações de hipersensibilidades, entre outras ocorrem. 
Anticorpos 
Anticorpos 
Anticorpos 
Ligação Ag-Ac 
•  É uma associação biomolecular semelhante à 
interação de enzimas com seus substratos ou de 
hormônios com seus receptores, com uma distinção 
bem evidente o Ac não provoca nenhuma alteração 
química irreversível na molécula de Ag, podendo, 
portanto, o produto formado (Ag-Ac) se dissociar 
nos seus 2 componentes; isto é, Ag e Ac livres na 
solução. 
•  Os antígenos possuem estruturas químicas que favorecem 
a complementaridade com o anticorpo, através de 
ligações não-covalentes. 
•  São reversíveis e possuem afinidades diferentes com 
diversas substâncias. 
•  Anticorpo pode se relacionar com antígenos com 
afinidades diversas, ele pode ligar-se com um que não 
seja o seu antígeno (heterologo) de melhor 
complementariedade através de ligações mais fracas com 
regiões semelhantes, mas não idênticas, àquele que o 
induziu. 
Ligação Ag-Ac 
•  A interação entre um anticorpo e seu antígeno pode ser rompida por 
altas concentrações de sal, pH extremo, detergentes e, algumas vezes, 
por competição com altas concentrações do próprio epítopo puro. A 
ligação é, portanto, uma interação não-covalente reversível. 
Ligação Ag-Ac 
•  O sítio de combinação de um anticorpo é localizado 
na porção Fab da molécula e é construído a partir de 
regiões hipervariáveis de cadeias pesadas e leves. 
•  Determinante antigênico se aninha em uma fenda 
formada pelo sítio de combinação do anticorpo. 
•  Conceito de reações antígeno-anticorpo é o de uma 
chave (i.e. o antígeno) que cabe em uma fechadura 
(i.e. o anticorpo). 
Ligação Ag-Ac 
•  Afinidade: Força de ligação resultante do total de forças não-
covalentes entre um único sítio de ligação do Ac e um único 
epítopo do antígeno. Depende do grau de complementariedade 
entre as duas moléculas. 
•  Ac de baixa afinidade ligam-se de modo fraco e tendem a se 
dissociar com facilidade. Ac de alta afinidade estabelecem ligações 
fortes e mais duradouras. 
Ligação Ag-Ac 
•  Uma diferença básica entre o Ac produzido na 
resposta primaria e na resposta secundaria e a sua 
afinidade. 
•  O Ac da classe IgM, produzido para um Ag na 
resposta primaria, tende a ser de afinidade 
relativamente baixa e pode contar com uma avidez 
adicional, causada por sua estrutura pentamerica, 
para ligar-se eficientemente ao Ag. 
•  IgG e outras classes produzidas na resposta 
secundaria tendem a ter uma afinidade maior. 
Ligação Ag-Ac 
•  Maturação da 
afinidade: consequência 
da hipermutação 
somática dos genes de 
Ig acoplada com a 
seleção das células B 
com Ig de superfície de 
alta afinidade. 
Ligação Ag-Ac: maturação da 
afinidade 
•  Processo darwiniano, 
requerendo primeiro a 
geração de variabilidade nos 
receptores de células B e 
então a seleção daqueles com 
maior afinidade pelo Ag. 
Apos esse processo, as células 
B, que se ligam ao Ag de 
modo bem-sucedido e 
sobrevivem a seleção, saem 
do centro germinativo do 
nódulo linfático para 
tornarem-se células B de 
memoria ou células 
plasmáticas secretoras de Ac. 
Ligação Ag-Ac: maturação da 
afinidade 
•  Avidez é uma medida da 
força total de ligação de 
um antígeno contendo 
muitos determinantes 
antigênicos e anticorpos 
multivalentes. 
•  A avidez é influenciada 
tanto pela valência do 
anticorpo como pela 
valência do antígeno. 
Avidez é mais que a soma 
de afinidades individuais. 
Ligação Ag-Ac: avidez 
•  Repetindo, afinidade se refere à força de ligação entre um 
único determinante antigênico e um sítio de combinação de 
um anticorpo particular, enquanto que avidez se refere à 
força total de ligação entre antígenos e anticorpos. 
Ligação Ag-Ac: avidez 
Fatores que afetam a medição 
de reações antígeno-anticorpo 
A única forma de se saber se uma reação antígeno-anticorpo ocorreu 
é descobrir um jeito de detectar direta ou indiretamente os complexos 
formados entre o antígeno e o anticorpo. A facilidade da escolha 
sobre qual deles poderá detectar as reações antígeno-anticorpo vai 
depender de vários fatores. 
 
•  Afinidade 
•  Quanto maior a afinidade do anticorpo pelo antígeno, mais estável será 
a interação. Nesse caso, a facilidade com que se pode detectar a 
interação é maior. 
•  Avidez 
•  Reações entre antígenos multivalentes e anticorpos multivalentes são 
mais estáveis e portanto mais fáceis de detectar. 
•  Razão entre antígeno e anticorpo 
•  A razão entre o antígeno e o anticorpo influencia a detecção dos 
complexos antígeno anticorpo porque o tamanho dos complexos está 
relacionado com a concentração do antígeno e do anticorpo. 
Fatores que afetam a medição 
de reações antígeno-anticorpo 
Anticorpos monoclonais 
•  1975, Georges Kohler e Cesar Milstein: método para a preparação do 
anticorpo monoclonal através da fusão da célula B ativada com uma 
célula do mieloma (uma célula plasmática cancerosa). Produziram 
uma célula hibrida (hibridoma), que possuía as propriedades de 
crescimento imortal (mieloma) e secretava o Ac (célula B). 
•  Os hibridomas de células B são produzidos utilizando 
polietilenoglicol (PEG) para fusionar as células do mieloma 
com as células B de animais que foram imunizados com o Ag, 
através do qual se deseja produzir os anticorpos. 
•  As células do mieloma contribuem para o crescimento imortal 
das células fusionadas, e as células B contribuem com a 
informação genética para a síntese do Ac especifico de 
interesse. 
•  As condições do procedimento devem permitir seletivamente a 
sobrevivência e o crescimento somente dos hibridomas. Para 
tal, é utilizado o meio HAT (hipoxantina, aminopterina e 
timidina). 
Anticorpos monoclonais 
•  Após a obtenção dos hibridomas, 
estes devem ser diluídos e distribuídos 
em placas de cultura apropriada 
•  Tal procedimento nos dar· a certeza 
de que o Ac produzido seja oriundo 
de um único clone 
•  Cada hibridoma, apos multiplicação e 
produção deAc, será examinado por 
teste sorológico. 
•  Hibridomas são induzidos a 
proliferação, tornando-se assim uma 
fonte inesgotável de anticorpos 
altamente específicos. 
Anticorpos monoclonais 
•  Utilidades: 
•  Reagentes para diagnostico, exames de imagem e 
procedimentos terapêuticos na clinica medica. 
•  Diagnostico de numerosos microrganismos 
patogênicos, 
•  Medidas de níveis sanguíneos de várias drogas 
•  Detecçãó de antígenos produzidos por determinados 
tumores. 
Anticorpos monoclonais