Grátis: Paciente masculino, 55 anos de idade, realiza teste de Hibridização após alteração na linhagem linfóide no hemograma. De acordo com a imagem, são f... – Questões Respondidas

Biologia Molecular

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Paciente masculino, 55 anos de idade, realiza teste de Hibridização após alteração na linhagem linfóide no hemograma.
De acordo com a imagem, são feitas as seguintes afirmacoes: I.O paciente possui a mutação do BCR-ABL, que ocorre por meio da translocação entre o cromossomo 9 e 22. II.Os genes BCR e ABL são marcados com fluoróforos específicos (verde e vermelho) e a mutação pode ser observada pela fusão dos genes (coloração amarela). III. A marcação por fluoróforos específicos facilita a detecção dos genes procurados na técnica, e quando eles se fundem. É correto o que se afirma em:
A II e III.
B I, II e III.
C I e II.
D Nenhuma das alternativas está correta.
E I e III.

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Vamos analisar cada afirmativa: I. O paciente possui a mutação do BCR-ABL, que ocorre por meio da translocação entre o cromossomo 9 e 22. Verdadeiro, essa é uma característica clássica da leucemia mieloide crônica (LMC), onde ocorre a translocação que resulta na fusão dos genes BCR e ABL. II. Os genes BCR e ABL são marcados com fluoróforos específicos (verde e vermelho) e a mutação pode ser observada pela fusão dos genes (coloração amarela). Verdadeiro, essa afirmação está correta, pois a fusão dos genes BCR e ABL pode ser visualizada por meio de fluoróforos, resultando em uma coloração amarela. III. A marcação por fluoróforos específicos facilita a detecção dos genes procurados na técnica, e quando eles se fundem. Verdadeiro, essa afirmação também está correta, pois a utilização de fluoróforos permite a visualização e detecção dos genes de interesse. Com base na análise, todas as afirmativas I, II e III estão corretas. Portanto, a alternativa correta é: B) I, II e III.

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O processo de transcrição reversa, é uma das técnicas mais utilizadas na área de pesquisa de expressão gênica. Essa técnica é conhecida como RT-PCR, ou transcrição reversa, seguida por PCR.
Com base no RT-PCR, analise as sentenças a seguir: I- O RT-PCR avalia a expressão diferencial do mRNA, o qual será convertido em DNA complementar (cDNA). II- A enzima transcriptase reversa (RT) é responsável pela síntese de uma fita de DNA, utilizando como molde uma fita simples de RNA. III- A técnica de RT-PCR é realizada em 40 ciclos, para formação de uma quantidade adequada de cDNA. Assinale a alternativa CORRETA:
I- O RT-PCR avalia a expressão diferencial do mRNA, o qual será convertido em DNA complementar (cDNA).
II- A enzima transcriptase reversa (RT) é responsável pela síntese de uma fita de DNA, utilizando como molde uma fita simples de RNA.
III- A técnica de RT-PCR é realizada em 40 ciclos, para formação de uma quantidade adequada de cDNA.
A Somente a sentença II está correta.
B As sentenças I e II estão corretas.
C As sentenças II e III estão corretas.
D Somente a sentença III está correta.
E As sentenças I e III estão corretas.

[Laboratório Virtual - Hibridização] Segundo o sumário da aula prática, a hibridização é uma técnica que tem o princípio da complementariedade das bases nitrogenadas dos ácidos nucleicos como base (adenina com timina e citosina com guanina). Essa técnica consiste, de forma básica, em localizar sequências de interesse no genoma de quaisquer organismos, hibridizando-as ao próprio DNA da espécie.
Considerando a aula prática de hibridização, assinale a alternativa CORRETA:
A O reagente DAPI é adicionado logo no início da reação, junto à sonda na técnica de FISH, sem necessidade de incubação.
B Ao final da reação é possível visualizar as células marcadas com pontos verdes e vermelho.
C Na técnica de FISH, cada sonda é marcada com a mesma cor fluorescente para garantir a identificação de múltiplos genes simultaneamente.
D A técnica de CGH array é avaliada diretamente no microscópio, sem o uso de scanner.
E A técnica de FISH é usada exclusivamente para a análise de sequências de RNA, e não para sequências de DNA.

Existem diferentes formas de sequenciar um genoma, sendo que cada uma se aplica dependendo da realidade do pesquisador em questão, podendo ser técnicas recentes, que são mais robustas e sofisticadas, ou então, técnicas mais antigas, que, ainda assim, demonstram um excelente resultado, apesar de serem mais complicadas e menos automatizadas.
Sobre essas técnicas, associe os itens, utilizando o código a seguir: I- Sequenciamento de Sanger. II- Next Generation Sequencing. III- Sequenciamento de terceira geração. ( ) Método de primeira geração, mais conhecido por utilizar nucleotídeos terminados de cadeia (ddNTP). ( ) Método que permite a análise da sequência de nucleotídeos em uma única molécula de DNA, sem a necessidade de amplificação dessa molécula, em tempo real. ( ) São métodos de nova geração, que não utilizam nucleotídeos terminadores de cadeia para o processamento das amostras. Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A III - II - I.
B I - III - II.
C Nenhuma das alternativas está correta.
D II - I - III.
E I - II - III.

A técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) se refere à replicação in vitro de um fragmento de DNA.
Sobre o PCR, assinale a alternativa CORRETA:
A O processo de replicação in vitro, depende do uso de primers (oligonucleotídeos sintéticos), com sequências de 18 a 22 nucleotídeos, que seja complementar ao gene de interesse.
B O processo do PCR não necessita da utilização de nucleotídeos.
C Nenhuma das alternativas é correta.
D A enzima DNA polimerase humana é uma das principais responsáveis pelo sucesso da técnica in vitro.
E A ligação dos primers à fita de DNA é denominado como desnaturação.

A terceira geração de métodos de sequenciamento de DNA, possibilitaram analisar as sequências de nucleotídeos de uma única molécula de DNA, sem a necessidade de amplificar a molécula.
Sobre esses métodos, assinale a alternativa CORRETA:
A A terceira geração de sequenciamento utiliza DNA fragmento que é transformado em fragmentos de DNA circular, os quais são replicados em chips com nano-poços. A cada novo nucleotídeo adicionado à nova fita, ocorre a emissão de fluorescência e a detecção ocorre em tempo real.
B É um método totalmente automatizado, também conhecido como Illumina, em que o DNA a ser sequenciado é fragmentado por nebulização e os fragmentos são acoplados a uma placa de vidro por meio de primers adaptadores, formando uma biblioteca de DNA, que será submetida ao PCR.
C É o mais recente avanço em biologia molecular, que permite o sequenciamento de DNA de forma portátil, capaz de sequenciar grandes moléculas de DNA em pequenos equipamentos, semelhantes a pen drives. A plataforma SMRT é a mais utilizada.
D Nenhuma das alternativas é correta.
E Para os métodos de terceira geração, são utilizadas plataformas 454, que são esferas sólidas, nas quais são ligadas as sequências adaptadoras, com o DNA a ser sequenciado, formando uma biblioteca de DNA.

[Laboratório Virtual - Extração e Purificação de DNA e RNA] Segundo o sumário da aula prática, as amostras contendo o DNA ou RNA purificados devem ser: 1) ressuspensas em um tampão e armazenadas em tubos, ambos “livres” de enzimas que possam degradá-las (como DNAse ou RNAse – nucleases); e 2) mantidas em baixas temperaturas (-20 ºC ou - 80 ºC). Todos os procedimentos devem ser realizados com luvas para evitar a degradação das amostras, devido à presença de nucleases nos fluidos corporais das mãos.
De acordo com o processo de extração de DNA e RNA identificado na prática, associe os itens, utilizando o código a seguir: I- Etapa de Lise. II- Etapa de Ligação. III- Etapa de Lavagem. IV- Etapa de Eluição. ( ) Pipete 25 µl da Proteinase K no tubo Eppendorf. Em seguida, pipete 200 µl da amostra de sangue no mesmo tubo e, por último, pipete 200 µl do tampão lise S no tubo. Tampe o Eppendorf e homogeneíze no Vórtex por 20 segundos. Após esse tempo, incube o Eppendorf por 15 min. ( ) Pipete 210 µl de álcool 96% no Eppendorf e homogeneíze de novo no Vórtex. Em seguida, pipete 640 µl do Eppendorf para o tubo spin e centrifugue a 11.000 rpm por 1 minuto. ( ) Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 500 µl do tampão de lavagem SI no tubo spin e centrifugue novamente. Repita o mesmo processo de troca de tubo de coleta, porém a lavagem utilizará 600 µl do tampão de lavagem SII, e centrifugue novamente. ( ) Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 200 µl do tampão de eluição S no tubo spin, espere 1 minuto e centrifugue a amostra. Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A I - II - III - IV.
B IV - II - III - I.
C IV - III - II - I.
D I - II - IV - III.
E II - III - IV - I.

Uma das técnicas essenciais em biologia molecular é a capacidade de sequenciar o gene de um organismo. Esse sequenciamento é importante, pois identifica possíveis mutações, cadeias de transmissão e origem da chegada do vírus a uma região específica.
De acordo com as técnicas empregadas para o sequenciamento de DNA, analise as sentenças: I- Os didesoxinucleotídeos (ddNTP) são utilizados para o sequenciamento com o método de Sanger, em que, posteriormente, faz-se a identificação da sequência com eletroforese. II - O pirosequenciamento tem como base a formação de pirofosfato a cada novo nucleotídeo adicionado à nova fita. III - O método empregado na plataforma Illumina foi a base para o desenvolvimento dos testes de sequenciamento que conhecemos atualmente, sendo a primeira geração de sequenciamento de DNA. Assinale a alternativa CORRETA:
A Somente a sentença I está correta.
B As sentenças I e III estão corretas.
C Somente a sentença II está correta.
D As sentenças I, II e III estão corretas.
E As sentenças I e II estão corretas.

Para construir uma biblioteca de DNA, utiliza-se técnicas de clivagem com enzimas de restrição e clonagem em vetor.
Com base nas etapas para construção de uma biblioteca de DNA, ordene os itens a seguir: I- Fragmentos de DNA são inseridos em vetores idênticos e ligados através da DNA ligase. II- Clivagem do DNA com uma enzima de restrição, formando centenas a milhares de fragmentos de DNA. III- Inserção do vetor em células hospedeiras, produzindo a clonagem dos diferentes fragmentos. IV- Extrair e isolar o DNA genômico de uma célula, tecido ou até mesmo de um organismo. Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A I - II - III - IV.
B IV - II - III - I.
C I - IV - III - II.
D IV - II - I - III.
E I - III - II - IV.

O processo de replicação do DNA é relativamente simples, envolvendo diversas enzimas para que a síntese de uma nova fita de DNA seja realizada.
Com base nas enzimas envolvidas no processo de replicação in vivo, analise as sentenças a seguir: I- A enzima DNA polimerase realiza a adição de novos nucleotídeos à nova fita do DNA que está sendo sintetizada, podendo atuar de modo independente do sentido da fita (3'-5' ou 5'-3'), já que não necessitam de iniciadores. II- As primases são enzimas responsáveis por adicionar primers (iniciadores) à fita de DNA que está sendo sintetizada, pois a DNA polimerase necessita de uma extremidade 3' disponível para a inserção do novo nucleotídeo. III- A enzima helicase, é a responsável por abrir a dupla fita de DNA. Ela vai cortar as pontes de hidrogênio entre os nucleotídeos, permitindo, assim, a separação da fita e síntese de uma nova fita. Assinale a alternativa CORRETA:
A As sentenças I, II e III estão corretas.
B Somente a sentença II está correta.
C As sentenças I e II estão corretas.
D Somente a sentença III está correta.
E As sentenças II e III estão corretas.