Vamos analisar cada uma das alternativas para identificar a correta sobre a terceira geração de métodos de sequenciamento de DNA: A) A terceira geração de sequenciamento utiliza DNA fragmento que é transformado em fragmentos de DNA circular, os quais são replicados em chips com nano-poços. A cada novo nucleotídeo adicionado à nova fita, ocorre a emissão de fluorescência e a detecção ocorre em tempo real. - Esta descrição se refere mais a métodos de sequenciamento de segunda geração, como o Illumina, e não à terceira geração. B) É um método totalmente automatizado, também conhecido como Illumina, em que o DNA a ser sequenciado é fragmentado por nebulização e os fragmentos são acoplados a uma placa de vidro por meio de primers adaptadores, formando uma biblioteca de DNA, que será submetida ao PCR. - Esta descrição é específica para a segunda geração de sequenciamento, não para a terceira. C) É o mais recente avanço em biologia molecular, que permite o sequenciamento de DNA de forma portátil, capaz de sequenciar grandes moléculas de DNA em pequenos equipamentos, semelhantes a pen drives. A plataforma SMRT é a mais utilizada. - Esta alternativa descreve corretamente a terceira geração de sequenciamento, que permite a análise de moléculas únicas de DNA e é conhecida por sua portabilidade e pela tecnologia SMRT (Single Molecule Real-Time). D) Nenhuma das alternativas é correta. - Esta opção não se aplica, pois a alternativa C está correta. E) Para os métodos de terceira geração, são utilizadas plataformas 454, que são esferas sólidas, nas quais são ligadas as sequências adaptadoras, com o DNA a ser sequenciado, formando uma biblioteca de DNA. - A plataforma 454 é um método de segunda geração, não de terceira. Portanto, a alternativa correta é: C.