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Biologia Molecular

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Com relação à coleta, transporte, armazenamento e processamento de amostras de sangue para posterior extração de DNA, avalie as sentenças e assinale a alternativa INCORRETA:
A amostra de sangue fresca deve ser imediatamente resfriada e mantida a 2-8°C até a extração do DNA.
agente anticoagulante preferencialmente utilizado é EDTA ao invés da heparina.
Tubos de vidro devem ser evitados.
rompimento das hemácias pode liberar o grupamento heme, este é um contaminante prejudicial.
A amostra de sangue não precisa ser resfriada e pode ser transportada em temperatura ambiente por até 2 dias.

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Ed

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Vamos analisar cada uma das sentenças para identificar a alternativa INCORRETA: 1. A amostra de sangue fresca deve ser imediatamente resfriada e mantida a 2-8°C até a extração do DNA. - Correto. O resfriamento é importante para preservar a integridade do DNA. 2. Agente anticoagulante preferencialmente utilizado é EDTA ao invés da heparina. - Correto. O EDTA é frequentemente preferido para a extração de DNA. 3. Tubos de vidro devem ser evitados. - Correto. Tubos de plástico são geralmente preferidos para evitar a contaminação e facilitar o manuseio. 4. Rompimento das hemácias pode liberar o grupamento heme, este é um contaminante prejudicial. - Correto. O heme pode interferir na extração e análise do DNA. 5. A amostra de sangue não precisa ser resfriada e pode ser transportada em temperatura ambiente por até 2 dias. - INCORRETA. Amostras de sangue devem ser mantidas em temperaturas controladas para evitar degradação do DNA. Portanto, a alternativa INCORRETA é: A amostra de sangue não precisa ser resfriada e pode ser transportada em temperatura ambiente por até 2 dias.

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Você foi contratado por uma empresa de coleta de DNA para realizar testes de ancestralidade, a coleta é feita com swab pelo próprio cliente e tubo chega em suas mãos.
Leia as alternativas e marque a incorreta.
A amostra coletada pode ficar por até uma semana em temperatura ambiente.
kit utilizado para a coleta de DNA deve possuir informações claras e objetivas.
A coleta pode ser realizada, sem a necessidade de ir ao laboratório.
swab utilizado deve estar limpo, sem detritos, caso tenha marcas de batom ou restos de comida cliente deve repetir procedimento.
tubo deve conter apenas swab limpo dentro dele.

Durante uma capacitação em um laboratório de análises clínicas, a equipe responsável pelos testes moleculares está revisando os procedimentos para garantir a qualidade das análises.
Diante dessa situação, qual das opções explica, de forma mais adequada, a razão pela qual resultado do teste foi comprometido?
A heparina impede a separação do plasma, impossibilitando a extração do DNA.
A heparina interfere nas reações químicas da PCR, inibindo a amplificação do material genético.
A presença de heparina acelera a degradação do RNA, comprometendo os testes moleculares.
A heparina causa lise dos leucócitos, impedindo a identificação de polimorfismos genéticos.
A utilização de heparina reduz a quantidade de plasma disponível para análise, tornando teste inconclusivo.

Após completar a extração do DNA de uma amostra de sangue, não há como saber se a extração foi devidamente realizada não ser que se faça um controle de qualidade do material extraído.
Com relação ao controle de qualidade, podemos afirmar que:
É composto por três etapas: quantificação, coloração e validação.
Deve ser realizado a partir da observação, estabelecimento de hipóteses, análise, conclusões e divulgação de um relatório final.
A etapa de quantificação apenas pode ser realizada com uso da técnica de fluorometria.
A espectrofotometria mede a quantidade de luz, na faixa de 260 nm, absorvida pelo DNA e RNA, desta forma é capaz de quantificar e identificar a pureza da amostra.
A eletroforese é feita para medir a integridade do extraído e tem como princípio diferenciar a solubilidade de cada componente.

Em um laboratório especializado na extração de RNA a partir de tecidos tumorais, uma bióloga observou que a qualidade do RNA extraído estava comprometida, com sinais de degradação.
Qual das alternativas descreve, de forma mais precisa, motivo da degradação observada?
A presença de hemoglobina nas células tumorais acelera a degradação do RNA.
A amostra não foi embebida em formol, comprometendo a integridade do RNA.
A ausência de solução estabilizante permitiu a ação contínua de ribonucleases.
transporte da amostra foi feito sem gelo seco, aumentando a atividade das DNases.
A demora na adição de agentes quelantes impossibilitou a extração adequada do RNA.

Para selecionar uma amostra aleatória de tamanho n de uma população formada por N unidades, que são numeradas de 1 a N segundo uma certa ordem, escolhe-se aleatoriamente uma unidade entre as k primeiras unidades da população, onde k = N / n e seleciona-se cada k-ésima unidade da população em sequência. Esta técnica de amostragem denomina-se amostragem:
Por etapas
Aleatória simples
Probabilística
Sistemática
Não-probabilística

Um pesquisador está organizando um experimento para testar a eficiência de três métodos de extração de DNA a partir de células bucais coletadas com swab.
Qual atitude representa um erro metodológico que pode comprometer a confiabilidade dos resultados?
Incluir apenas voluntários que consentiram participar do estudo.
Definir previamente a concentração dos reagentes utilizados em cada extração.
Utilizar um mesmo técnico para realizar todas as extrações, minimizando a variação.
Adotar como critério de seleção apenas os voluntários disponíveis no dia da coleta.
Realizar as análises utilizando mesmo equipamento para todos os testes.

Hoje em dia, trabalho com material genético tornou-se rotineiro.
Em um protocolo de extração de DNA ou RNA, não se deve usar como reagente:
Proteases
Tampão
Nucleases
Sais
Álcool

Na extração de RNA, todos os cuidados citados abaixo devem ser tomados, exceto:
Uso de solução fenol/clorofórmio em pH ácido.
Todo material deve ser RNAse free e lavado com soluções neutralizadoras de RNAses.
É preferível uso de um aparelho sonicador para a quebra das membranas celulares, ao invés do uso de detergentes.
Na extração de RNA, usamos acetato de amônio para auxiliar a separação entre a fase orgânica e a aquosa.
RNA deve ser rapidamente congelado em nitrogênio líquido.