Vamos analisar cada item e suas respectivas características: I - Observação direta sem coloração (Salina): Este método permite observar as células em seu estado natural, utilizando uma solução salina para manter a viabilidade das amostras. II - Técnica de coloração de Gram: Este é um método de coloração que diferencia as bactérias em Gram-positivas e Gram-negativas, baseado na estrutura da parede celular. III - Técnica de coloração de Ziehl-Neelsen: Este método é utilizado para identificar micobactérias, como o Mycobacterium tuberculosis, e é uma coloração específica para bacilos ácidos-alcool resistentes. Agora, vamos correlacionar os itens com as descrições: - A técnica de coloração de Gram (II) é geralmente realizada antes da observação direta sem coloração (I), pois a coloração ajuda a visualizar as células. - A técnica de coloração de Ziehl-Neelsen (III) é uma coloração específica que pode ser realizada após a coloração de Gram, mas não é uma sequência direta. Analisando as opções: A) II - I - III: Coloração de Gram, depois observação direta, depois Ziehl-Neelsen. (não é a sequência correta) B) I - II - III: Observação direta, depois coloração de Gram, depois Ziehl-Neelsen. (não é a sequência correta) C) III - II - I: Ziehl-Neelsen, depois coloração de Gram, depois observação direta. (não é a sequência correta) D) II - III - I: Coloração de Gram, depois Ziehl-Neelsen, depois observação direta. (não é a sequência correta) Nenhuma das alternativas apresenta a sequência correta. A sequência lógica seria primeiro a coloração de Gram (II), depois a coloração de Ziehl-Neelsen (III) e, por último, a observação direta sem coloração (I). Portanto, a resposta correta é: D) II - III - I.