Prévia do material em texto
Olá alunos, vamos simular que vcs foram para o laboratório. 1- Leia o roteiro e veja o teria que fazer. 2- Pensem em como fariam cada parte. 3- Observem os resultados obtidos de uma das turmas do ano passado. 4- Faça uma análise e conclusão com cada resultado (simples, tentem não ultrapassar de 2 linhas para cada, podem fazer manuscrito ou no word, depois anexar a resposta como word, imagem ou pdf) Aula 4: CARACTERIZAÇÃO DA ENZIMA CATALASE 1. Objetivos Estudar a natureza das enzimas e conhecer maneiras possíveis de determinar qualitativamente a atividade enzimática. 2. Enzimas polifenoloxidase Existem várias formas de visualizar a atividade enzimática, podemos usar exemplos do nosso dia a dia. O escurecimento de frutas como banana ou maçã, quando expostas ao ar, é causado pela polifenoloxidase e também pode ser observado na batata e outros vegetais de cor clara. O mecanismo através do qual essa enzima atua baseia-se na oxidação de compostos difenólicos (que possuem dois radicais hidroxila, -OH, ligado ao anel benzênico) e monofenólicos (que possuem um único radical hidroxila, -OH, ligado ao anel benzênico) presentes nas frutas e nos vegetais. A ação mais comum é sobre os difenóis, dentre os quais destaca-se o catecol, 3. Enzimas catalases A enzima catalase está presente em plantas, animais e microrganismos. É uma enzima intracelular formalmente denominada hidroperoxidase; E.C. 1.11.1.6. Nos animais e vegetais, tem a função de proteger os tecidos contra os efeitos tóxicos do peróxido de hidrogênio (H2O2) formado durante o metabolismo celular, decompondo-o em H2O e O2. Uma das fontes de peróxido de hidrogénio é a β-oxidação de ácidos graxos, necessária para a produção de diversos metabolitos essenciais. O peróxido de hidrogénio está relacionado com diversas patologias ligadas ao stress oxidativo. 3. Procedimento experimental 3.1. Preparo do extrato enzimático • Lave e descasque uma maçã de tamanho médio; • Triture no liquidificador com 250 mL de água destilada; • Filtre através de uma gaze e armazene o filtrado. Observe a coloração, escurece com o tempo. 3.2. Caracterização das enzimas 3.2.1. Reativo de Biureto • Reagente de coloração azul torna-se violeta na presença de proteínas • sulfato de cobre + tartarato duplo de postássio e sódio + NaOH Técnica: Tubo 1 2 Água 1 mL 1 mL Filtrado - 5 gotas Biureto 1 mL 1 mL Misture e compare os resultados. Resultados 1 (cor dos tubos) 3.2.2. Atividade da catalase Técnica: Tubo de rosca 1 2 Filtrado 5 mL 5 mL Água oxigenada 10V - 10 gotas Misture por inversão, sem agitar. Deixe em repouso por 15 minutos e compare os tubos. Resultados 2 bolhas