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Biologia celular Profa. Dra. Maria das Graças de Almeida Felipe Alguns slides referentes aos tópicos: - Origem e evolução da célula (conceitos básicos de sistemática e filogenia molecular; características dos três domínios); -Análise estrutural da célula (microscopia ótica e eletrônica); -Organização interna das células (células procarióticas e eucarióticas; estrutura e transporte através da membrana; compartimentos intracelulares; endereçamento de proteínas) ministrados na disciplina para auxiliar no estudo para a P1 em 08 de maio de 2018. Bibliografia M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP - Alberts, B., et al. Biologia Molecular da Célula, 5ed. Artmed Editora Ltda, 2010. - Cooper, G. M., Robert, E.H. A célula: uma abordagem molecular. Artmed Editora Ltda, 3° Ed. 2007. - Wasserman, S.A.; Minorsky, P.V.; Jackson, R.; Reece, J.; Cain, M.; Urry, L. Biologia de Campbell. Artmed Editora. 8 a Edição. 2010. - Lodish, H.; Berk, A.; Matsudaira, P.; Kaiser, C. A.; Krieger, M.; Scott, M. P.; Zipurky; Darnell. Biologia Celular e Molecular. 5ª Edição. Editora Artmed, 2005. - Raven, P. H., Evert, S. E. Biologia vegetal. Editora Guanabara Koogan, 2007. - Madigan, M.T.; Martinko, J.M.; Bender, K.S.; Buckley, D.H.; Stahl, D.A. Microbiologia de Brock. Editora Artmed, 14a Edição, 2016. - Brock, T. D. ; Madigan, M.T.; Martinko, J.M.; Dunlap, P.; Clark, D. Biology of Microorganisms. Pearson Education.12a Edição. 2009. - De Roberts, E.M.F.; Hibs, J. Bases da biologia celular e molecular. Editora Guanabara Koogan, 2006. Estudo da diversidade e das relações dos seres vivos Origem e evolução das células Conceitos básicos de sistemática e filogenia molecular O que é sistemática microbiana? Inclui a taxonomia e a filogenia História evolutiva de um organismo Ciência de identificação, classificação e nomenclatura M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Madigan et al. Microbiologia de Brock,14ª Edição, 2016. Principais marcos da evolução biológica, da alteração geoquímica da Terra e diversificação microbiana. M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Origem e evolução das células Conceitos básicos de sistemática e filogenia molecular Madigan et al. Microbiologia de Brock,14ª Edição, 2016. Relações evolutivas e a árvore da vida filogenética. (a) A tecnologia por trás da filogenia do RNA ribossomal. (b) A árvore filogenética da vida. M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Origem e evolução das células Conceitos básicos de sistemática e filogenia molecular Modo provável da constituição das primeiras células eucariontes ao longo do processo evolutivo. M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Origem e evolução das células Conceitos básicos de sistemática e filogenia molecular COOPER, G.M. A célula: uma abordagem molecular. 2001. Origem e evolução das células Características dos três domínios Eubacteria Archaea Eukarya Membrana nuclear Não Não Sim Mitocôndria e cloroplastos Não Não Sim Parede celular Peptideoglicano (mureína), mureína + LPS, proteína pseudomureína, proteína, glicoproteína Variável, peptideoglicano ausente Lipídeos da membrana ligação éster ligação éter ligação éster Tamanho do ribossomo 70S (sensível a cloranfenicol) 70S (insensível a cloranfenicol) 80S e 70S (insensível a cloranfenicol) Material genético cromossomo pequeno circular, histonas ausentes cromossomo pequeno circular, proteínas semelhantes a histonas mais de um cromossomo grande e linear, histonas presentes Polimerase simples complexa complexa M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Madigan et al. Microbiologia de Brock, 14ª Edição, 2016. Análise estrutural das células ao microscópio M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP TIPOS DE MICROSCOPIA ➢Ótica - Campo claro (não corado e corado) - Campo escuro - Ultravioleta - Contraste de fase - Contraste de interferência diferencial - Fluorescência - Confocal - Desconvolução ➢Eletrônica - Varredura - Transmissão - Tunelamento Microscopia. (a) Microscópio ótico composto. (b) Trajetória de luz . Análise estrutural das células ao microscópio Microscopia ótica Madigan et al. Microbiologia de Brock,14ª Edição, 2016. M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Observação microscópica de lâminas fixadas e coradas Microbiologia de Brock, 12a Edição. 2010. I. Preparação de um esfregaço II. Fixação pelo calor e coloração III. Microscopia Secar ao ar Cobrir a lâmina com o corante; lavar e secar Pingar uma gota de óleo sobre a lâmina; examinar com a lente objetiva de 100x. Análise estrutural das células ao microscópio TIPO DE MICROSCOPIA AUMENTO MÁXIMO ÚTIL ASPECTO DO ESPÉCIME APLICAÇÕES ÓTICA Campo luminoso 1000 – 2000 espécimes corados ou não; as bactérias geralmente coradas assumem a cor do corante Determinação dos elementos morfológicos grosseiros de bactérias, fungos, algas e protozoários Campo escuro 1000 – 2000 geralmente não corados; o espécime aparece brilhante ou “iluminado” sobre um fundo escuro Microrganismos que exibem algum dado morfológico característico em estado vivo e em suspensão líquida (ex. espiroquetas) Ultravioleta 1000 – 2000 não é visualizado diretamente; fotografado Diferenciação de componentes celulares com base em maior ou menor absorção da luz UV. Fluorescente 1000 – 2000 brilhante e corado; cor do corante fluorescente técnicas diagnósticas, nas quais o fluorocromo fixado ao organismo revela sua identidade Contraste de fase 1000 – 2000 vários graus de “brilho” exame de estruturas celulares em células vivas de microrganismos maiores como leveduras, algas, protozoários e algumas bactérias ELETRÔNICA 200.000 – 400.000 visto em tela fluorescente exame de vírus e da ultraestrutura das células microbianas M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Microrganismos Parede Bactérias (Procariótico) -Peptideoglicano (N-acetilglucosamina-β-1→4-murâmico) Arqueobactérias (Procariótico) -Pseudopeptideoglicano (N-acetilglicosamina-β-1→3-talassominurônico) Fungos (Eucariótico) -Quitina (bolores) (N-acetilglicosamina-β-1→4 e monômeros de glicose) -Manoproteína e glucano (leveduras) Organização interna das células Células procarióticas e eucarióticas Diferenças Estruturais Estrutura da parede celular bacteriana: peptideoglicano. M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Organização interna das células Células procarióticas e eucarióticas M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Organização interna das células Células procarióticas e eucarióticas Madigan et al. Microbiologia de Brock,14ª Edição, 2016. Paredes celulares de bactérias. (a,b) Diagramas de paredes de gram- positivas e gram negativas. Staphylococcus aureus (roxa, gram- positiva) e Escherichia coli (cor-de-rosa, gram- negativa) M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Organização interna das células Estrutura e transporte através da membrana Pequena secção da membrana dupla de uma bactéria E. coli. Sorption of volatile phenols by yeast cell walls M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Parede celular de leveduras Moreno, N. J; Azpilicueta, C. A. Sorption of volatile phenols by yeast cell walls, International Journal of Wine Research, n. 1, p. 11-18, 2009. Parede celular manoproteína β 1,6 - Glucana β 1,3 - Glucana Quitina Levedura β - Glucana β (1,6) -D- Glicose β (1,3) -D- Glicose β (1,3) -D- Glicose Ramificação β (1,3) -D- Glicose Parede celular manoproteína Polímero de unidades de β (1,3) – glicopiranosil com ramificações de β (1,6) D - glicopiranosil Organização interna das células Células procarióticas e eucarióticas Polissacarídeos defungos (quitina) e de paredes de celulares vegetais (celulose) M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP COOPER, G.M. A célula: uma abordagem molecular. 2001. Organização interna das células Células procarióticas e eucarióticas M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Organização interna das células Células procarióticas e eucarióticas Madigan et al. Microbiologia de Brock,14ª Edição, 2016. Principais lipídeos de arqueias e a estrutura das membranas citoplasmáticas de arqueias. M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Microrganismos Membrana citoplasmática Bactérias - Ácidos graxos e glicerol (ligação éster) - Opanóides, exceto micoplasma (esteróis) Arqueobactérias - Hidrocarboneto e glicerol (ligação éter) - Esteróis (5 a 25% dos lipídeos), mais rígidas Fungos - Ácidos graxos e glicerol (ligação éster) - Esterois (5 a 25% dos lipídeos), mais rígidas Organização interna das células Células procarióticas e eucarióticas M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Organização interna das células Estrutura e transporte através da membrana https://biologydirect.biomedcentral.com/articles/10.1186/s13062-014-0032-7 Linha do tempo para termos relacionados à membrana . Pequena secção da membrana dupla de uma bacteria E. coli. M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Organização interna das células Estrutura e transporte através da membrana Alberts et al. Biologia Molecular da Célula, 5ª edição, 2010. As principais funções da membrana citoplasmática. Embora estruturalmente frágil, a membrana citoplasmática desempenha várias funções celulares importantes. M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Organização interna das células Estrutura e transporte através da membrana Madigan et al. Microbiologia de Brock,14ª Edição, 2016. M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Organização interna das células Estrutura e transporte através da membrana A estrutura de um fosfolipídeo. (a) fórmula estrutural. (b) modelo de preenchimento especial; (c) representação simbólica; (d) estrutura da bicamada fosfolipídica. Reece et al. Biologia de Campbell, 10ª ed. 2015. Estrutura geral de lipídeos. (a) Ligação éster e (b) ligação éter. (c) Isopreno, estrutura parental das cadeias laterais hidrofóbicas de lipídeos de arqueias. Em contraposição, os lipídeos de bactérias e eucariotos apresentam cadeias laterais compostas por ácidos graxos. M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Organização interna das células Estrutura e transporte através da membrana Madigan et al. Microbiologia de Brock,14ª Edição, 2016. Mobilidade das moléculas de fosfolipídeos em uma bicamada lipídica. Alberts et al. Biologia Molecular da Célula, 5ª edição, 2010. M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Organização interna das células Células procarióticas e eucarióticas Proteínas de canal e carreadoras (A) Proteínas de canal formam poros abertos através dos quais moléculas de tamanho apropriado (por exemplo, íons) podem atravessar a membrana. (B) Proteínas carreadoras ligam seletivamente pequenas moléculas para serem transportadas e depois sofrem alterações conformativas para liberá-las no outro lado da membrana. M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP A B COOPER, G.M. A célula. Uma Abordagem molecular. 2001. Organização interna das células Estrutura e transporte através da membrana Estrutura de transportadores transmembrânicos e tipos de eventos de transporte. Exemplos de três eventos de transporte distintos: uniporte, antiporte e simporte. M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Organização interna das células Estrutura e transporte através da membrana Madigan et al. Microbiologia de Brock,14ª Edição, 2016. Três maneiras de dirigir o transporte ativo. M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Organização interna das células Estrutura e transporte através da membrana Alberts et al. Biologia Molecular da Célula, 5ª edição, 2010. Transporte ativo envolvendo ATP M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP PERRY & STALEY. Microbiology. 1997 Proteína transdutora de energia Interior Exterior Organização interna das células Estrutura e transporte através da membrana M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Organização interna das células Estrutura e transporte através da membrana Madigan et al. Microbiologia de Brock,14ª Edição, 2016. Mecanismo de um transportador ABC. Proteína periplasmática de ligação → alta afinidade pelo substrato; transmembrânicas→ canal de transporte; citoplasmática →hidrolisam ATP (energia). Transportadores ABC típicos em procariotos (A) e em eucariotos (B). M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Organização interna das células Estrutura e transporte através da membrana Alberts et al. Biologia Molecular da Célula, 5ª edição, 2010. Mecanismo do sistema fosfotransferase em Escherichia coli. Proteínas envolvidas: enzimas I, IIa, IIb e IIc, e proteína HPR. A sequência de transferência do fosfato ocorre por um fosfoenolpiruvato (PEP) através da enzima IIc. M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Organização interna das células Estrutura e transporte através da membrana Madigan et al. Microbiologia de Brock,14ª Edição, 2016. M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP JUNQUEIRA & CARNEIRO. Biologia celular e molecular. 9ª ed. 2012. Organização interna das células Compartimentos intracelulares Modo provável como se constituíram as primeiras células eucariontes. O núcleo e o empacotamento do DNA em eucariotos. (a) Micrografia eletrônica de uma célula de levedura. (b) O empacotamento do DNA em torno das proteínas histonas forma um nucleossomo. M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Organização interna das células Compartimentos intracelulares: Núcleo Madigan et al. Microbiologia de Brock,14ª Edição, 2016. Organização interna das células Compartimentos intracelulares M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Biologia de Campbell. 10ª edição, 2015. Síntese dos componentes de membrana e sua orientação na membrana resultante. Um modelo explica como os peroxissomos proliferam e como novos podem se formar. M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Organização interna das células Compartimentos intracelulares: Peroxissomos Alberts et al. Biologia Molecular da Célula, 5ª edição, 2010. M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Organização interna das células Endereçamento de proteínas Biologia de Campbell. 10ª edição, 2015. Sequência de aminoácidos Destino “Sinais de endereçamento” Organização interna das células Endereçamento de proteínas M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Relações topológicas entre compartimentos das vias secretora e endocítica em uma célula eucariótica. Alberts et al. Biologia Molecular da Célula, 5ª edição, 2010. M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Alberts et al. Biologia Molecular da Célula, 5ª edição, 2010. Organização interna das células Tráfego intracelular de vesículas Processamento de oligossacarídeos nos compartimentos de Golgi. Organização interna das células Tráfego intracelular de vesículas M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Fagocitose Biologia de Campbell. 10ª edição, 2015. M.G.A. Felipe – EB – EEL/USP A teoria endossimbionte sobre as origens das mitocôndrias e dos cloroplastos nas células eucarióticas Organização interna das células Mitocôndria e Cloroplasto Biologia de Campbell. 10ª edição, 2015. M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP JUNQUEIRA & CARNEIRO. Biologia celular e molecular. 9ª ed. 2012. Organização interna das células Mitocôndria : organela Esquema do sistema genético próprio das mitocôndrias, que gera proteínas relacionadas com a replicação do DNA e algumas proteínas de sua membrana interna. M.G.A.Felipe – EB – EEL/USP Desenho esquemático dos principais componentes mitocondriais e suas funções. JUNQUEIRA & CARNEIRO. Biologia celular e molecular. 9ª ed. 2012. Organização interna das células Mitocôndria : organela M.G.A. Felipe– EB – EEL/USP Organização interna das células Cloroplasto : organela Biologia de Campbell. 10ª edição, 2015. Cloroplasto, o local da fotossíntese. M.G.A. Felipe – EB – EEL/USP Visão geral da respiração celular. Organização interna das células Mitocôndria : transdutora de energia Biologia de Campbell. 10ª edição, 2015. M.G.A. Felipe – EB – EEL/USP Oxidação do piruvato a acetil-CoA, a etapa anterior ao ciclo do ácido cítrico. Organização interna das células Mitocôndria : transdutora de energia Biologia de Campbell. 10ª edição, 2015. M.G.A. Felipe – EB – EEL/USP Visão geral da oxidação do piruvato e do ciclo do ácido cítrico. Organização interna das células Mitocôndria : transdutora de energia Biologia de Campbell. 10ª edição, 2015. M.G.A. Felipe – EB – EEL/USP A principal conversão de energia catalisada na mitocôndria Organização interna das células Mitocôndria : transdutora de energia Alberts et al. Biologia Molecular da Célula, 5ª edição, 2010. M.G.A. Felipe – EB – EEL/USP Quimiosmose acopla a cadeia de transporte de elétrons à síntese de ATP. Organização interna das células Mitocôndria : transdutora de energia Biologia de Campbell. 10ª edição, 2015. M.G.A. Felipe – EB – EEL/USP Organização interna das células Mitocôndria : transdutora de energia Alberts et al. Biologia Molecular da Célula, 5ª edição, 2010. Resumo do metabolismo gerador de energia das mitocôndrias M.G.A. Felipe – EB – EEL/USP Rendimento de ATP por molécula de glicose em cada estágio da respiração celular. Organização interna das células Mitocôndria : transdutora de energia Biologia de Campbell. 10ª edição, 2015. M.G.A. Felipe – EB – EEL/USP Uma visão geral da fotossíntese: cooperação das reações luminosas e o ciclo de Calvin Organização interna das células Cloroplasto : transdutor de energia Biologia de Campbell. 10ª edição, 2015. Organização interna das células Cloroplasto : transdutor de energia Biologia de Campbell. 10ª edição, 2015. M.G.A. Felipe – EB – EEL/USP As reações luminosas e a quimiosmose: Organização interna das células Cloroplasto : transdutor de energia Biologia de Campbell. 10ª edição, 2015. M.G.A. Felipe – EB – EEL/USP O ciclo de Calvin M.G.A. Felipe – EB – EEL/USP Organização interna das células Mitocôndria e Cloroplasto Alberts et al. Biologia Molecular da Célula, 5ª edição, 2010. Acoplamento quimiosmótico Organização interna das células Mitocôndria e Cloroplasto Biologia de Campbell. 10ª edição, 2015. M.G.A. Felipe – EB – EEL/USP Comparação da quimiosmose nas mitocôndrias e nos cloroplastos.