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Microscopia de Fluorescência Acadêmica: Karla Letícia Ferreira UNESPAR - 2018 Histórico Fluorescência – Nicolás Monardes (1577) Microscópio de Fluorescência – August Kohler (1904) Histórico August Kohler e Henry Siedentopf – 1908 da companhia Carl Zeiss lançaram o primeiro modelo de microscópio de fluorescência. O que é? Uma técnica que permite que os espécimes sejam estudados com sensibilidade e especificidade altas com o uso da luz. É uma ferramenta de laboratório utilizada para visualização de estruturas imperceptíveis a olho nu. O Microscópio de Fluorescência Estruturas do Microscópio Filtros de luz (excitação/emissão) Lentes objetivas e oculares Espelho dicróico Estruturas do Microscópio Como funciona? Preparação das amostras; Fonte de luz emite um comprimento de onda; Excitação da amostra com substância específica; Essa substancia emite outro comprimento de onda. Como funciona? Como funciona? Como funciona? Utilizando um trio de lente: Fluoróforo São moléculas que absorvem fótons com energia de determinado espectro de excitação e re-emitem fótons com energia de determinado espectro de emissão. Anticorpos Utiliza-se anticorpos acoplados à fluoróforos, sendo possível localizar estruturas específicas das células; Ligação específica ao antígeno; Localização moléculas-alvo. Anticorpos Para que serve? Visualizar partes das células; Estudar processos celulares; Localizar moléculas específicas; Estudar a interação entre moléculas in vivo. Para que serve? Imunofluorecencias de tumor crescidos na cultura do tecido. Aplicação Obrigado!!