Espiroquetas (Treponema palidum) (1)

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Microbiología
Unidad IV
Bacteriología sistemática
Espiroquetas. Bacterias espirales y curvadas.
Definición:
Bacterias llamadas espirilos poseen una configuración helicoidal, semejante a un tirabuzón y cuerpos relativamente rígidos.
Bacterias llamadas espiroquetas están compuestos por microorganismos helicoidales y flexibles.
Espiroquetas
Las espiroquetas componen un gran grupo heterogéneo de bacterias móviles espirilares. Una familia (Spirochaetaceae) de la orden Spirochaetales consiste en tres géneros de grandes microorganismos espirilares de vida libre. La otra familia (Treponemataceae)incluye tres géneros, cuyos miembros son patógenos para el hombre: 1) treponemas, 2) borrelias y 3) leptospiras.
LEPTOSPIRA Leptospirosis
BORRELIA 
Lyme 
y fiebres recurrentes
Treponema Sífilis
Las espiroquetas poseen muchas
características estructurales en común, como lo
ejemplifica Treponema pallidum . Son bacilos
gramnegativos, largos, finos, helicoidales,
espirilares o a manera de sacacorcho.
Treponema Pallidum.
TREPONEMA
El genero Treponema incluye la subespecie pallidum que causa la sifilis; la subespecie pertenue que causa la frambesia; la subespecie endemicum que ocasiona la sífilis endémica (llamada también bejel); y el Treponema carateum que ocasiona el mal del pinto.
TREPONEMA PALLIDUM Y SÍFILIS
Morfología e identificación
A. Microorganismos típicos
El microorganismo es una espiral fina que mide 0.2
mm de ancho y 5 a 15 μm de largo,
Aproximadamente aproximadamente. 
Las espiras están espaciadas regularmente a una
distancia de 1 μm entre si. Los
gérmenes son muy móviles y rotan de manera
Constante.
Alrededor de sus endoflagelos, incluso después de
fijarse a las células en sus extremos ahusados
Las espiras son tan finas que no se les identifica con facilidad, salvo que se utilice tinción inmunofluorescente o campo oscuro. No captan de manera adecuada la anilina y otros colorantes, pero se les observa en tejidos si se les tiñe con el método de impregnación argentica.
Examen en fresco con microscopía de campo oscuro. Treponema pallidum es una espiroqueta excesivamente delgada (0,1-0,2 µm) para ser visualizada en el microscopio óptico, pero de considerable longitud (5-10 µm), de movilidad característica, enroscada y con extremos rectos y puntiagudos. La microscopía de campo oscuro es el método de diagnóstico más rápido y directo en la fase primaria, secundaria y congénita precoz. Fuente: CDC / WF Schwartz ©
B. Cultivo:
Como dato curioso, nunca se ha logrado el
cultivo de T. pallidum patógeno en medios
artificiales, huevos fecundados o cultivos
De tejido.
C. Características de crecimiento:
T. pallidum es un microorganismo microaerofilo y
Sobrevive mejor en un medio con 1 a 4% de oxigeno.
T. pallidum en líquidos de suspensión apropiados y en
presencia de sustancias reductoras puede conservar su
movilidad tres a seis días a 25°C. En sangre completa o
Plasma. Almacenado a 4°C los microorganismos siguen
siendo viables durante 24 h, como mínimo, y ello adquiere
Importancia potencial en el caso de las transfusiones de
sangre.
D. Reacciones a los agentes físicos y químicos
La sequedad y el incremento de la temperatura a
42°C mata con rapidez a las espiroquetas. Los
treponemas son inmovilizados y destruidos a muy
breve plazo por arsenicales
trivalentes, mercurio y bismuto (contenidos en
Fármacos antisifilíticos de interés histórico
solamente). 
La penicilina es treponemicida en concentraciones
Muy pequeñas, pero la destrucción es lenta, tal
vez por la Inactividad metabólica y la lentitud de
multiplicación de T. pallidum (el tiempo de
división calculado es de 30 h). En la
sífilis no se ha demostrado resistencia a dicho
antibiótico.
Estructura antigénica
El hecho de que sea imposible cultivar in vitro T. pallidum ha
Frenado en grado extraordinario la definición y caracterización
de sus antígenos. 
La membrana externa rodea el espacio periplasmico
y el complejo de peptidoglucanos-membrana citoplasmica.
Están presentes proteínas de membrana que contienen
lípidos con uniones covalentes en sus terminaciones amino.
Los lípidos al parecer fijan las proteínas a las membranas
Citoplasmica o a la externa, y de este modo vuelven
inaccesibles las proteínas a los anticuerpos. 
Los endoflagelos están en el espacio periplasmico. T.
pallidum subespecie pallidum posee hialuronidasa que
degrada el acido hialuronico en la sustancia
Fundamental del tejido, y posiblemente refuerza la
capacidad invasora del treponema. Es imposible
diferenciar los perfiles proteínicos de T. pallidum
(todas las subespecies) y se han identificado mas de
100 antígenos proteínicos. 
Los endoflagelos están compuestos de tres
proteínas centrales que muestran homología con
otras proteínas de la flagelina bacteriana, y
además una proteína de recubierta sin relación
alguna. La cardiolipina es un Componente
importante de los antígenos del treponema. Los
seres humanos con sífilis terminan por generar
Anticuerpos capaces de “teñir” T. pallidum por
inmunofluorescencia indirecta, pues inmovilizan y
destruyen a T. pallidum Inmóviles.
Y vivos y fijan complemento en presencia de una
Suspensión De los microorganismos o de
Espiroquetas similares. 
Las espiroquetas también hacen que surja una
Sustancia precisa similar a anticuerpos que es la
reagina, que confiere positividad a las pruebas de
fijación de complemento y floculación, con
suspensiones acuosas de cardiolipina
Extraída de tejidos normales de mamíferos. 
La reagina y el anticuerpo antitreponemico se han
utilizado para el diagnostico serológico de la sífilis.
Patogenia, anatomía patológica y
manifestaciones clínicas:
A. Sífilis adquirida
La infección natural con T. pallidum se limita al hospedador
humano y en este caso suele transmitirse por contacto sexual,
y la lesión infectante se localiza en la piel y las mucosas de los
genitales.
Sin embargo, en 10 a 20% de los casos la lesión primaria se
localiza en el interior del recto, en el área perianal o en la
boca, y puede surgir en cualquier zona corporal.
 Es probable que T. pallidum penetre mucosas intactas o lo
hace por una solución de continuidad en la epidermis.
Las espiroquetas se multiplican en el sitio
de penetración y algunas proliferan
llegan a ganglios linfáticos vecinos y de ahí
a la corriente sanguínea.
 Dos a 10 semanas después de la infección
surge una pápula en el sitio de la
infección y por lisis hísticas se transforma
en ulcera con una base limpia y dura
(“chancro duro”). 
La inflamación se caracteriza porque en ella
Predominan linfocitos y plasmocitos; dicha “lesión
primaria” siempre cicatriza de manera espontanea,
pero dos a 10 semanas después aparecen las lesiones
“secundarias” que consisten en maculopapulas rojas en
cualquier zona del cuerpo, incluidas las manos y los
pies, y condilomas que son pápulas húmedas pálidas en
la región ano genital, las axilas y la boca. También
Puede haber (todas de origen sifilitico) meningitis,
coriorretinitis, hepatitis, nefritis (por complejos
inmunitarios) o periostitis.
En los dos tipos de lesiones abundan las espiroquetas y
son muy infectantes. Las lesiones contagiosas pueden
Reaparecer en termino de tres a cinco anos de ocurrida
La infección, pero después de ese lapso deja de ser
infectante el paciente. 
La infección sifilítica puede asumir un estado subclinico
y el paciente pasar en forma asintomática por las dos
fases o por ambas, o los signos terminan por aparecer
en las lesiones terciarias.
En casi 30% de los casos, la primo
infección sifilitica evoluciona de manera
espontanea hasta curar del todo, sin
tratamiento. En otro 30%, la infección sin
tratamiento permanece latente (se le puede
detectar por la positividad de
pruebas serológicas). 
En el resto de los casos la enfermedad evoluciona a la
“fase terciaria” que se caracteriza por lesiones granulomatosas
(gomas) en la piel, los huesos y el hígado; por cambios
degenerativosen el sistema
nervioso central (sifilis meningovascular, paresias, tabes) o por
Lesiones cardiovasculares (aortitis, aneurisma aórtico, insuficiencia
de válvula aortica).
En las lesiones terciarias rara vez se detectan treponemas y la
Respuesta histica demasiado intensa tendría que atribuirse a la
hipersensibilidad de los microorganismos. Sin embargo, en
ocasiones se detectan treponemas en los ojos, o el sistema nervioso
central, en la sífilis tardía.
La lesión inicial es el chancro sifilítico. Aparece luego de las 3 o 4 semanas de la inoculación. Comienza como una pápula que luego se erosiona y culmina con una úlcera de bordes indurados e indolora. A  los 4 días aproximadamente aparece una adenopatía inguinal indolora. El chancro puede ser doloroso solo en casos de infección. Siempre se debe buscar lesiones no solo en vulva, sino en periné y región peri anal. El chancro desaparece espontáneamente a las 3 o 6 semanas, pero la enfermedad permanece latente
Típico chancro primario: pápula rojo cereza, indurada e indolora que se acompaña de una adenopatía (ganglio) inguinal.
B. Sífilis congénita
La embarazada sifilitica transmite T. pallidum
al feto por la placenta, desde la decima a la
Decimo quinta semanas de la gestación.
Algunos de los fetos infectados mueren y son abortados de
Manera espontanea en tanto que otros están muertos al
nacer (mortinatos).
Otros mas nacen vivos, pero muestran signos de sífilis
congénita en la niñez: queratitis intersticial, dientes de
Hutchinson, nariz en silla de montar, periostitis y diversas
anomalías del sistema nervioso central.
Pruebas diagnósticas de laboratorio:
Las muestras incluyen liquido hísticos
obtenido al exprimir la superficie de las
lesiones tempranas, para demostrar en el la
presencia de espiroquetas y suero
sanguíneo para estudios serológicos.
B. Examen en campo oscuro
Se coloca una gota de liquido o exudado histico en una
Laminilla y sobre ella se coloca un cubreobjetos para
Hacer una capa fina.
Después se explora el preparado con un objetivo de
Inmersión en aceite con iluminación de campo oscuro,
para identificar
Las espiroquetas móviles típicas. Los treponemas
Desaparecen de las lesiones en termino de horas de
haber comenzado la antibioticoterapia.
C. Inmunofluorescencia
El liquido o el exudado hísticos se extienden en
Una laminilla, se secan al aire y se envían al
laboratorio. En el se fijan y tiñen con suero
antitreponemico marcado con fluoresceína y se
Examinan con un microscopio de
inmunofluorescencia en busca de las típicas
espiroquetas fluorescentes.
PRUEBAS SEROLÓGICAS
Las pruebas serológicas son de dos tipos: 
no-treponémicas y treponémicas.
 Las pruebas no treponémicas son usadas para
despistaje, son económicas y, también, sirven
para evaluar la eficacia del tratamiento. Sus
limitaciones consisten en baja sensibilidad en
sífilis primaria temprana, con prueba de campo
oscuro positiva, en sífilis tardía y la posibilidad de
fenómeno de prozona o de resultados falsos
positivos.
PRUEBAS NO TREPONÉMICAS
Las pruebas no-treponémicas incluyen el VDRL (Venereal Disease Research Laboratory, RPR (Rapid plasma reagin), USR (Unheated-serum reagin) y TRUST (Toluidine red unheated-serum test), de estas las más usadas son RPR y VDRL.
Todas estas pruebas están basadas en antígenos en solución alcohólica, que contienen cardiolipina, colesterol y lecitina purificada en cantidad adecuada para producir reacciones estándares.
VDRL
En la prueba de VDRL, el suero del paciente es inactivado a 56° C por 30 minutos, si se usa liquido cefalorraquídeo (LCR) sólo se debe centrifugar .
Luego la muestra se mezcla con un antígeno, que es una solución buffer salina de cardiolipina y lecitina adosadas a partículas de colesterol. Esta prueba se puede realizar en lámina y ser observada al microscopio como un precipitado de partículas finas (floculación), o se puede realizar en un tubo de ensayo y ser leída macroscópicamente.
Los resultados de VDRL en lámina son comunicados como no reactivos (no hay floculación, débilmente reactivos (ligera floculación, y reactivos floculación definitiva. Todos los sueros reactivos se diluyen seriadamente, a cada dilución se le realiza la prueba de VDRL y se registra el titulo máximo obtenido. Rara vez se tiene un paciente con título elevado en las diluciones y con VDRL no reactivo en la muestra sin diluir (fenómeno de prozona), si ocurriera es más frecuente en la sífilis secundaria1,10.
Se obtiene falsos negativos en ciertas condiciones, tales como fenómeno de prozona, bajo título de anticuerpos, presencia de sustancias inhibidoras en el suero del paciente, VIH, la temperatura ambiental fuera del rango de 23-29° C o error técnico. Los falsos positivos pueden llegar a 10 a 30%, y han sido reportados en casos de síndrome de anticuerpos antifosfolípidos, lupus eritematoso sistémico (LES), fiebre reumática, neumonía vira¡, neumonía neumocócica, mononucleosis infecciosa, hepatitis infecciosa, lepra, malaria, artritis reumatoide, infecciones por otros treponemas, embarazo, ancianos, y muestras hemolisadas o contaminadas
RPR
El RPR es una prueba diseñada para detectar reagina en el suero de manera rápida, no requiere inactivación por calor La muestra se mezcla con una suspensión que posee cardiolipina, lecitina y colesterol en partículas de carbón. Si la muestra es positiva se observa pequeños grumos negros (floculación). El resultado se reporta como reactivo o no reactivo; todos aquellos reactivos deben ser diluidos seriadamente para realizar la titulación, y se reporta la dilución más alta que exhibe reacción.
TRUST Y USR
Estas pruebas son menos usadas que el VDRL y la RPR. El TRUST (Toulidine red unheated serum test) es una prueba desarrollada para el despistaje de la sífilis, el principio es similar al del VDRL, pero no es necesario inactivar el suero y el rojo de toluidina se encarga de dar color a la reacción. La sensibilidad y especificidad son similares a la prueba de RPR.
PRUEBAS TREPONÉMICAS
Las pruebas treponémicas comprenden FTA-ABS (Fluorescent treponemal antibody absorption), y sus variantes FTA-ABS-DS (FTA-double staining), 19S-IgM-FTA-ABS; MHA-TP (Microhemaglutinación para T. pallidum), y TPI (T pallidum immobilization), de los cuales el último es obsoleto por su baja sensibilidad en la sífilis primaria
FTA-ABS
La FTA-ABS es un método de observación directo, que se utiliza como confirmación cuando una de las pruebas no-treponémicas es positiva. Es el método de elección para el diagnóstico de la sífilis primaria a partir de las dos semanas después del contagio.
Se utiliza suero inactivado por calor, el que se coloca sobre una lámina donde se encuentra el Treponema pallidum es suspensión (por lo menos 30 microorganismos por campo). El conjugado consiste en antiglobulina humana (IgG o IgM) con isotiocianato de fluoresceína, el que se diluye seriadamente hasta 1/800 ó más. Luego de un tiempo de incubación, se observa al microscopio de fluorescencia en una habitación oscura. La reacción se reporta en cruces de 1+ a 4+.
La 19S-IgM-FTA-ABS es una variante de la FTA-ABS que usa IgM de 19S que es obtenida por ultracentrifugación y tiene como ventaja una mayor especificidad. La 19S-IgM permanece por corto tiempo en la sangre después del tratamiento y su reaparición determina una reinfección, en cambio, la IgM total se puede detectar hasta un año después16-18. La 19S-IgM-FTA-ABS es de gran utilidad en los siguientes casos: confirmación de la sífilis muy temprana, determinar el éxito terapéutico y diagnosticar una reinfección; no es de utilidad en la sífilis terciaria, porque da falsos negativos19-20.
La FTA-ABS-DS tiene una sensibilidad de 100% para la sífilis secundaria y la sífilis latente, y 95% para la sífilis tardía21-24 porque utiliza en su proceso doble conjugado fluorescente; el primero anti-IgG humana conjugada con rodamina y el segundo fluoresceína antitreponémica que tiene función de contracolor y facilitala visualización.
Inmunidad
La persona con sífilis o frambesia activas o
latentes al parecer es resistente a la sobre
infección por T. pallidum.
Sin embargo, si son tratadas de manera adecuada
las dos enfermedades en su fase temprana y se
erradica la infección, el individuo se torna
totalmente susceptible.
Las diversas respuestas inmunitarias no permiten
erradicar la infección ni detener su evolución.
Tratamiento:
La sífilis que ha durado menos de un año se
Trata con una sola inyección intramuscular
de penicilina G benzatinica. En el caso de
sífilis de mayor duración (antigua) o
latente, se instaura el mismo tratamiento
por la misma vía tres veces por semana, a
intervalos semanales.
A veces se le sustituye por otros
Antibióticos como tetraciclinas o
eritromicina.
ENFERMEDADES SIMILARES A LA SÍFILIS:
Estas enfermedades son causadas por
treponemas muy similares a T. pallidum;
generan resultados positivos en las pruebas
Serológicas treponemicas y no treponemicas de
Sífilis.
Ninguna de ellas se transmite por contacto sexual,
sino que esta situacion ocurre por contacto directo.
Bejel
El bejel (causado por T. pallidum subespecie endemicum)
Aparece principalmente en África, pero también en el
Medio Oriente, en el sureste asiático y otras zonas, en
especial entre niños, y ocasiona lesiones cutáneas muy
infectantes; las complicaciones viscerales tardías son
raras. El fármaco mas indicado es la penicilina.
Frambesia
La frambesia es una enfermedad endémica en particular en niños en muchos
países tropicales húmedos y cálidos. Es causada por T. pallidum subespecie
pertenue. La lesión primaria, que es una pápula ulcerada, aparece por lo
común en brazos y piernas.
La transmisión se hace por contacto interpersonal en niños menores de 15
anos. No se observa infección congénita transplacentaria.
Es frecuente que las lesiones cutáneas formen cicatrices
y haya destrucción de hueso, pero son muy raras las complicaciones
viscerales o del sistema nervioso. No hay consenso en
cuanto a si la frambesia representa una variante de sífilis adaptada,
con transmisión por mecanismos no sexuales en climas cálidos.
Al parecer surge inmunidad cruzada entre la frambesia y la sifilis. Los métodos
diagnósticos y el tratamiento son similares a los que se siguen en la sífilis y es
impresionante la respuesta al tratamiento con penicilina.
Mal del pinto
El mal del pinto (pinta o carate) es causado por T. carateum y es endemico
En todos los grupos de edad en México, América Central y del Sur, Filipinas y
algunas areas del Pacifico. Al parecer la enfermedad predomina en razas de
piel oscura. La lesión primaria, que es una pápula no ulcerosa, aparece en
zonas expuestas a la luz solar. Algunos meses después se manifiestan en la
piel las lesiones aplanadas e hiperpigmentadas, y años después hay
Despigmentación e hiperqueratosis. En muy contadas ocasiones hay ataque
tardío del aparato cardiovascular y del sistema nervioso. El mal del pinto se
transmite en forma no sexual, por contacto directo, o con la participacion de
moscas o jejenes. El diagnostico y el tratamiento son iguales a los que se
siguen en la sífilis.
Las pruebas más importantes a realizar para el diagnóstico de la Sífilis son:
1.    Detección del Treponema
Consiste en demostrar la existencia del Treponema en los casos de sífilis precoz (Chancro) y lesiones de sífilis secundaria.  
La técnica más utilizada es la demostración del Treponema en fresco, mediante el empleo del Campo Oscuro en microscopía óptica.  
La obtención de la muestra para campo oscuro:
A partir del Chancro pueden darse tres supuestos:
Chancro de fondo limpio: Recoger la serosidad en un porta-objetos limpio y cubriéndolo con un cubre-objetos, examinándola al microscopio de Campo Oscuro.
Chancro de fondo purulento por sobreinfección: Debe limpiarse la úlcera con suero fisiológico o éter, nunca con jabón, solución antiséptica o detergentes.  Con ello eliminamos los gérmenes sobreañadidos y también, en muchas ocasiones, los Treponemas saprofitos. Con esta operación el Chancro queda limpio, con serosidad clara, y por tanto procederemos como cuando es de fondo limpio.
Si a pesar de haber limpiado el Chancro, persiste la serosidad purulento y espesa, procederemos a colocarla en un porta, diluyéndola mediante suero fisiológico.
Chancro sangrante: Debemos intentar cortar la hemorragia, una vez que podamos conseguir una serosidad limpia, procederemos a la obtención de la muestra. El motivo es que la presencia de hematíes dificulta la visión de los Treponemas al adherirse a los mismos.
Gracias..
Bibliografía:
Gerard J. Tortora,Berdell R. Funke,Christine L. Cas - Introducción a la
microbiología-9ª edición-Editorial médica Panamericana.
Jawets- Microbiología médica 18ª edición
http://fundacionio.org/img/bacteriology/cont/treponema_pallidum_pallidm.html.