Teste de tetrazólio ELOI

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Teste de tetrazólio
Disciplina: Análise de sementes
Professora: Deonisia Martinichen
Acadêmico: Eloi Bareta Junior
Objetivos
Determinar rapidamente a viabilidade de sementes, particularmente, daquelas que apresentam dormência, das espécies recalcitrantes e as que germinam lentamente em testes de rotina;
Determinar a viabilidade das sementes em amostras ou individualmente, quando no final do teste de germinação ocorrer uma alta porcentagem de sementes não germinadas.
Aplicações
quando as sementes necessitam ser semeadas logo após a colheita;
quando apresentam dormência;
resolver problemas encontrados no teste de germinação (plantas anormais);
 avaliar o vigor;
determinar a viabilidade das sementes após tratamentos pré- germinativos;
danos por secagem;
danos por insetos;
danos por umidade;
detectar danos mecânicos de colheita e/ou beneficiamento;
Princípio do teste
As sementes são embebidas em uma solução incolor de 2, 3, 5 trifenil cloreto ou brometo de tetrazólio que é usada como um indicador para revelar o processo de redução que acontece dentro das células vivas.
 Neste processo, os íons de H+ liberados durante a respiração dos tecidos vivos são transferidos por um grupo de enzimas, particularmente, a desidrogenase do ácido málico, e interagem com o tetrazólio, o qual é reduzido a um composto vermelho, estável e não difusível chamado de trifenil formazan.
 Como esta reação se processa no interior das células vivas e o composto não se difunde, há nítida separação dos tecidos vivos e coloridos que respiram, daqueles mortos e que não colorem.
Princípio do teste
 Tecido vigoroso: formação de um vermelho carmin claro
 Tecido em deterioração: vermelho mais intenso
 Tecido morto: branco (não colorido) 
Solução (Reagente)
Usar uma solução aquosa de 0,05% a 1,0% de concentração do sal 2, 3, 5 trifenil cloreto ou brometo de tetrazólio.
 A concentração da solução varia para sementes de diferentes espécies.
A concentração de 1% da solução de tetrazólio é obtida com a dissolução de 10g do sal de tetrazólio em 1,0L da solução tampão ou de água destilada.
Procedimento
Amostra de Trabalho
O teste deve ser realizado em 400 sementes, subdivididas em quatro repetições de 100 sementes ou oito repetições de 50.
Procedimento
Preparo das Sementes antes da Coloração
Pré umedecimento
Para facilitar a absorção da solução de tetrazólio;
Sementes pré-umedecidas são geralmente menos susceptíveis a danos, durante o seu preparo para o teste;
A coloração é mais uniforme, permitindo uma avaliação mais fácil;
Umedecimento lento (teste de germinação – stes que tendem a fraturar, stes velhas)
Embebição direta em água 
Procedimento
Preparo das Sementes antes da Coloração
Exposição dos tecidos para coloração
Permitir melhor absorção da solução de tetrazólio;
Facilitar a avaliação;
Cada espécie tem suas particularidades;
EX: milho – corte transversal acima do embrião.
Procedimento
Preparo das Sementes antes da Coloração
Método a baixa pressão
O método a baixa pressão atmosférica utiliza vácuo parcial para infiltrar rapidamente a solução de tetrazólio nos tecidos das sementes, acelerando, dessa maneira, o resultado do teste.
Coloração
Sementes devem estar completamente cobertas com a solução de tetrazólio;
Não sejam expostas à luz (a ação da luz ocasiona a redução do sal);
T° e tempo de coloração cada espécie tem suas particularidades;
Coloração excessiva deve ser evitada para não mascarar os resultados;
Pode ser acrescentado na solução fungicidas e antibióticos (não formar precipitado escuro na solução);
Lavar as sementes em água corrente e deixá-las submersas até o termino da avaliação (não secar);
Avaliação
O objetivo principal do teste de tetrazólio é distinguir as sementes viáveis das não viáveis.
Sementes viáveis são aquelas capazes de produzir plântulas normais em um teste de germinação sob condições favoráveis. Os embriões colorem completamente e, se parcialmente coloridos, os padrões de coloração apresentados ainda indicam que a semente é viável.
Porções variáveis de tecido necrosado podem ser encontradas em diferentes regiões desses embriões parcialmente coloridos. A posição e o tamanho das áreas necrosadas, e não necessariamente a intensidade da coloração, determinam se tais sementes podem ser classificadas como viáveis.
 Estas diferenças de coloração devem também estar associadas à firmeza dos tecidos para serem consideradas como decisivas no reconhecimento e classificação das sementes viáveis.
Informação dos resultados
O resultado do teste de tetrazólio é obtido pela porcentagem média das sementes viáveis, encontradas nas repetições testadas;
O resultado é apresentado pela media das repetições;
Informação dos resultados
Informação dos resultados
Tabela RAS
OBRIGADO