1-Aspectos metodologicos do LAC

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Aspectos metodológicos do 
laboratório de análises clínicas
Profa. Dra. Mariana Feijó
h"ps://pequenoprincipe.org.br/especialidades/laboratorio-de-analises-clinicas/
 ※ Principais setores do laboratório de análises clínicas
Dias,	A.	T.;	Silva,	E.	F.;	Gonçalves,	F.	B.	Métodos	e	Técnicas	em	Análises	Clínicas.	São	Paulo:Editora	Sol,	2022.
 ※ Etapas do processo de exame laboratorial
h"ps://www.rbac.org.br/arOgos/reference-change-value-uma-ferramenta-do-laboratorio-para-interpretar-resultados-de-exames/
Exemplos de erros pré-analíticos 
Fatores in vivo (fatores fisiológicos ou biológicos): idade, 
sexo, ciclo menstrual, tipo de dieta, estado alimentado/
jejum, atividades físicas, uso de fármacos. 
Fatores in vitro (manipulação da amostra e fatores 
interferentes): coleta da amostra, uso de anticoagulante, 
fármacos, armazenamento da amostra, identificação da 
amostra, local da coleta da amostra.
Exemplos de erros analíticos: 
Pipetagem, troca de amostra, vidrarias e recipientes mal 
lavados, contaminação de reagentes, presença de 
interferentes na amostra (medicamentos, lipemia, 
hemólise, icterícia), equipamentos não calibrados, 
temperatura de reação inadequada, tempo de reação 
errado, erros de cálculo de concentração e diluição.
Exemplos de erros pós-analíticos: 
Transcrição dos resultados, identificação do paciente, 
resultado ilegível, identificação de substâncias 
interferentes, interpretação do resultado.
 ※ Conceitos básicos em análises clínicas
Precisão e exatidão 
Intervalo de referência 
Sensibilidade e especificidade 
Erros aleatórios e erros sistêmicos 
Controle de qualidade
 ※ Conceitos básicos em análises clínicas
Precisão e exatidão
Precisão: reprodutibilidade de um método analítico. 
Exatidão: define quão próximo o valor medido está do valor real.
h"ps://www.linkedin.com/pulse/diferença-entre-precisão-e-exaOdão-de-um-instrumento-leandro/
 ※ Conceitos básicos em análises clínicas
Intervalo de referência
Baseado em indivíduo: valores prévios do mesmo indivíduo, obtidos quando 
ele estava em um estado definido de saúde 
Base populacional: valores obtidos de um grupo definido sistematicamente 
de indivíduos de referência. 
 Análise quantitativa (valor numérico); análise qualitativa (positivo ou 
negativo; reagente ou não reagente).
h"ps://br.freepik.com/fotos-premium/troponina-i-teste-rapido-de-
triagem-para-o-diagnosOco-de-ataque-cardiaco_22980845.htm
h"ps://brasil.babycenter.com/thread/6771222/hcg-quanOtaOvo-
podemos-confiar-nas-semanas
 ※ Conceitos básicos em análises clínicas
Intervalo de referência
H"ps://Www.Rbac.Org.Br/ArOgos/Reference-Change-Value-Uma-Ferramenta-Do-Laboratorio-Para-Interpretar-Resultados-De-Exames/
Uma série de valores normalmente definidos por um limite de referência 
superior e um inferior, representando, geralmente, 95% da população de 
referência.
 ※ Conceitos básicos em análises clínicas
Intervalo de referência
Marshall,	W.	J.;	Lapsley,	M.;	Day,	A.	P.;	Ayling,	R.	M.	Bioquímica	clínica:	aspectos	clínicos	e	metabólicos.	3	ed.	Rio	de	Janeiro:	Elsevier,	2016.
Uma série de valores 
normalmente definidos por um 
limite de referência superior e 
um inferior, representando, 
geralmente, 95% da população de 
referência.
 ※ Conceitos básicos em análises clínicas
Intervalo de referência 
Marshall,	W.	J.;	Lapsley,	M.;	Day,	A.	P.;	Ayling,	R.	M.	Bioquímica	clínica:	aspectos	clínicos	e	metabólicos.	3	ed.	Rio	de	Janeiro:	Elsevier,	2016.
Intervalo de referência vs. valores-alvo
 ※ Conceitos básicos em análises clínicas
Sensibilidade e especificidade
Método analítico
• Sensibilidade: quantidade mínima de um composto ou substância que o método 
consegue detectar. 
• Especificidade: representa o quanto do método é bom para distinguir o 
composto analisado dos potenciais interferentes.
 ※ Conceitos básicos em análises clínicas
Sensibilidade e especificidade
Exame do paciente
• Sensibilidade: medida de incidência de 
resultados positivos de exames em pessoas 
reconhecidamente com a doença. Alta 
sensibilidade = poucos falso negativos. 
• Especificidade: medida de incidência de 
resultados negativos de exames em pessoas 
reconhecidamente sem a doença. Alta 
especificidade = poucos falso positivos. 
Gaw,	A.	et	al.	Bioquímica	Clínica.	5	ed.	Rio	de	Janeiro	:	Elsevier,	2015.	
 ※ Conceitos básicos em análises clínicas
Sensibilidade e especificidade
Exame do paciente
• Sensibilidade: medida de incidência de 
resultados positivos de exames em pessoas 
reconhecidamente com a doença. Alta 
sensibilidade = poucos falso negativos. 
• Especificidade: medida de incidência de 
resultados negativos de exames em pessoas 
reconhecidamente sem a doença. Alta 
especificidade = poucos falso positivos. 
Gaw,	A.	et	al.	Bioquímica	Clínica.	5	ed.	Rio	de	Janeiro	:	Elsevier,	2015.	
 ※ Conceitos básicos em análises clínicas
Erros aleatórios e erros sistemáticos
• Laboratório de análises clínicas 
determina sua margem de 
desvio padrão (DP) aceitável na 
sua rotina, sempre de acordo 
com as recomendações dos 
fabricantes dos testes 
laboratoriais e seus padrões de 
controle de qualidade interno. 
Um dos critérios mais utilizados 
é a média do ensaio ±2 DPs.
• Análises laboratoriais 
apresentam erros inerentes, 
com distribuição normal
Dias,	A.	T.;	Silva,	E.	F.;	Gonçalves,	F.	B.	Métodos	e	Técnicas	em	Análises	Clínicas.	São	Paulo:Editora	Sol,	2022.
 ※ Conceitos básicos em análises clínicas
Machareth,	S.	A	invesOgação	de	erros	laboratoriais	na	práOca	clínica.	InsOtuto	Federal	de	Educação,	Ciência	e	Tecnologia,	2014.
Onde ocorrem os erros laboratoriais?
 ※ Conceitos básicos em análises clínicas
Erros aleatórios e erros sistemáticos
• Erro sistemático: todos os resultados são deslocados de forma semelhante, com o controle 
de qualidade apresentando inclinação positiva ou negativa (tendência), resultado em 
deslocamento gradual ou abrupto da média.
doi:10.1016/j.mpaic.2008.09.016	
h"ps://www.scribbr.com/methodology/random-vs-systemaOc-error/
• Possíveis causas:
Mudança de lote do reagente ou 
calibrador; 
Diluição incorreta dos calibradores; 
Deterioração ou armazenamento 
incorreto dos reagentes; 
Preparo incorreto dos reagentes; 
Alterações do sistema de pipetagem; 
Desgaste na lâmpada do 
espectrofotômetro; 
Manutenção ineficiente dos 
equipamentos.
 ※ Conceitos básicos em análises clínicas
Erros aleatórios e erros sistemáticos
• Erro aleatório: existe maior variabilidade dos resultados, resultando em alargamento da 
curva de distribuição do controle, o que leva ao aumento da imprecisão do método 
analítico. Nesse caso, a direção e a dimensão do erro não podem ser previstos.
doi:10.1016/j.mpaic.2008.09.016	h"ps://www.scribbr.com/methodology/random-vs-systemaOc-error/
• Possíveis causas:
Bolhas em reagentes, tubulações, 
seringas; 
Reagentes mal homogeneizados; 
Coágulos ou microcoágulos no 
pipetador ou na amostra; 
Temperatura instável; 
Obstruções casuais do equipamento; 
Erro que não se repete 
sistematicamente.
 ※ Conceitos básicos em análises clínicas
Controle de qualidade: interno e externo
• Controle interno de qualidade (CIQ): avaliam processos nas dependências do laboratório 
de análises clínicas. 
• Controle externo de qualidade (CEQ): utilizam-se de amostras conhecidas recebidas de 
outra unidade laboratorial ou de uma empresa certificadora, a serem utilizadas nos 
diferentes setores do laboratório, as quais devem apresentar resultados compatíveis 
(considerando-se metodologia, valores de referência e aspectos internos do laboratório), 
tendo como principal finalidade a determinação da exatidão.
Machareth,	S.	A	invesOgação	de	erros	laboratoriais	na	práOca	clínica.	InsOtuto	Federal	de	Educação,	Ciência	e	Tecnologia,	2014.
 ※ Conceitos básicos em análises clínicas
Controle interno de qualidade: regras de Westgard
• Baseiam-se em métodos estatísticos para analisar os dados do controle. Definem limites de 
aplicabilidade do método e podem ser usados para a detecção de errossistemáticos e 
aleatórios.
Machareth,	S.	A	invesOgação	de	erros	laboratoriais	na	práOca	clínica.	
InsOtuto	Federal	de	Educação,	Ciência	e	Tecnologia,	2014. Westgard,	J.	O.	MulOrule	and	“Westgard	Rules”:	What	are	They?	Copyright	Westgard	QC,	Inc	2002	h"p://www.westgard.com.	Traduzido	por	ControlLab	®	2003
http://www.westgard.com
 ※ Conceitos básicos em análises clínicas
Controle interno de qualidade: Gráfico de Levey-Jennings
Machareth,	S.	A	invesOgação	de	erros	laboratoriais	na	práOca	clínica.	InsOtuto	Federal	de	Educação,	Ciência	e	Tecnologia,	2014.
• Verifica se o sistema apresenta estabilidade estatisticamente e as Regras de Westgard.
 ※ Conceitos básicos em análises clínicas
Controle externo de qualidade:
Machareth,	S.	A	invesOgação	de	erros	laboratoriais	na	práOca	clínica.	InsOtuto	Federal	de	Educação,	Ciência	e	Tecnologia,	2014.
• Visa padronizar os resultados de diferentes laboratórios por comparação interlaboratorial 
do mesmo material. 
• Possibilita a identificação de erros sistemáticos e assegura que os resultados estejam o mais 
próximos possível do valor real. 
• São utilizados para os ensaios de proficiência por entidades de acreditação ou vinculados a 
elas.
Programa de Acreditação de 
Laboratórios Clínicos, da 
Sociedade Brasileira de 
Patologia Clínica/Medicina 
Laboratorial
Programa de Sistema Nacional 
de Acreditação, da Sociedade 
Brasileira de Análises Clínicas
 ※ Exercício
Carlos, 55 anos, procurou atendimento médico após sentir fraqueza muscular e episódios de palpitação. O médico, 
suspeitando de um distúrbio eletrolítico, solicitou exames laboratoriais, incluindo sódio, potássio, cálcio e 
creatinina séricos. 
Os resultados iniciais foram os seguintes: 
• Sódio: 138 mEq/L (referência: 135–145 mEq/L) 
• Potássio: 6,2 mEq/L (referência: 3,5–5,0 mEq/L) 
• Cálcio: 9,4 mg/dL (referência: 8,5–10,5 mg/dL) 
• Creatinina: 1,1 mg/dL (referência: 0,6–1,3 mg/dL) 
Com base na hipercalemia, Carlos foi orientado a suspender o uso de diuréticos poupadores de potássio que ele 
utilizava para hipertensão, e foi internado para monitoramento cardíaco, já que hipercalemia pode causar 
arritmias graves. Entretanto, um novo exame de potássio foi realizado após a internação, com coleta feita sob 
supervisão rigorosa, e o resultado foi 4,2 mEq/L (normal).
Investigando o caso, descobriu-se que a amostra anterior havia sido armazenada por tempo prolongado antes da 
centrifugação, levando à hemólise, o que causou a liberação de potássio das hemácias e resultou em um falso 
aumento nos níveis séricos. 
O diagnóstico de hipercalemia foi descartado, e o uso do diurético foi retomado com cautela.
Qual foi o impacto do erro de armazenamento no diagnóstico e manejo do paciente? 
Por que a hemólise pode causar um falso aumento nos níveis de potássio? 
Que medidas poderiam ser adotadas no laboratório para evitar erros como este? 
Quais outros achados laboratoriais poderiam indicar que houve hemólise na amostra?
Métodos e Técnicas em 
Análises Clínicas
h"ps://sgtuniversity.ac.in/medical/programmes/msc-in-medical-biochemistry
 ※ Métodos e técnicas em análises clínicas
Técnicas analíticas
Ópticas: espectrofotometria, nefelometria, turbidimetria, fluorimetria 
Eletroforese 
Cromatografia 
Espectrometria de massa 
Imunoquímica
Classificação segundo o procedimento
Ponto final 
Cinético
 ※ Métodos e técnicas em análises clínicas
Técnicas ópticas
Espectrofotometria
Nefelometria e Turbidimetria
h"ps://www.sinergiacienOfica.com.br/espectrofotometro-para-que-serve-como-funciona-quais-sao-seus-componentes/
h"ps://www.passeidireto.com/arquivo/160247109/turbidimetria-e-nefelometria
Fluorimetria
h"ps://www.youtube.com/watch?v=tpVBQo83hWQ
Espectrofotometria: maioria das análises bioquímicas 
Turbidimetria: Proteína C-reativa 
Nefelometria: Proteína C-reativa, fator reumatóide 
Fluorimetria: dosagem de aminoácidos no teste do pezinho
• Técnicas baseadas na interação 
da luz com a matéria.
 ※ Métodos e técnicas em análises clínicas
Eletroforese:
h"ps://pt.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-expression-and-regulaOon/biotechnology/a/gel-electrophoresis
Eletroforese de proteínas
DOI:10.1590/S1516-84842007000100006
• Técnica que separa moléculas de acordo com o tamanho e a carga.
 ※ Métodos e técnicas em análises clínicas
Cromatografia:
h"ps://cwsabroad.com/o-que-e-cromatografia-em-coluna/
• Técnica que separa, identifica e quantifica os componentes de uma mistura. É baseada na 
interação dos componentes da mistura com duas fases, uma estacionária e outra móvel.
Exemplos: Pode ser utilizada em exames para detecção de drogas na urina, aminoácidos no sangue.
 ※ Métodos e técnicas em análises clínicas
Espectrometria de massa:
h"ps://www.sigmaaldrich.com/BR/pt/applicaOons/analyOcal-chemistry/mass-spectrometry
• Técnica que usa a proporção de massa em relação à carga (m/z) para identificar compostos 
em uma amostra. Um espectrômetro de massa ioniza a amostra em íons gasosos e, em 
seguida, identifica os íons por suas proporções de massa em relação à carga e abundâncias 
relativas. 
Exemplos: Pode ser utilizada no diagnóstico 
de doenças metabólicas neonatais, 
monitoramento de imunossupressores, 
determinação de hormônios, marcadores 
tumorais
h"ps://lacom.furg.br/2-uncategorised/1296-ms
 ※ Métodos e técnicas em análises clínicas
Imunoquímica:
• Conjunto de técnicas cujo princípio é baseado na interação antígeno-anticorpo.
Exemplos: detecção de anticorpos em 
doenças infecciosas e autoimunes.
ELISA
 ※ Métodos e técnicas em análises clínicas
Classificação segundo o procedimento: ponto final
• Reações que formam um produto cuja concentração chega a um ponto máximo, 
permanecendo inalterada por um determinado tempo em função da estabilidade do 
produto formado. Estas reações podem ser colorimétricas ou ultravioleta 
Formação 
do produto Estabilidade 
do produto
Perda de 
estabilidade 
do produto
Basques,	J.	C.	Reagentes	e	reações:	Intervenção	em	problemas	técnicos.	Labtest.
Cinética de dois pontos
 ※ Métodos e técnicas em análises clínicas
Classificação segundo o procedimento: cinético
• Reações em que a velocidade da formação do produto é medida durante um intervalo de 
tempo, que pode ser horas, minutos ou segundos 
Basques,	J.	C.	Reagentes	e	reações:	Intervenção	em	problemas	técnicos.	Labtest.
Cinética contínua
Cinética de tempo fixo com 
medição em ponto-final
 ※ Referências bibliográficas
Dias,	A.	T.;	Silva,	E.	F.;	Gonçalves,	F.	B.	Métodos	e	Técnicas	em	Análises	Clínicas.	São	Paulo:Editora	Sol,	2022.
Gaw,	A.	et	al.	Bioquímica	Clínica.	5	ed.	Rio	de	Janeiro	:	Elsevier,	2015.	
Marshall,	W.	J.;	Lapsley,	M.;	Day,	A.	P.;	Ayling,	R.	M.	Bioquímica	clínica:	aspectos	clínicos	e	
metabólicos.	3	ed.	Rio	de	Janeiro:	Elsevier,	2016.
Machareth,	S.	A	invesOgação	de	erros	laboratoriais	na	práOca	clínica.	InsOtuto	Federal	de	Educação,	Ciência	e	
Tecnologia,	2014.	Disponível	em:	h"ps://issuu.com/silvanamachareth/docs/revista-ifrj-erros-laboratoriais/28
Basques,	J.	C.	Reagentes	e	reações:	Intervenção	em	problemas	técnicos.	Labtest.
BurOs,	C.	A.;	Bruns,	D.	E.	Tietz	fundamentos	de	química	clínica	e	diagnósOco	molecular.	7.	ed.	Rio	de	
Janeiro:Elsevier,	2016.
https://issuu.com/silvanamachareth/docs/revista-ifrj-erros-laboratoriais/28
 ※ Questões para estudo
Quais são as três etapas dos exames laboratoriais, e cite exemplos de erros que podem ocorrer em 
cada etapa. 
Defina precisão, exatidão, sensibilidade e especificidade. 
O que são as análises qualitativas e quantitativas? 
O que é o intervalo de referência baseado em indivíduo e em população? 
Como o intervalo de referência com base populacional é determinado? 
Qual é a diferença entre intervalo de referência e valor alvo? 
O que são os erros aleatórios e erros sistemáticos no laboratório de análises clínicas? Cite exemplos 
de causas de cada tipo de erro. 
O que são os controles de qualidade externo e interno? 
Para que são utilizadas as Regras de Westgar e ográfico de Levey-Jennings no laboratório de 
análises clínicas? 
Explique os princípios das técnicas analíticas discutidas em aula. 
Explique o que é o método de ponto-final, cinético contínuo, cinético de dois pontos, e cinético de 
tempo fixo com medição em ponto-final.