Aula 7

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CURSO: MEDICINA 
MÓDULO I 
 
UNIDADE I: Bases 
Morfofisiológicas do 
Sistema Digestório e do 
Trato Urinário 
 
EIXO TEMÁTICO: 
Bioquímica e Biofísica 
PROCEDIMENTO 
OPERACIONAL PADRÃO (POP) 
 
FATORES QUE AFETAM A 
ATIVIDADE DAS ENZIMAS: 
pH 
 
7ª AULA PRÁTICA 
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POP: 
Bioquímica e 
Biofísica 
 
Profa.: Renata 
de Bastos 
Ascenço Soares 
 
FATORES QUE AFETAM A ATIVIDADE DAS ENZIMAS: TEMPERATURA E 
pH 
 
OBJETIVOS 
- Reconhecer a temperatura e o pH como fatores que podem influenciar na atividade 
enzimática, enfatizando a natureza protéica das enzimas ou o aumento da energia cinética 
das enzimas e substratos, como razões para a modificação da atividade enzimática em 
função destes dois fatores. 
- Reconhecer a existência de temperatura e pH ótimo para a atividade de determinada 
enzima, e que estes podem variar de acordo com a enzima considerada. 
- Identificar a desnaturação e as modificações na ionização dos radicais dos aminoácidos 
da molécula enzimática como os principais efeitos das alterações de pH do meio onde 
ocorre a reação enzimática. 
MATERIAL 
a. Equipamentos e materiais 
- Espectrofotômetro. 
- Banho maria a seco (100oC) 
- Tubos de ensaio. 
- Pipetas volumétricas. 
- Pipetas automáticas e ponteiras. 
 b. Reagentes 
- Suspensão de Invertase 0,1g/dL 
- Sacarose 0,25M 
- Tampão ácido cítrico-citrato de sódio 0,1M, pH 3,0 
- Tampão ácido cítrico-citrato de sódio 0,1M, pH 3,8 
- Tampão ácido cítrico-citrato de sódio 0,1M, pH 4,6 
- Tampão ácido cítrico-citrato de sódio 0,1M, pH 5,4 
- Tampão ácido cítrico-citrato de sódio 0,1M, pH 6,2 
- Tampão ácido-acético-acetato de sódio 0,05M pH4,7 
- Reativo do ácido 3,5-dinitrosalicílico (RA-3, 5-DNS) 
- Água destilada. 
 
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MÓDULO I 
 
UNIDADE I: Bases 
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FATORES QUE AFETAM A 
ATIVIDADE DAS ENZIMAS: 
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Bioquímica e 
Biofísica 
 
Profa.: Renata 
de Bastos 
Ascenço Soares 
 
FATORES QUE AFETAM A ATIVIDADE DAS ENZIMAS: TEMPERATURA E 
pH 
 
PRECAUCÕES E CUIDADOS ESPECIAIS 
- Considerando que o manuseio com reagentes químicos deve ser cuidadoso, logo se faz 
necessário adotar os critérios de biossegurança estabelecidos pelo laboratório durante a 
manipulação e descarte destes produtos. 
PROCEDIMENTO TÉCNICO 
a. Determinação do pH ótimo da invertase 
- Identificar 6 tubos de ensaio da seguinte maneira B (Branco), 1, 2, 3, 4 e 5. 
- Distribuir os reagentes conforme indicado a seguir: 
- Agitar o frasco da invertase antes de pipetar. 
 B 1 2 3 4 5 
Tampão pH 3,0 - 0,8 - - - - 
Tampão pH 3,8 - - 0,8 - - - 
Tampão pH 4,6 - - - 0,8 - - 
Tampão pH 5,4 - - - - 0,8 - 
Tampão pH 6,2 - - - - - 0,8 
Invertase 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 
Água destilada 0,8 - - - - - 
RA-3,5-DNS 1,0 - - - - - 
Sacarose 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 
- Agitar e incubar, em temperatura ambiente por 10 minutos. 
- Interromper a reação por adição de 1,0ml do RA-3,5-DNS nos tubos de 1 a 5. 
- Colocar todos os tubos em banho seco a 100oC por 5 minutos. 
- Esfriar os tubos em água corrente e acrescentar 5ml de água destilada em cada 
tubo. 
- Misturar (agitando) e ler em 540nm (filtro verde) contra o tubo B. 
 
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Bioquímica e 
Biofísica 
 
Profa.: Renata de 
Bastos Ascenço 
Soares 
 
FATORES QUE AFETAM A ATIVIDADE DAS ENZIMAS: TEMPERATURA E 
pH 
 
LEITURA E/OU INTERPRETAÇÃO 
- Fazer dois gráficos colocando na ordenada as DO obtidas e na abscissa os valores de pH 
(gráfico 1) e temperatura (gráfico 2). 
- Analisar os dois gráficos, observando a influência do pH e temperatura na atividade 
enzimática e definir o pH ótimo e a temperatura ótima. 
SIGNIFICADO CLÍNICO 
Dentre os fatores que podem provocar alterações na atividade enzimática, a temperatura 
destaca-se como o mais importante. Para desempenhar sua função biológica, as proteínas 
devem estar em seus estados nativos, com suas estruturas primária, secundária, terciária 
e, quando for o caso, quaternária, íntegras. O calor é um dos fatores que podem destruir 
essa integridade, provocando o fenômeno conhecido como desnaturação protéica. As 
enzimas, como proteínas, também estão sujeitas a esse processo, que podem ocasionar a 
perda, algumas vezes reversível, de atividade. 
Quanto ao pH, mudanças extremas de pH podem alterar a estrutura da enzima devido a 
uma repulsão de cargas. Mudanças mais brandas de pH podem levar a uma dissociação 
de enzimas oligoméricas. Por outro lado, as mudanças de pH que não afetam totalmente 
a estrutura de uma enzima podem diminuir sua atividade apenas por estar afetando 
resíduos do sítio catalítico. 
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 
1. STRYER, L. Bioquímica. 6ª ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2008. 
2. CHAMPE, P. C.; et al. Bioquímica Ilustrada. 4ª ed. Rio de Janeiro: Art Med, 2009. 
3. LEHNINGER, A.L.; NELSON, D.L.; COX, M.M. Princípios de Bioquímica. 2ª ed. 
São Paulo: Sarvier, 1995. 
4. MOTTA, V. T. Bioquímica Clínica para o Laboratório: princípios e interpretações. 5ª 
ed. São Paulo: Medbook, 2009. 
5. REMIÃO, J.O.R.; SIQUEIRA, A.J.S.; AZEVEDO, A.M.P. Bioquímica: Guia de 
Aulas Práticas. São Paulo: EDIPUCRS. 2003. 
6. NEPOMUCENO, A.F.; RUGGIERO, A.C. Bioquímica: Roteiros de Análises 
Bioquímicas Qualitativas e Quantitativas. Tecmedd, 2004.