APA PARA O ALUNO- PRÁTICA FLEXÍVEL- COLORAÇÃO DE GRAM

Prévia do material em texto

APA PARA O ALUNO- PRÁTICA FLEXÍVEL- COLORAÇÃO DE GRAM 
 
POR QUE PRECISO APRENDER ISSO ? 
COLORAÇÃO DE GRAM 
1. Conhecer as técnicas básicas utilizadas na rotina laboratorial. 
2. Observar a aplicação dos conhecimentos obtidos na aula prática 
demonstrativa através da execução de atividades teórico-práticas 
pelos profissionais responsáveis. 
3. Proporcionar ao aluno a oportunidade de observar a realização de 
técnicas laboratoriais, como a coloração de Gram e o exame a fresco, 
realizadas exclusivamente por profissionais habilitados no 
laboratório. A rotina laboratorial executada por profissionais aptos e 
atuante nas análises clínicas é imprescindível para monitorar o 
estado de saúde dos indivíduos que devem manter o hábito 
constante de procurar atendimento médico-laboratorial. Os exames 
 
básicos promovem uma abordagem ampla a respeito dos agentes 
patológicos que podem estar prejudicando a saúde do paciente 
através da detecção de parasitas e bactérias. 
Caro aluno (a) Você realizará esta atividade de forma observacional durante 
uma visita técnica a um labo ratório de análises clínicas devidamente 
equipado, sob a supervisão de um profissional formado em Farmácia ou 
Biomedicina. A visita pode ser realizada na cidade onde você reside ou na 
cidade mais próxima 
EMBASAMENTO TEÓRICO 
A microbiologia é a ciência que estuda os organismos pequenos, e suas 
atividades bio lógicas. Organismos microscópicos são organismos que 
não são observados a olho nu sendo necessário a utilização de uma 
ferramenta para observá-los. Para termos noção do tamanho destes seres, 
vamos imaginar uma escala, e que a menor parte da escala é um angstrom 
que é igual a 10-10 metros, isso é muito pequeno, nossos olhos não 
conseguem identificar estruturas menores que um milímetro. Para isso, 
precisamos de técnicas que auxiliam na visualização destes 
microrganismos. Entre as técnicas mais usadas na microbiologia tem a 
microscopia de Luz e a Eletrônica. Estes equipamentos permitem 
visualizarmos estruturas que são impossíveis de enxergar a olho nu. 
Quando comparamos uma célula vegetal com a célula animal conseguimos 
fazer esta diferenciação com o microscópio de Luz, se quisermos maiores 
detalhes, por exemplo de uma partícula viral vamos precisar de um 
microscópio eletrônico, pois é uma partícula muito pequena, menor bem 
menor que a célula vegetal e animal. Antes de surgir a microscopia, não 
existia a microbiologia, pois era impossível a visualiza ção dos 
microrganismos. A criação do microscópio possibilitou um avanço na 
biologia, embora este microscópio fosse muito simples, adotado apenas 
de uma lente de vidro que permitia um aumento de 300 vezes. Assim tudo 
o que era invisível a olho nu tornou-se visível o suficiente para ser 
pesquisado. Todavia, a partir do surgimento do microscópio foi obtendo-
se maiores informações para caracterizar os microrganismos. As 
características que permitem classificá-los são: ● Características culturais 
(exigência nutricional e ambiental); ● Características morfológicas (forma 
da célula e colônia); ● Características metabólicas (reações bioquímicas 
para sobrevivência); ● Características antigênicas (componente celular 
que são semelhantes entre espécies); ● Características genéticas 
(caracterização do genoma); ● Potencial de causar doenças (homens, 
animais e plantas); ● Características ecológicas (relação entre os 
microrganismos e sua ocorrência natural) e a classificação taxonômica 
(grupos de microrganismos). As bactérias são microrganismos 
procariontes, o núcleo não é delimitado por membranas. A maioria é 
 
formada por uma única célula e apesar dos seus 3, 5 bilhões de anos 
durante os quais têm evoluído a célula bacteriana é simples se 
observarmos em um microscópio ótico sua forma, tamanho e arranjo. Na 
verdade, por trás desta simplicidade se esconde uma maquinaria altamente 
complexa no seu interior, se observarmos em um microscópio eletrônico 
moderno, 6 vamos ver estruturas que raramente poderiam ser vistas ou 
sequer imaginadas pelos primeiros micologistas. A associação das 
bactérias com seus hospedeiros pode ser parasitária e simbiótica, estas 
relações envolve a entrada da bactéria nos tecidos do seu hospedeiro, 
porém a parasitária causa mal as células do hospedeiro. Enquanto, a 
relação simbiótica causa benefício para a bactéria e para seu hospedeiro, 
As bactérias podem apresentar três formas: esféricas, cilíndricas e 
espiraladas.As esféricas, são denominadas de cocos, geralmente são 
arredondadas, podendo ser ovóides ou achatadas em um dos lados, 
quando aderidas umas às outras. As células cilíndricas ou em forma de 
bastão são chamadas de bacilos. E as espiraladas ou helicoidais 
assemelham-se a um saca rolha e são denominadas de espirilos. Ainda tem 
as bactérias que não tem uma forma definida, são chamadas de 
Pleomórficas. E estas formas sofrem modificações, ou seja, quando 
observamos a bactéria no microscópio elas estão acopladas umas às 
outras. As bactérias podem crescer em arranjos, por exemplo: ● - Cocos: 
diplococos (duas células); estreptococos (forma uma cadeia); Sarcinas 
(pacote cúbico com oito células) e estafilococos (agrupadas em forma de 
um cacho de uva). ● - Bacilos: lado a lado (duas células); estreptobacilos 
(forma em cadeia); cocobacilos (bastonete muito curto, cuidado para não 
confundir com bacilos). ● - Filamentosos ramificados: são aquelas 
bactérias que formam hifa e esporangiós poros, é uma exceção. Exemplo 
Actinomicetos. O glicocálice: também denominada de cápsula ou 
exopolissacarídeo, é uma camada viscosa que recobre a célula bacteriana. 
Ela tem diversas funções, esta camada viscosa permite aderência da célula 
a várias superfícies, seja pedras, dentes e raízes de plantas. Protege a 
célula contra dessecamento temporário, favorecendo a sobrevivência da 
célula em condições adversas na superfície do hospedeiro devido a 
formação de uma mucilagem nesta superfície. Na indústria de alimentos 
esta camada é responsável pela formação do lodo afetando a qualidade do 
produto final parede celular é uma estrutura rígida, responsável pela forma 
da célula, protegendo-a do ambiente externo e está envolvida no processo 
de crescimento e divisão celular. A parede celular circunda toda a célula 
bacteriana externamente ao citoplasma, sua rigidez protege a membrana 
plasmática e o conteúdo celular interno evitando o extravasamento do 
ci toplasma ou rompimento da célula. Essa rigidez também se deve a 
presença de peptidoglicano. O peptidoglicano é um heteropolissacarídeo 
que forma uma malha como se fosse uma treliça, dando uma maior rigidez 
à parede celular. Os microrganismos são divididos em dois grupos: 
 
bactérias Gram-positivas e bactérias Gram-negativa, esta diferença baseia-
se na composição da parede celular bacteriana. As bac térias Gram-
negativas possuem uma parede celular complexa, formada por uma ou 
algumas camadas de peptideoglicano e uma membrana externa ligadas 
entre si por uma lipoproteína. A 7 menor concentração de peptideoglicano, 
torna as bactérias Gram-negativas mais susceptíveis a quebra de ligação 
quando comparadas as bactérias Gram-positivas. Todavia, a parede celular 
das bactérias Gram-positivas é composta predominantemente por 
peptideoglicano, representan do 70 a 75% de sua composição, além de 
proteínas e ácido teicoico (Alterthum, 2015). As bactérias Gram negativas 
apresentam 10 % de peptidoglicano por peso, no entanto apresenta 
membrana externa a camada de peptidoglicano. Essa membrana externa é 
formada por uma camada dupla de fosfolipídios e lipopolissacarídeos 
(LPSs) mais um conjunto de proteí nas confere a esse tipo de bactéria 
propriedade patogênica específica, Os LPSs são pobremente neutralizados 
pelos anticorpos, fazendo que as bactérias Gram-negativa é mais 
resistente aos antibióticos e suscetíveis ao rompimento mecânico uma vez 
que tem menor quantidade de peptideoglicano. Entretanto, as bactérias 
Gram-positiva são suscetíveis ao anti biótico e muito maisresistentes aos 
danos mecânicos. Para que os microrganismos sejam visualizados muitas 
vezes é necessário prepará-los para facilitar a microscopia. O preparo deve 
ser de acordo com o interesse de observação: se for para visualizar as 
características morfológicas, detalhes de estrutura celular, função 
fisiológica na célula, várias técnicas podem ser utilizadas para a 
observação dos microrganismos. Estas preparações podem ser simples 
(sem coloração) e trabalhosas (fixadas e coradas). As preparações simples 
podem ser sem coloração e com coloração. As preparações sem coloração 
são: lâminas e lamínulas e microcultivo. As preparações com lâminas e 
lamínulas consiste colocar uma gota do material a ser observado em uma 
lâmina limpa e cobrir com la mínula. Se o material ainda não estiver em 
suspensão, colocar primeiro uma gota de água e, em seguida, com a alça 
de repicagem, colocar uma pequena quantidade do material e cobrir com 
lamínula. O Microcultivo é um microrganismo que é cultivado em um 
pequeno pedaço de meio de cultura colocado em uma lâmina limpa e 
coberto com lamínula. O conjunto (lâmina + BDA com microrganismo + 
lamínula) é, então, depositado em câmara úmida e incubado por, 
aproximadamente, 7 dias. As preparações com coloração podem facilitar a 
observação tornando a célula mais visível na microscopia. Em preparações 
a fresco entre lâminas e lamínulas, geralmente são utilizados corantes 
vitais que não comprometem a vitalidade das células, sendo destituídos de 
ação tóxica. As preparações fixadas e coradas são preparações utilizadas 
na verificação das carac terísticas morfológicas das bactérias. As etapas 
essenciais nesta preparação são: preparo do esfregaço: com a alça de 
platina, coletar uma amostra da suspensão bacteriana e esfregá-lo 
 
(espalhar) no centro de uma lâmina limpa e flambada; a fixação: após o 
esfregaço, a fixação é feita passando a lâmina três vezes diretamente sobre 
a chama do bico de Bunsen; e a coloração: a coloração pode ser simples 
(direta ou indireta) ou diferencial. Contudo a coloração simples direta, o 
esfregaço fixado e corado utilizando-se apenas um tipo de corante (cristal 
violeta ou fucsina). Neste tipo de coloração a bactéria adquire a cor do 
corante e contrasta com o fundo 8 claro (transparente) da lâmina. Todavia, 
a coloração diferencial é realizada através da aplicação de mais de uma 
solução corante, como exemplo, temos a coloração de Gram. A coloração 
de Gram é o método de coloração diferencial mais utilizado no laboratório 
de microbiologia para classificar bactérias com base no tamanho, 
morfologia celular e comportamen to diante dos corantes. É um teste 
adicional rápido para o diagnóstico de agentes infecciosos, sendo também 
utilizado para avaliar a qualidade da amostra clínica analisada (Martinez; 
Taddei, 2015; Ministério Da Saúde, 2000). O método da coloração de Gram 
utiliza solventes que se fixam a parede celular bacteriana. Bactérias Gram-
positivas são capazes de reter o corante Cristal violeta devido à grande 
quan tidade de ácido teicoico e a diminuição da permeabilidade da parede 
celular, onde as bactérias adquirem uma coloração azul-arroxeada. Por sua 
vez, as bactérias Gram-negativas apresentam grande quantidade de 
lipídeos que aumentam a permeabilidade ao solvente orgânico permitindo 
sua descoloração. Esta característica promove a perda (descoloração) do 
corante Cristal violeta, promovendo a coração com o corante de fundo que 
é a Fucsina, assumindo coloração rosa-a vermelhado (Martinez; Taddei, 
2015). 
RECURSOS UTILIZADOS 
Materiais de Consumo Descrição Observação ● Luvas de procedimento e 
jaleco Material a ser fornecido pelo aluno. ● Lâminas com esfregaços de 
secreções (uri na, secreção vaginal, orofaringea ● Microscópico óptico ● 
Óleo de imersão ● Conjunto Para Coloração De Gram 4 Frascos: ● 1 Frasco 
de Violeta Genciana ● 1 Frasco de Lugol Fraco ● 1 Frasco de Solução 
Descorante ● 1 Frasco de Fucsina Materiais a serem fornecidos pelo aluno 
● Carta de Apresentação Material a ser fornecido pelo aluno. 
ATENÇÃO: SAÚDE E SEGURANÇA 
Caros alunos (as), Este projeto integrador visa lhes proporcionar a 
experiência prática de técnicas básicas executadas na rotina laboratorial. 
Todavia, para que sua segurança e integridade física seja mantida é 
indispensável a utilização de equipamentos de proteção individual (EPI’s). 
a) Uso obrigatório de jaleco: longo, branco, de tecido; b) Uso obrigatório 
de luvas de procedimentos; c) Vestuário adequado e obrigatório: uso de 
calça comprida e sapatos fechados, além de cabelos presos. d) As mãos 
devem ser lavadas com sabão ao entrar no laboratório e após a retirada 
 
das luvas; e) Não levar nada à boca enquanto estiver no laboratório, 
lembre-se que estão manipulando amostras humanas potencialmente 
infectadas f) Evite tocar o rosto com as mãos, e não colocar objetos de uso 
pessoal, como óculos ou livros, sobre a bancada de trabalho; g) Deve-se 
tomar cuidado para deixar toda a área de trabalho limpa e desimpedida. A 
bancada de trabalho deve ser limpada com desinfetante ou uma solução 
de hipoclorito a 50% antes e depois do trabalho; h) Todos os materiais 
contaminados devem ser imediatamente colocados em desinfetante ou 
recipiente adequado para descarte 
O QUE PRECISO FAZER NESSA ATIVIDADE PRÁTICA 
PROCEDIMENTO 1: FIXAÇÃO DO ESFREGAÇO Antes de realizar a 
coloração o esfregaço deverá estar seco (exposto ao ar), sendo fixado com 
calor brando (50ºC) passando a lâmina 3 vezes através da chama do bico 
de bunsen. A fi xação excessiva e o superaquecimento irão distorcer a 
morfologia celular e a fixação insuficiente permitirá a saída do material 
durante o processo de coloração. Deixe a lâmina esfriar antes de iniciar a 
coloração. PROCEDIMENTO 2: COLORAÇÃO 1. Cobrir a área com a 
solução de cristal-violeta por cerca de um minuto. 2. Decantar o cristal-
violeta e lavar suavemente com a própria solução de iodo ou água da 
torneira. Nota: Lavagem excessiva nesta etapa pode causar a retirada do 
cristal vio leta das células Gram-positivas. 3. Cobrir a área do esfregaço 
com a solução de iodo durante cerca de um minuto. 4. Descorar a lâmina 
com a mistura álcool-acetona (1:1), até que o solvente escorra in color. 
Alternar com água corrente (jato fraco). O tempo usualmente utilizado 
nesta etapa é de cerca de 10 segundos. 5. Nota: Lavagem excessiva nesta 
etapa pode causar a retirada do cristal violeta das cé lulas Gram-positivas, 
assim como, a pouca descoloração pode resultar em pouca retirada do 
cristal violeta, ocasionando uma tonalidade azulada nas bactérias Gram-
negativas. 6. Cobrir o esfregaço com a solução de safranina ou Fucsina 
básica 0.1% a 0.2%), por, cerca de 30 segundos. 7. Lavar com água 
corrente. 8. Deixar secar ao ar, em temperatura branda (50ºC). 9. Realizar a 
visualização microscópica em objetiva de 10X, 40X e 100X com óleo de 
imersão. 
RELATÓRIO 
Caro aluno (a), Você deverá entregar o Relatório tipo Apresentação Simples 
(Power point). Para isso, faça o download do template, disponibilizado 
junto a este roteiro, e siga as instruções contidas no mesmo 
POR QUE PRECISO APRENDER ISSO ? 
EXAME A FRESCO 
1. Conhecer as técnicas básicas utilizadas na rotina laboratorial. 
 
2. Observar a aplicação dos conhecimentos obtidos na aula prática 
demonstrativa através da execução de atividades teórico-práticas 
pelos profissionais responsáveis. 
3. Observar as técnicas básicas da rotina laboratorial, como o exame a 
 fresco, anali sando a aplicação prática dos conhecimentos 
 adquiridos em aula demonstrativa pelos profissio nais 
responsáveis. A rotina laboratorial executada por profissionais 
aptos e atuante nas análises clínicas é imprescindível para monitorar 
o estado de saúde dos indivíduos que devem manter o hábito 
constante de procurar atendimento médico-laboratorial. Os exames 
básicos promovem uma abordagem ampla a respeito dos agentes 
patológicos que podem estar prejudicando a saúde do paciente 
através da detecção de parasitase bactérias. 
AMBIENTE NA PRÁTICA 
Caro aluno (a) Você realizará esta atividade de forma observacional durante 
uma visita técnica a um labo ratório de análises clínicas devidamente 
equipado, sob a supervisão de um profissional formado em Farmácia ou 
Biomedicina. A visita pode ser realizada na cidade onde você reside ou na 
cidade mais próxima. 
O QUE PRECISO FAZER NESSA ATIVIDADE PRÁTICA 
Os seres vivos (animais e vegetais) não são capazes de sobreviver e 
reproduzir-se inde pendentemente de outro, pois o seu inter-
relacionamento é fundamental para a manutenção da “vida”. No entanto, 
esse relacionamento é variável de acordo com as características d seres, 
sabe-se que ele se fundamenta em dois aspectos básicos: a) obtenção de 
alimento para produção de energia; b) proteção (Neves et al., 2005). Um dos 
exemplos de relação entre seres vivos disponíveis na natureza é o 
parasitismo que seguramente ocorreu quando na evolução um organismo 
menor se sentiu beneficiado, quer pela proteção, quer pela obtenção de 
alimento obtido através de outro ser vivo. O parasitismo é definido como 
uma relação desarmônica entre espécies diferentes, sendo que um 
(parasito) se beneficia retirando os meios para sua sobrevivência, podendo 
prejudicar o outro (hospedeiro). A relação de parasitismo entre dois seres 
origina-se ao acaso, do contato entre eles, passando o hospedeiro a ser 
suporte para o parasito que primitivamente deveria ser livre. Com o 
decorrer do tempo, o hospedeiro passou também a ser fonte de alimento 
para o parasito, que se adaptou a uma nutrição restritiva e exclusiva (Pinto; 
Grisard; Ishida, 2011). O parasitismo tem seu início marcado pela infecção, 
definida como a penetração, o desen volvimento e a multiplicação do 
agente (que pode ser vírus, bactéria, fungo, protozoário ou hel minto) no 
organismo do hospedeiro. Esta infecção comumente leva ao 
desenvolvimento de uma doença infecciosa como o aparecimento de 
 
sinais e sintomas decorrentes da ação patogênica do agente infeccioso. 
Durante seu desenvolvimento os parasitas passam por diversos estágios, 
denominadas formas evolutivas que são as formas que o parasita 
apresenta até apresentar a forma infectante na qual o parasito penetra o 
organismo do hospedeiro causando infecção. Por exemplo, a amebíase, 
apresenta 3 formas evolutivas, sendo elas: trofozoíto, pré-cisto e cisto que 
amadurece no meio ambiente após ser expelido pelas fezes do hospedeiro 
(Pinto; Grisard; Ishida, 2011). O parasito vive e se multiplica em animais, 
vegetais e no próprio homem sendo estes denominados de reservatórios 
do parasito. Todavia, alguns fatores fazem com que uma parasitose possa 
ser assintomática em alguns indivíduos e grave em outros, são estes os 
fatores: Fatores relacionados com o hospedeiro - Carga parasitária; - 
Estado do sistema imunológico; - Estado nutricional; - Idade; - 
Predisposição genética; - Exposição; - Fatores socioeconômicos. 17 
Fatores relacionados com o parasito - Cepa; - Grau de virulência. A 
manifestação de sintomas ocorre após um período de incubação que é o 
tempo que de corre desde a penetração do agente etiológico no 
hospedeiro até o aparecimento dos primeiros sintomas. Outro termo que 
precisa ser elucidado é o período pré-patente, que é o tempo que decorre 
desde a penetração do agente etiológico no organismo do hospedeiro até 
o momento em que é possível detectá-lo por meio de exames (Pinto; 
Grisard; Ishida, 2011). A diferença do ciclo biológico dos parasitos se deve 
a quantidade de hospedeiros envol vidos nesse processo. Caso o parasito 
possua um único hospedeiro no seu ciclo biológico, dizemos que seu ciclo 
é monoxênico. Quando possuem hospedeiro intermediário (um ou mais) e 
hospedeiro definitivo, o ciclo é denominado heteroxênico. No hospedeiro 
intermediário o para sito encontra-se na fase larvária (helmintos) ou tem 
reprodução assexuada (protozoários), e no hospedeiro definitivo o parasito 
tem reprodução sexuada (protozoários e helmintos) e/ou está na fase 
adulta (helmintos). No entanto, há exceções como é o caso do 
Trypanosoma cruzi, que não possui reprodução sexuada, então se 
convencionou que o vetor, hospedeiro invertebrado, é o hospedeiro 
intermediário, enquanto que os hospedeiros vertebrados, incluindo o 
homem são os hospedeiros definitivos (Pinto; Grisard; Ishida, 2011). A 
relação parasito-hospedeiro pode ser harmônica ou desarmônica. Quando 
há benefício mútuo ou ausência de prejuízo mútuo, dizemos trata-se de 
uma relação harmônica. Contudo, a relação desarmônica promove prejuízo 
para algum dos envolvidos, sendo mais comum que o hospedeiro saia 
prejudicado nessa relação. São consideradas relações parasito-
hospedeiro do tipo harmônicas: o comensalismo, o mutualismo e a 
simbiose. E as desarmônicas, a competição, o canibalismo, o predatismo 
e o parasitismo. Para iniciarmos o estudo da parasitologia é impor tante 
definirmos estes conceitos na sequência (Neves et al., 2005). RELAÇÕES 
PARASITO-HOSPEDEIRO DO TIPO HARMÔNICAS 1) COMENSALISMO: é a 
 
associação harmônica entre duas espécies, na qual uma obtém vantagens 
(parasito) sem prejuízos para o outro (o hospedeiro). Exemplo: Entamoeba 
coli vivendo no intestino grosso humano. Essas vantagens podem ser: 
proteção, transporte (meio de locomoção) e nutrição (o hóspede se 
aproveita dos restos alimentares). O comensalismo pode ser dividido em: 
18 Fonte: Adaptação Neves et al. (2005). 2) MUTUALISMO: é quando duas 
espécies se associam para viver, e ambas são beneficia das, sendo uma 
associação obrigatória. 3) SIMBIOSE: é a associação entre seres vivos que 
faz com que esses seres sejam inca pazes de viver isoladamente. Nesse 
tipo de associação, as espécies realizam funções comple mentares, 
indispensáveis a vida de cada uma. RELAÇÕES PARASITO-HOSPEDEIRO 
DO TIPO DESARMÔNICAS 1) COMPETIÇÃO: é uma associação 
desarmônica na qual seres da mesma espécie ou de espécies diferentes 
lutam pelo mesmo abrigo ou alimento. A competição é um importante fator 
de regulação do nível ou número populacional de certas espécies. 2) 
CANIBALISMO: é uma relação desarmônica onde um animal se alimentar 
de outro da mesma espécie ou da mesma família. Esse ato ocorre devido à 
superpopulação e deficiência alimentar e as formas mais ativas ou mais 
fortes devoram as menores ou mais fracas. Exemplos: larvas do mosquito 
Culex bogoti que se alimentam de larvas de outros Culicini e Anophelini. 3) 
PREDATISMO: nesta relação a sobrevivência de uma espécie depende da 
morte de outra espécie (cadeia alimentar). Exemplo: onça alimentando-se 
de pacas. 4) PARASITISMO: é a associação entre seres vivos, na qual existe 
unilateralidade de benefícios, ou seja, o hospedeiro é espoliado pelo 
parasito constantemente, mas danos graves, pois o parasito precisa 
garantir o fornecimento do alimento e abrigo necessário. Por isso, é uma 
associação tende para o equilíbrio, pois a morte do hospedeiro é prejudicial 
para o parasito. 19 Os animais que parasitam os humanos pertencem a 
cinco grandes filos: Protozoa (proto zoários são animais unicelulares), 
Platyhelminthes (helmintos são vermes achatados), Nema toda (vermes 
redondos), Acantocephala (vermes arredondados, com pseudo-
segmentação e apresentando uma probóscida armada de ganchos) e 
Arthropoda (insetos e ácaros em geral). Dentre estes filos vamos abordar 
os protozoários (Filo Protozoa) que são organismos unicelula res, 
eucariontes e heterotróficos (não são capazes de produzir seu próprio 
alimento). Os protozoários apresentam grandes variações morfológicas 
variando conforme sua fase evolutiva e meio a que estejam adaptados. 
Podem ser esféricos, ovais ou mesmos alongados. Alguns são revestidos 
de cílios, outros possuem flagelos, e existem ainda os que não possuem 
nenhuma organela locomotora especializada. Dependendo da sua 
atividade fisiológica, algumas espécies possuem fases bem definidas e são 
elas: - Trofozoíto: é a forma ativa do protozoário, na qual ele se alimenta e 
se reproduz por diferentes processos.- Cisto e oocisto: são formas de 
resistência: o protozoário secreta uma parede resistente (parede cística) 
 
que o protegerá quando estiver em meio impróprio ou em fase de latência 
(os cistos podem ser encontrados em tecidos ou fezes dos hospedeiros; 
os oocistos são encontrados em fezes do hospedeiro e são provenientes 
de reprodução sexuada). Os protozoários estão relacionados a diferentes 
doenças humanas e animais, podendo determinar parasitoses cutâneas 
e/ou mucosas, intestinais, viscerais ou disseminadas. O diag nóstico das 
parasitoses ocasionadas por protozoários fundamenta-se na observação 
microscó pica de agentes patogênicos facilitada pelas técnicas de 
coloração da amostra a ser analisada. Contudo, a visualização direta das 
amostras em preparações a fresco entre lâminas e lamínulas é empregada 
em diversos setores das análises clínicas como, microbiologia e 
parasitologia, pois permite a identificação da composição celular, 
morfologia do agente patogênico (bactérias e/ou parasitas) e avaliação de 
motilidade. Na parasitologia, o exame direto a fresco das fezes é um 
método simples e eficiente que permite observar trofozoítos vivos de 
protozoários, como: Giardia sp, Entamoeba sp, Trichomonas vaginalis. 
Além, de promover ao microscopista uma visão geral do material que será 
analisado. O exame direto a fresco é realizado utilizando apenas salina 
(soro fisiológico - 0,9% de cloreto de sódio). A técnica consiste em gotejar 
a salina (uma gota) no centro de uma lâmina de microscopia e nela 
suspender uma colônia ou uma alçada do material a ser investigado. Cobrir 
com uma lamínula e examinar ao microscópio, com objetiva de 40X ou 100X 
(óleo de imersão) (Ministério Da Saúde, 2000). A solução fisiológica 0,9% 
(salina) é muito útil para o exame a fresco de amos tras clínicas pouco 
espessas. Enquanto, a solução de KOH a 10% é utilizada em muitos casos 
com a finalidade de clarificar a amostra clínica para pesquisa de fungos 
(Martinez; Taddei, 2015) 
O QUE PRECISO OBSERVAR NESSA ATIVIDADE PRÁTICA? 
Procedimento: a) Identificar a lâmina com um lápis de cera; b) Colocar duas 
a três gotas de salina a 0,9% em uma lâmina de vidro. c)Tocar com a ponta 
de um palito em vários pontos das fezes, transferindo uma pequena porção 
para a lâmina de microscopia. d) Espalhar as fezes, fazendo um esfregaço 
e examinar ao microscópio. e)A espessura do esfregaço não deve impedir 
a passagem de luz. f) Coloque uma lamínula sobre a amostra, tomando o 
cuidado para não formar bolhas de ar; g) Percorra todos os campos da 
lâmina como mostra a imagem, iniciando a microscopia na objetiva de 10X 
com aumento progressivo para a objetiva de 40X 
RECURSOS UTILIZADOS 
Materiais de consumo: Descrição Observação ● Luvas de procedimento e 
jaleco. Material a ser fornecido pelo aluno. ● Amostra fecal. ● Lâminas. ● 
Lamínulas. ● Salina (soro fisiológico). ● Microscópico óptico. ● Lápis de 
cera 
 
ATENÇÃO: SAÚDE E SEGURANÇA 
Caros alunos (as), Este projeto integrador visa lhes proporcionar a 
experiência prática de técnicas básicas executadas na rotina laboratorial. 
Todavia, para que sua segurança e integridade física seja mantida é 
indispensável a utilização de equipamentos de proteção individual (EPI’s). 
a) Uso obrigatório de jaleco: longo, branco, de tecido; b) Uso obrigatório 
de luvas de procedimentos; c) Vestuário adequado e obrigatório: uso de 
calça comprida e sapatos fechados, além de cabelos presos. d) As mãos 
devem ser lavadas com sabão ao entrar no laboratório e após a retirada 
das luvas; e) Não levar nada à boca enquanto estiver no laboratório, 
lembre-se que estão manipulando amostras humanas potencialmente 
infectadas f) Evite tocar o rosto com as mãos, e não colocar objetos de uso 
pessoal, como óculos ou livros, sobre a bancada de trabalho; g) Deve-se 
tomar cuidado para deixar toda a área de trabalho limpa e desimpedida. A 
bancada de trabalho deve ser limpada com desinfetante ou uma solução 
de hipoclorito a 50% antes e depois do trabalho; h) Todos os materiais 
contaminados devem ser imediatamente colocados em desinfetante ou 
recipiente adequado para descarte 
RELATÓRIO 
Caro aluno (a), Você deverá entregar o Relatório tipo Apresentação Simples 
(Power point). Para isso, faça o download do template, disponibilizado 
junto a este roteiro, e siga as instruções contidas no mesmo