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M.A.P.A – Biologia Molecular e Forense Nome: Cristina dos Santos Contë R.A: 24124039-5 Disciplina: Biologia Molecular e Forense INSTRUÇÕES PARA REALIZAÇÃO DA ATIVIDADE 1. Todos os campos acima (cabeçalho) deverão ser devidamente preenchidos. 2. O(A) aluno(a) deverá utilizar este modelo padrão para realizar a atividade. 3. Esta atividade deverá ser realizada individualmente. Caso identificada cópia indevida de colegas, as atividades de ambos serão zeradas. Também serão zeradas atividades que contiverem partes de cópias da Internet ou livros sem as devidas referências e citações de forma correta. 4. Para realizar esta atividade, leia atentamente as orientações e atente-se ao comando da questão. Procure argumentar de forma clara e objetiva, de acordo com o conteúdo da disciplina. 5. Neste arquivo resposta, coloque apenas as respostas identificadas de acordo com as questões. 6. Após terminar o seu arquivo resposta, salve o documento em PDF e o nomeie identificando a disciplina correspondente, para evitar que envie o MAPA na disciplina errada. Envie o arquivo resposta na página da atividade MAPA, na região inferior no espaço destinado ao envio das atividades. ARQUIVO ÚNICO (caso tire fotos, todas as páginas de exercício resolvido devem ser colocadas em um único arquivo) FORMATAÇÃO EXIGIDA 1. O documento deverá ser salvo no formato PDF (.pdf). 2. Tamanho da fonte: 12 3. Cor: Automático/Preto. 4. Tipo de letra: Arial. 5. Alinhamento: Justificado. 6. Espaçamento entre linhas de 1.5. 7. Arquivo Único. ATENÇÃO VALOR DA ATIVIDADE: 3.5 Esta atividade deve ser realizada utilizando o formulário abaixo. Apague as informações que estão escritas em vermelho, pois são apenas demonstrações e instruções para te auxiliar, e, posteriormente, preencha todos os campos com suas palavras/imagens. As planilhas de atividade A e B estão disponíveis em material da disciplina em um arquivo de word. Na planilha de atividades A, você tem uma sequência de DNA de 380 pares de bases (pb) que representa sua amostra. Toda 10° base está em negrito, e a base no começo de cada fita está numerada. Você também tem uma sequência pequena que corresponde a uma sonda para o gene da hemocromatose (HFE). *Você usará a sonda para determinar se o gene HFE está presente em sua amostra. Figura 1: Planilha de atividades A Fonte: Adaptado pela autora baseado em KREUZER, H.; MASSEY, A. Engenharia genética e biotecnologia. 2. ed. Porto Alegre: Artmed, 2002, p. 369. Figura 2: Planilha de atividades B Fonte: Adaptado pela autora baseado em KREUZER, H.; MASSEY, A. Engenharia genética e biotecnologia. 2. ed. Porto Alegre: Artmed, 2002, p. 371. Após ler atentamente as informações que constam na atividade, faça o que se pede: 1- EXAMINE a sequência de DNA da amostra (planilha A) para ver se a sonda será hibridizada a ela, e em seguida, RESPONDA se o gene da hemocromatose está presente ou não. Sim, a sonda será hibridizada. Portanto, o gene da hemocromatose está presente nesta sequência de DNA. 2- Se você encontrou um lugar onde a sonda poderia ser hibridizada, IDENTIFIQUE-O (grifar ou circular) na sequência de DNA da planilha de atividade A, e, em seguida, ANOTE a sequência. CCTACGATGGTATCG 3- SIMULE a atividade de digestão da sua amostra com a enzima de restrição SmaI (essa enzima corta a sequência de DNA 5’ CCCGGG 3’ entre o C e o G, no meio da sequência) e APONTE com uma seta, todos os sítios de clivagem encontrados (planilha A). 4- INDIQUE quantos fragmentos de DNA resultaram após a clivagem e os seus respectivos tamanhos. Após a clivagem resultaram em 5 fragmentos. O primeiro fragmento começa na posição 1 e vai até a linha na posição 92, resultando em 111pb; o segundo fragmento começa logo em seguida, após a clivagem, ainda na linha da posição 92 e vai até a posição 181, resultando em 82pb; o terceiro fragmento começa na linha da posição 181 e vai até pouco antes da metade da sequência da posição 181, com 47pb; o quarto fragmento começa após a metade da sequência na linha da posição 181 e termina na linha de posição 271, com 64pb; o quinto fragmento começa antes da metade da sequência na linha de posição 271 e vai até o final de toda a sequência, com 75pb. 5 - Considerando a eletroforese de seus fragmentos, DESENHE o arranjo desses fragmentos de acordo com o seu tamanho no gel esquematizado na planilha B. 6 - No gel, APONTE com um asterisco a banda que hibridizaria à sonda da planilha A. 7. REFERÊNCIAS LUCENA, Ana Luiza Monezi. Biologia Molecular e Forense. Núcleo de Educação à Distância. Centro Universitário de Maringá, 2021.