RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA - extração do DNA da banana

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EXTRAÇÃO DE DNA DA BANANA
Natália Cristina Ramos, Taciana de Souza Ribeiro
Centro de Educação Profissional Renato Ramos da Silva
3° módulo - curso técnico em Análises Químicas
Professor Webyster - Bioquímica
Lages, 2023.
1. INTRODUÇÃO
No dia 21 de junho, realizou-se
aula prática de Bioquímica, extraindo-se o
DNA da banana. Com a experiência,
aborda-se o conteúdo de ácidos nucleicos,
parte do estudo da Bioquímica.
As células vivas são capazes de
preservar e de transferir a informação
genética para as novas gerações por meio
da complementaridade estrutural das
moléculas de ácidos nucléicos: o DNA e o
RNA. A unidade básica tanto do DNA
como do RNA são polímeros de
subunidades monoméricas, denominadas
nucleotídeos, que estão arranjados em
sequência precisa. Em organismos
eucarióticos, o DNA é encontrado no
núcleo das células e também nas
mitocôndrias e nos cloroplastos. As
moléculas de DNA e de RNA consistem de
apenas quatro tipos de nucleotídeos. Os
nucleotídeos são compostos precursores da
síntese dos ácidos nucléicos que contém
um grupo fosfato, uma pentose (molécula
de açúcar com cinco carbonos) e uma base
nitrogenada (OLIVEIRA, et al., 2007).
Ainda segundo OLIVEIRA, et al.
(2007), a extração de DNA inclui
basicamente dois procedimentos
principais: a lise das células presentes na
amostra e a purificação do DNA. A
extração e a purificação de ácidos
nucléicos a partir de diversas amostras
experimentais (bactérias, fungos, tecidos
vegetais e tecidos animais) é uma etapa
fundamental para se obter alta eficiência
de amplificação nos protocolos que usam a
reação em cadeia da polimerase (PCR).
Essa técnica tem sido amplamente
empregada em estudos moleculares, em
razão da facilidade relativa com que é
possível amplificar in vitro regiões
específicas do genoma de qualquer
organismo. A PCR possibilita a
amplificação de seqüências de DNA que
estejam presentes em misturas complexas e
permite estudos de natureza variada, tais
como desenvolvimento de métodos de
diagnóstico altamente sensíveis e
específicos, obtenção de grandes
quantidades de DNA para seqüenciamento
e análises sobre a diversidade genética de
populações.
Cada etapa do experimento
realizado possui importância para
visualização do DNA: ao amassar o
substrato, facilita-se a absorção da solução
(água, detergente e sal), fazendo que haja
interação com as células do meio. Com a
adição de água morna ou quente, as
moléculas se agitam. Já o detergente é o
responsável pelo rompimento da bicamada
lipídica que compõe a membrana
plasmática, sendo assim, com a ação deste,
o desmanche da célula se evidencia,
removendo suas proteínas e tornando-se
solúvel. O sal realiza um processo de
osmose, extraindo o DNA do interior da
célula para o meio. Sendo o DNA
insolúvel em álcool, acontece uma
precipitação (GONÇALVES, 2020).
2. MATERIAIS E MÉTODOS
2.1. MATERIAIS UTILIZADOS
Vidrarias Equipamen
tos
Reagentes
Proveta Papel filtro Água
destilada
Béquer Banho
maria
Banana
Bastão de
vidro
Peneira NaCl
Erlenmeyer Detergente
Funil Álcool
Quadro 1: materiais utilizados.
2.2 PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
Cortou-se e amassou meia banana,
utilizando o bastão de vidro. Em um
béquer contendo 100ml de água,
adicionou-se 60 mL de detergente e 5g de
NaCl. Então, mexeu-se até a total
dissolução
Adicionou-se a banana amassada a
essa solução recém preparada, e a colocou
em banho-maria por 15 minutos. Feito isto,
resfriou-se a solução rapidamente,
colocando o béquer no banho de gelo
durante aproximadamente 5 minutos.
Filtrou-se uma parte da solução
com papel filtro, mas verificou-se que o
filtrado era muito denso para o papel filtro.
Por isso, ele foi substituído por uma
peneira.
Adicionou-se ao filtrado 100 mL de
álcool gelado, deixando-o escorrer
vagarosamente pela borda do erlenmeyer.
Observou-se o resultado. Ainda,
com o bastão de vidro limpo, movimentos
circulares foram feitos, misturando as
fases. Observou-se o resultado final.
Figura 1: filtração da solução banana, NaCl,
detergente e água com a peneira. Fonte: as autoras.
Figura 2: resultado após a adição do álcool gelado.
Fonte: as autoras.
Figura 3: pectina, proteína presente no substrato
utilizado, aderida ao bastão de vidro. Fonte: as
autoras.
3. RESULTADOS E DISCUSSÕES
A experiência permitiu a visualização
do DNA, através da utilização de agentes
químicos e físicos.
Por meio da lise (quebra) da membrana,
acréscimo de sal e isolamento do DNA, foi
possível perceber a existência de uma
“massa viscosa” no meio da solução (entre
o álcool e a água), massa viscosa, esta, que
é chamada de DNA.
Cada um dos agentes adicionados
ao meio colaborou para que se extraísse o
DNA. O detergente é responsável pelo
rompimento da membrana plasmática das
células, onde o DNA se encontra; o sal
realiza uma osmose entre o DNA das
células e o meio; e, o álcool, precipita a
substância de interesse, visto que são
insolúveis entre si.
Além da observação do ácido
desoxirribonucleico, também se observa a
pectina, proteína semelhante ao ácido
nucléico, presente no substrato. Ela se
forma na parte de cima da solução, e não
como uma nuvem esbranquiçada, mas
como uma fase mais clara que as demais,
com a presença de bolhas. Ao ser retirada
com o bastão de vidro, constata-se sua
textura viscosa.
Sabe-se que o material genético em
questão se apresenta na forma de dupla
hélice, que só pode ser observada com o
uso de microscópio eletrônico, devido ao
tamanho extremamente reduzido. No
experimento, consegue-se distinguir um
emaranhado, uma “nuvem esbranquiçada”,
de moléculas de DNA.
4. QUESTIONÁRIO
1. Por que o material precisa ser
macerado para isolar o DNA?
Ao amassar o material, facilita-se a
absorção da solução (água, detergente e
sal), fazendo que haja uma melhor
interação com as células do meio.
2. Qual o papel do detergente no
processo de extração do DNA?
O detergente realiza a quebra de lipídio, ou
seja, é o responsável do rompimento da
bicamada lipídica que compõe a membrana
plasmática, sendo assim, com a ação deste,
o desmanche da célula se evidencia,
removendo suas proteínas e tornando-se
solúvel.
3. De que é composta a molécula de
DNA?
As moléculas de DNA são compostas por
quatro tipos de nucleotídeos. Os
nucleotídeos são compostos precursores da
síntese dos ácidos nucléicos que contém
um grupo fosfato, uma pentose (molécula
de açúcar com cinco carbonos) e uma base
nitrogenada (citosina, adenina, timina e
guanina).
4. Visto que o DNA não é solúvel em
álcool, o que ocorre com suas moléculas
quando colocadas neste meio?
O DNA, insolúvel em álcool, formará um
aglomerado que precipita junto com outras
moléculas, assim, é possível identificá-lo
no meio, como um precipitado branco, em
forma de “nuvem”, localizada na parte
superior do erlenmeyer, visto que é menos
denso que o álcool.
5. CONSIDERAÇÕES FINAIS
A observação do DNA decorreu como
previsto e sem qualquer problema, tendo
assim, concretizado o objetivo da prática
com sucesso. O DNA é uma molécula
muito importante, visto que ela contém a
informação genética dos seres vivos, e é
constituído por nucleotídeos que contém
um grupo fosfato, uma base nitrogenada
(citosina, guanina, timina e adenina) e uma
pentose.
Utilizou-se uma técnica
relativamente simples para se extrair e
observar tal material essencial à vida.
Conclui-se que todos os procedimentos
realizados na extração do DNA são de
suma importância para que ele possa ser
identificado.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Aula prática de Bioquímica. Professor:
Webyster. Realizada no dia 21 de junho de
2023 no Laboratório Químico na
Instituição CEDUP Renato Ramos da
Silva.
GONÇALVES, A.; LEMOS, A. C.;
FURLAN, C. L.; DEL VALLE
GARNERO, A. G. Relato de experiência:
monitoria da disciplina de biologia
molecular nos cursos de ciências
biológicas. Anais do Salão Internacional
de Ensino, Pesquisa e Extensão, v. 11, n.
1, 14 fev. 2020.
OLIVEIRA,M. C. S., et. al. Fundamentos
teórico-práticos e protocolos de extração
e de amplificação de DNA por meio de
reação em cadeia da polimerase.
EMBRAPA Pecuária Sudeste, São Carlos,
São Paulo, 2007. Disponível em:
https://www.alice.cnptia.embrapa.br/bitstre
am/doc/48295/1/LivroProtMolecular.pdf.