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13/05/2023, 19:10 Avaliação Final (Discursiva) - Individual about:blank 1/2 Prova Impressa GABARITO | Avaliação Final (Discursiva) - Individual (Cod.:823735) Peso da Avaliação 4,00 Prova 60618362 Qtd. de Questões 2 Nota 9,50 O DNA iremos analisar, então a dupla fita nós vamos separar. Nossos amigos vão indicar o lugar, onde a nova fita a super enzima irá sintetizar. A frase apresentada descreve a técnica de PCR. Disserte sobre quais estágios da técnica estão sendo mencionados, e quais os componentes utilizados em cada um deles. Resposta esperada O primeiro estágio mencionado seria a desnaturação, que ocorre por meio do aumento da temperatura a 95 ºC. Em seguida, ocorre o anelamento a 50-65 ºC, em que os primers específicos indicam o local onde, no estágio de extensão (72 ºC), a enzima Taq DNA polimerase irá sintetizar uma nova fita de DNA, com o auxílio dos DNTPs (desoxinucleotídeos). Para que a Taq DNA polimerase possa ser ativada, são adicionados como cofatores enzimáticos os íons de magnésio. Minha resposta O texto em relatado não se refere exatamente a técnica PRC, e sim a um processo genérico de replicação do DNA. Mas podemos identificar algumas das seguintes etapas de PCR. Para ocorrer a separação da das fitas de DNA é necessário aquecer o DNA a uma temperada elevada, onde ocorre o rompimento das ligações de hidrogênio entre as bases nitrogenadas e assim ocorre a separação das fitas dupla hélice. Será utilizado os primers que são pequenas sequencias de DNA sintéticas que são complementares a região alvo e se ligam a cada uma das fitas de DNA, são os Primers que indicaram a onde a enzima de PCR deve começar a replicar o DNA. A enzima utilizada em PCR é uma DNA polimerase termoestável, que é capaz de reduzir a nova fita de DNA da fita matriz. A enzima é acrescentada junto com os primers e uma mistura contendo os quatro nucleotídeos (A, C, G e T), que são os blocos de construção do DNA. A enzima inicia a sintetização de uma nova fita a partir do primer e assim continua ao longo do molde, juntando nucleotídeos complementares durante seu avanço. Isso será repetido muitas vezes, aumentando extremamente a região alvo. A amplificação será construída em ciclos, sendo em três etapas cada um: desnaturação, onde o DNA é aquecido para separar as fitas; annealing, onde os primers vão se ligam às fitas simples; e extensão, onde a enzima de PCR sintetiza uma nova fita modelo. Cada ciclo dobra a quantidade de DNA alvo, resultando em um aumento excepcional. A técnica de PCR também necessita de uma fonte de DNA matriz, tampão para manter o pH ótimo para a enzima de PCR e sais para fornecer os íons necessários para a reação. Este processo é realizado em um termociclador, que é um equipamento que regula a temperatura em cada etapa do ciclo de amplificação. Retorno da correção Parabéns, acadêmico(a)! Sua resposta se aproximou dos objetivos da questão, mas poderia apenas ter apresentado mais argumentos acerca dos conteúdos disponibilizados nos materiais didáticos e estudos. Confira no quadro "Resposta esperada" a sugestão de resposta para esta questão. [Laboratório Virtual - Reação em Cadeia da Polimerase] A técnica de PCR é uma das mais utilizadas no meio laboratorial molecular. Ela permite a amplificação do material genético, formando milhões de cópias de DNA, após um número específico de ciclos, que envolvem a desnaturação, anelamento e extensão. De acordo com esses estágios da PCR, disserte sobre a importância das temperaturas aplicadas em cada um deles. Resposta esperada No estágio de desnaturação, é utilizado uma temperatura de 94 ºC. Ela permite que a dupla fita do DNA se separe (quebra das ligações de hidrogênio). VOLTAR A+ Alterar modo de visualização 1 2 NÃO ESQUEÇA DE CURTIRGenética Humana e Médica 13/05/2023, 19:10 Avaliação Final (Discursiva) - Individual about:blank 2/2 O estágio de anelamento ocorre na temperatura de 59 ºC. Essa temperatura permite que os primers se liguem ao local complementar na dupla fita desnaturada. Já a extensão ocorre a 72 ºC, pois é uma temperatura ótima de trabalho da Taq DNA polimerase, onde a enzima consegue exercer a sua função de adicionar os nucleotídeos na dupla fita. Minha resposta A técnica de PCR contém uma série de ciclos de temperatura que autorizam a amplificação do material genético de interesse. Os ciclos são formados por três etapas principais: desnaturação, anelamento e extensão, cada uma possui uma temperatura específica que é importante para o sucesso da reação. Primeira: Na desnaturação, o DNA dupla hélice é aquecido entre 92°C e 98°C para separar as duas fitas de DNA. Nesta etapa as fitas de DNA são expostas para permitir a ligação dos primers na próxima etapa. A desnaturação sempre acontece em temperatura elevada, para romper as ligações de hidrogênio entre as bases nitrogenadas do DNA. Segunda: No anelamento, o aquecimento ocorre entre 50°C e 65°C. Durante essa etapa, os primers são acrescentados e ligados aos segmentos de DNA incorporados. É no anelamento que os primers se ligam especificamente às sequências de interesse e iniciam assim a replicação do DNA. Terceira: A extensão ocorre entre 72°C e 78°C. A enzima do DNA polimerase sintetiza uma nova cadeia de DNA complementar, usando os primers como ponto de partida. A extensão é importante permite que o DNA seja ampliado, criando milhões de cópias a partir de uma única sequência de DNA. Assim todas as etapas da PCR necessitam de uma determinada temperatura para realizar a amplificação do material genético. A temperatura elevada da desnaturação separa as duas fitas de DNA, o anelamento faz a ligação dos primers nas sequências de interesse, e a temperatura da extensão concede a síntese de novas fitas de DNA. A fiscalização da temperatura em cada uma das etapas é fundamental para o sucesso da PCR e para a conquista de resultados precisos e confiáveis. Retorno da correção Parabéns, acadêmico(a)! Sua resposta atingiu os objetivos da questão e você atingiu o esperado, demonstrando a competência da análise e síntese do assunto abordado, apresentando excelentes argumentos próprios, com base nos materiais disponibilizados. Confira no quadro "Resposta esperada" a sugestão de resposta para esta questão. Imprimir NÃO ESQUEÇA DE CURTIRGenética Humana e Médica