Apresentação - Endpoint e humane endpoint 03-12-2014

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PCS/UEM
PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS DA SAÚDE
UNIVERSIDADE ESTADUAL 
DE MARINGÁ
 
 
DISCIPLINA – Modelos animais para experimentação
Profs.: Max Jean Ornelas Toledo e Silvana Marques de Araújo
Doutoranda: Gislaine Janaina Falkowski Temporini
Data: 03/12/2014
ENDPOINT
Humane Endpoint
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OECD (2000:P.10) – “O primeiro indicador numa experiência com animais de dor, aflição, sofrimento ou morte próxima”.
 Hendriken et al., 2011: p.344) – “Uma estratégia de refinamento projetado para minimizar a dor, sofrimento ou angústia vivida por animais durante um experimento" 
Humane Endpoint
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Janeiro de 2013 – Legalmente foi reconhecido pela primeira vez na União Européia, implantando a Diretriz 2010/63/EU (proteção dos animais utilizados para fins científicos no território nacional).
Refinamento das pesquisas
Projetar endpoints
Diferentes humane endpoints experimentais
Proposto o conceito: imprevisível e justificável
Humane Endpoint
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Hendriksen et al. (2011:. 345 p): aplicações
	1. Quando os objetivos científicos foram atingidos e não há nenhuma razão para continuar a investigação.
Sofrimento do animal evitável (estabelece-se o endpoint)
Humane Endpoint
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	2. Quando ocorre o sofrimento inesperado. 
Condições inesperados - tumor espontâneo, deterioração geral da saúde / qualidade de vida. 
Moribundo, caquéticos, sem responder a estímulos, ou incapaz de obter comida ou água devem ser sacrificados. 
Humane Endpoint
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	3. Quando o sofrimento foi admitido no início da experiência, mas tornou-se mais grave do que o previsto.
Endpoint justificável (quando detectado a dor/sofrimento, como não é ético a justificação da dor/sofrimento, o endpoint humanitário torna-se justificável (podendo o experimento chegar ao fim sem os objetivos alcançados)
	4. Quando a dor e / ou sofrimento são uma parte inerente da experiência e são esperados no início.
Humane Endpoint
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Endpoints científicos podem ser detectados através de dados coletados pelos cientistas da pesquisa
Endpoints justificáveis e endpoints imprevisíveis exigirá a detecção de sofrimento pela equipe de cuidados de animais trabalhando com os cientistas
Humane Endpoint
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Apresentar diretrizes para a seleção de um endpoint, com o propósito de reduzir a dor e / ou sofrimento animal, enquanto ainda satisfaz os requisitos de design experimental para avaliação objetiva quando os animais são utilizados na investigação biomédica, ensino e testes.
Refinamento na experimentação animal.
Endpoint
OBJETIVO
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Procedimento recomendado para selecionar um endpoint apropriado
Animais moribundos (perto da morte) – coma, sem respostas a estímulos, dispnéia, hipotermia, prostação etc.
Definir um endpoint anterior a este (antes de se tornar moribundo)
Endpoint
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Considerações p/endpoint apropriado
Desvios do “normal” → alterações com graus de desconforto, dor e / ou sofrimento. 
Endpoint
Observações apropriadas: comportamento, fisiologia (sem o com estímulos externos)
Atribuir valores às observações (Zero – normal ou leve / 3 – grave alterações do normal
Observações são os melhores indicadores de dor e / ou sofrimento nas circunstâncias específicas da pesquisa;
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Observações são os preditores mais significativos da deterioração na condição do animal 
	→ identificar o primeiro ponto os sinais aparecem;
Endpoint
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Observações apropriadas:
Morton & Griffiths (1985) lançou as bases para o desenvolvimento de um conjunto de observações para avaliar a dor, sofrimento e desconforto em animais de laboratório, com base na avaliação de cinco aspectos da condição de um animal
Endpoint
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 Mudanças no peso corporal (e as alterações daí resultantes ingestão de alimentos e água);
 Aspecto físico externo;
 Sinais clínicos mensuráveis (por exemplo, alterações do ritmo cardíaco, freqüência respiratória);
 Mudanças no comportamento não-provocada;
 Resposta comportamental a estímulos externos.
Endpoint
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Diarréia debilitante
Desidratação / reduzido turgor da pele
Edema
Alargamento abdominal considerável ou ascite
Dermatite progressiva
Pêlos arrepiados / aparência desleixada (eriçado)
Postura arqueada (prostação)
Letargia ou decúbito persistente
Tosse, dificuldade para respirar, corrimento nasal
Endpoint
Icterícia, cianose e / ou palidez / anemia
Sinais neurológicos
Sangramento de qualquer orifício
Trauma auto-induzido
Qualquer condição que interfere nas atividades diárias (por exemplo, comer ou beber, de locomoção, ou eliminação)
Hipertermia ou hipotermia excessiva ou prolongada
Condições clínicas de perda da condição corporal sem perda de peso:
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 Indicadores hormonais 
catecolaminas, corticosteróides, prolactina, TNF, IL (ainda não existe um consenso).
Amostragem do sangue é parte do protocolo da pesquisa
Considerar p/ indicadores de stress. Poderia fornecer uma correlação útil para qualquer mudança de comportamento observado.
Endpoint
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Temperatura, pulso e respiração: não são facilmente realizado em roedores 
Importância de avaliar o comportamento desses animais:qualquer desvios do comportamento normal pode ser sinais de dor ou desconforto.
Endpoint
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Sinais sugestivos de dor aguda/crônica: todos envolvidos
Observação minuciosa: mudanças de aparência e comportamento. 
Endpoint
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Além de sinais gerais de dor e / ou sofrimento, há sinais específicos e sintomas relacionados com a doença a ser estudado. 
Endpoint
Scoring de observações fisiológicas significativas para selecionar um endpoint refinado
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Experimento artrite 
Comportamento do aumento de coçar – significativo, relacionado com o desenvolvimento de artrite, indicando dor crônica. 
Endpoint
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	A utilização de experiências preliminares ou piloto pode ser muito útil na determinação do endpoints .
Endpoint
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	No início de reações adversas, um mínimo de dois ou três observações devem ser feitas diariamente. A frequência das observações deve aumentar de acordo com o potencial para aumentar a dor e / ou sofrimento (2x/dia ou mais, horas p/ toxicidade).
Endpoint
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Pessoas envolvidas – garantir que todas tenham formação adequada às suas responsabilidades para a observação dos animais.
Treinamento documentado
Endpoint
Pesquisador – Diretor do estudo
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	A documentação completa de todas as observações e as medidas verificadas devem ser retidas e estar disponível para o Comitê de cuidados aos animais ACC e acompanhado pela presença de veterinário.
Endpoint
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Critérios para a seleção de endpoints apropriados em áreas específicas da pesquisa biomédica e testes
Endpoint
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	Estudo da dor
Mínima dor necessária;
Duração da dor curta (qto possível) e nº animais reduzido;
Limiar da dor ao invés de níveis supralimiar;
Modelos de dor aguda, dor não é finalizada (encerrada o mais rapidamente possível, p. ex. teste da formalina)
Testes que não são de prevenção são fortemente desencorajado;
Dor crônica - analgesia em todos os momentos. Exceções, restrito em tempos justificados ao CEAE. 
Endpoint
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	Estudo de Doenças Infecciosas
Dor, sofrimento e desconforto resultará do agente infeccioso, falha da terapia ou prevenção, ou toxicidade dos materiais ensaiados.
Endpoint - as medidas para aliviar a dor não são utilizados porque essas medidas podem comprometer a integridade experimental do estudo (Ex.: sobrevida). 
Deve-se chegar em um consenso em que o endpoint não permita a perda de dados.
Endpoint
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Endpoint
	Estudo de Doenças Infecciosas – Determinação:
Exemplo: Infecção pelo cepa Y de Trypanosoma cruzi
Horário pré-fixado, quantidade de dias, frequência, presença do veterinário.
Monitoração em finais de semanas e feriados para não passar nenhum endpoint despercebido (dedicação da equipe envolvida – documentado registros e treinamentos)
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Endpoint
	Estudo de Doenças Infecciosas – Determinação:
Temperatura, (hipotermia), peso, água, ração, excretas, movimento exploratório de levantar(diminuição), pelo (eriçado),características das fezes (diarréia), prostação, olhos (fechamento)
Opacidade dos olhos (quando luz controlada adequadamente – amarela).
Determinar o ponto (o quanto) em que estes sinais ocorrem para evitar a dor/sofrimento do animal devido a progressão da infecção que mata 100% dos animais.
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Endpoint
	Estudo de Doenças Infecciosas – Determinação:
Características das espécies são diferentes. Camundongos Swiss X Balb/C X C57Bl/6 e a idade do animal também interfere nos endpoints.
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Endpoint
	Cuidado a ser tomado antes dos dados serem computados
Falsa melhora e / ou piora do grupo
Dia antecedente da morte do camundongo – ele come menos, ingere menos água, temperatura menor
Após a morte do animal debilitado – cálculo da média do grupo - ↑ da curva do parâmetro analisado
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	peso dos camundongos									
		7º	8º	9º	10º	11º	15º	16º	17º	18º
										
	camundongo 01	53,2	50,3	48,8	49,4	49,1	52,5	51,30	54,8	54
	camundongo 02	46,6	45,4	44,8	44,9	43,4	41,7	41,6	42,9	42,2
	camundongo 03	57,2	54,2	54,5	55,5	54,9	56,5	57,7	59,2	57,9
	camundongo 04	48,3	47	46,8	46,6	46,6	48,3	45,7	46,6	45,7
	camundongo 05	59,4	56,7	56,3	57	56,8	59,7	58,8	56,6	53,9
										
	camundongo 05	44,2	43,1	44,5	44,3	46	42,2	40,7	40,4	morreu
	camundongo 08	43	41,5	41,6	41,2	41,5	34,3	morreu	morreu	morreu
	camundongo 09	41	38,7	38,5	38,8	39,1	33,6	30,7	morreu	morreu
	camundongo 12	43,8	42,1	43,1	42,4	42,5	44,3	45,4	44,2	40,4
	camundongo 14	41,7	41	41,6	41,9	43,4	38,5	37,4	36,7	36,3
	 									
	camundongo 02	48,2	48,8	49,6	49,7	50,1	47,2	48,2	47,1	morreu
	camundongo 07	41,7	41,1	40,1	41,4	43,1	42,3	42,8	42,6	41,2
	camundongo 09	44,4	43,4	45,1	44,8	45,7	46,2	39,6	morreu	morreu
	camundongo 11	39,4	39,4	39,6	40,3	41,8	38,3	36,8	morreu	morreu
	camundongo 14	36,1	35,3	36,1	35,8	37,4	morreu	morreu	morreu	morreu
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Ração (Consumo médio /aniaml) (g)
BIOT-8	7o.	8o.	9o.	10o.	11o.	15o	16o.	17o.	18o.	6.7200000000000006	5.64	5.34	5.6	3.66	2.66	2.8	2	3.65	Controle Infectado-8	7o.	8o.	9o.	10o.	11o.	15o	16o.	17o.	18o.	6.8400000000000007	5.98	5.2200000000000006	5.94	3.46	3.5	5.95	4.45	10.9	Controle Normal-8	7o.	8o.	9o.	10o.	11o.	15o	16o.	17o.	18o.	2.84	4.0999999999999996	3.8200000000000003	6	6.42	5.34	6.8400000000000007	6.74	9.42	Dia da infecção
Consumo (g)
	Estudo de Doenças Infecciosas
A temperatura é um preditor de mortalidade;
 Dispositivos de telemetria com a temperatura e sensores de atividade implantada intra-abdominal.
 Superfície do corpo - Termômetro infravermelho (temp. biot. controlada – camundongos endotérmicos)
Endpoint
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Métodos de imagem como auxílio ao endpoint humanitário: 
Pósitron, 
Tomografia, 
Ressonância Magnética, 
Ultra-som (Ex.: Doença de Chagas – Doppler – prevenção da cardiomegalia), 
Biomarcadores (biomarcador TGF-beta é capaz de prever a progressão da doença de Chagas entre os cardiopatas).
Impede a progressão da doença e mortalidade (sem afetar os dados).
Endpoint
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 Experimentos em camundongos comoTB
Termômetro infravermelho (estresse), transmissores telemétricos, amostra de sangue, Biomarcadores: progresso da doença, que pode substituir o tempo de sobrevivência como uma medida de severidade da doença. 
Pesquisas (2009) : a maioria dos endpoints consistia de apenas substituir a morte espontânea com a eutanásia de moribundos, deixando de ter um impacto significativo no bem estar do animal.
Eutanásia perto da morte são Endpoind realmente humanitário?
Refinamento
Endpoint
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Objetivo: chegar em um endpoint universal que permita aos pesquisadores acompanharem a progressão da doença e identificar a eficácia de intervenções terapêuticas e ainda atender padrões éticos adequados. 
Camundongos transgênicos (mutação G93A do gene SOD1) que expressam o fenótipo ALS 
162 camundongos (100 fêmeas e 62 machos) – idade 35-40 dias
Dados: 4 intervenções nutricionais
Endpoint
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Os dados foram analisados para verificar se existem diferenças entre o critérios de endpoint: 
CS 4 (CS = escore clínicos) → que é caracterizada por paralisia funcional de ambos membros posteriores; 
CS 4+ → que inclui CS 4, juntamente com a perda de peso corporal precoce, deterioração da condição corporal ou reflexo de endireitamento (righting reflex);
CS5 → inclui o CS 4, além do reflexo de endireitamento superior a 20 segundos.
Endpoint
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	Resultados:
CS 4 → média de 4 dias antes do CS 5
Adotar CS 4 como um endpoint - dados suficientes para a progressão da doença "o começo do fim na progressão da doença." 
Satisfaze os padrões de comitês de ética (encurtando o tempo de exposição à doença).
 
CS 5 só deve ser utilizada em estudos quando a perda de músculo severa e os déficits de propriocepção são necessários para a medida a eficácia de uma determinada intervenção.
Endpoint
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	A padronização de critérios humanitários para endpoint irá agilizar a descoberta científica, a redução da variabilidade do teste entre laboratórios em todo o mundo.
Endpoint
CONCLUSÃO GERAL
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OBRIGADA!
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