AULA PRÁTICA 02 - DETERMINAÇÃO GLICOSE

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ALEXANDRA ANDRADE GOUVEIA 
CAROLINY REZENDE TRANI 
DANIELLE CRISTINA GOMES 
 
 
 
 
 
 
 
AULA PRÁTICA 02 
DETERMINAÇÃO QUANTITATIVA DE GLICOSE NO SORO ATRAVÉS DA METODOLOGIA 
COLORIMÉTRICA 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Governador Valadares 
2021 
1. INTRODUÇÃO 
A glicose é considerada um açúcar simples facilmente sugada pelas células e utilizada como principal fonte 
de energia do corpo humano. Os carboidratos ingeridos são quebrados até a obtenção de glicose sendo 
absorvidos no intestino delgado e seguidos para a corrente sanguínea. A maior parte das células necessitam 
de glicose para a produção de energia, seu uso depende da disponibilidade de insulina que age como um 
controlador de trânsito, transportando a glicose para dentro das células e encaminhando o excesso a ser 
armazenado como glicogênio, para uso a curto prazo, como triglicerídeos nas células gordurosas. A glicose e 
a insulina são fundamentais para a vida humana e devem estar em equilíbrio. 
Os níveis sanguíneos de glicose aumentam após uma refeição, onde é liberada a insulina para corrigi-los em 
quantidade correspondente ao volume e ao conteúdo da refeição. Por isso sua dose no sangue deve ser 
controlada para que não reduza ou exceda a quantidade adequada para o funcionamento bioquímico e 
fisiológico. Quando os níveis abaixam entre as refeições ou após grandes esforços, é secretado glucagon um 
hormônio pancreático, que possui a função de estimular a transformação do glicogênio hepático em glicose, 
corrigindo os níveis sanguíneos. Se esses mecanismos de controle estiverem agindo de modo normal, a 
quantidade de glicose no sangue permanece bastante estável. Se houver a quebra do equilíbrio os níveis de 
glicose se elevam e o corpo procura restaurar o equilíbrio aumentando a liberação de insulina ou excretando 
glicose na urina. A hiperglicemia ou hipoglicemia aguda podem comprometer a saúde, causando 
insuficiência de órgãos, lesão cerebral, coma e, em alguns extremos, levam a morte. 
Um dos métodos para se quantificar a glicemia no sangue é a partir da absorbância, considerada uma reação 
de ponto final apresenta a finalidade de determinar a concentração de glicose nas amostras analisadas em 
conjunto com o teste enzimático colorimétrico que possui o auxílio da enzima glicose oxidase reagindo com 
a amostra a tornando colorida. Sendo assim, quanto mais intensa a cor, maior a concentração de glicose, 
quanto menos intensa, menor a concentração. Essa técnica é executada através do espectrofotômetro com o 
intuito de observar a relação entre a absorbância da amostra e a do padrão. O equipamento utilizado possui a 
capacidade de medir o comprimento de onda da cor da amostra analisada, para que assim seja capaz notar a 
quantidade de glicose na amostra. 
 
2. MATERIAIS, REAGENTES E EQUIPAMENTOS 
 
MATERIAIS 
• 2 Pipetas calibradas em 1000 μL e 100 μL; 
• Ponteiras; 
• Descarte de ponteiras; 
• Béquer; 
• Tubos de ensaio; 
• Eppendorf. 
REAGENTES 
• Kit (Padrão e Reagente de Cor) 
 
EQUIPAMENTOS 
• Espectrofotômetro; 
• Banho Maria; 
• Vórtex. 
 
3. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL 
Foi realizada a divisão entre três alunos para o experimento, onde os mesmos identificaram os tubos de 
ensaio com as iniciais de “Branco”, “Amostra “e “Padrão”. Nos tubos de ensaio colocou-se 1 mL de 
reagente de cor. 
Para o tubo identificado como ‘Padrão” foi adicionado 10 μL da solução de glicose com concentração 
determinada no kit o qual será estudado. No tubo identificado como “Amostra”, colocou-se 10 μL da 
amostra inserida no eppendorf. Após as quantidades das amostras adicionadas em seus respectivos tubos, 
incubou-se em banho maria no vórtex por cerca de 15 mim para homogeneização. 
Realizou- se a leitura fotométrica das soluções padrão e amostra, fazendo com que o aparelho fosse zerado 
com a solução em branco para a devida calibração, onde faz-se necessário eliminar a interferência de 
reagentes nos resultados adquiridos. 
 
4. RESULTADOS 
Após a realização dos cálculos, misturas e leitura fotométrica obteve-se os seguintes resultados: 
Absorbância do branco = 0,00 
Absorbância do padrão = 0,063 
Absorbância da amostra = 0,084 
 
Padrão: 100 mg/dL Glicose (mg/dL) = 0,084 ------ x 
Absorbância padrão: 0,063 0,063 ------- 100 mg/dL 
Absorbância amostra: 0,084 Glicose = 133,33 mg/ dL 
 
 
5. DISCUSSÃO 
O método de determinação da glicose requer cuidados essenciais durante as etapas, para que haja a garantia 
de uma análise quantitativa da amostra a ser estudada. A referência do teste para a normalidade seria de 65 a 
99 mg/dL para crianças e adultos, entretanto, o valor encontrado está acima da normalidade. Contudo, 
sugerimos que seria um caso de hiperglicemia, na qual os níveis de açúcares no sangue estão muito 
elevados, com isso, a presença de grande quantidade de açucares no sangue faz com que o paciente tenha 
alguns sintomas como sede excessiva, vontade frequente de urinar, sonolência e cansaço. A principal causa 
de hiperglicemia está relacionada a uma condição em que o pâncreas para de produzir ou não produz 
suficientemente, o hormônio insulina, que é responsável por regular os níveis de açúcares no sangue. 
 
6. CONCLUSÃO 
Portanto, conclui-se que a dosagem de glicose é amplamente utilizada na bioquímica clínica, devido a seu 
alto nível de confiabilidade, sendo realizada a partir da reação enzima- amostra, e posteriormente a leitura 
dessa amostra pelo espectrofotômetro, o qual detecta a partir da cor (fornecida pela reação que a enzima 
provoca na amostra) os níveis de glicose do material através do comprimento de onda da cor que as amostras 
possuem. Esses valores posteriormente são comparados com os valores padrão e são peça chave para 
detectar hipoglicemia ou hiperglicemia, por exemplo. 
 
7. REFERÊNCIAS 
 
LEHNINGER, T. M., NELSON, D. L. & COX, M. M. Princípios de Bioquímica. 6ª Edição, 2014. Ed 
https://kasvi.com.br/espectrofotometria-analise-concentracao-solucoes/ 
https://numeb.furg.br/index.php?option=com_content&view=article&id=42&Itemid=40 
https://labtest.com.br/wpcontent/uploads/2016/09/Ref_133_Edi%C3%A7%C3%A3oDezembro2011_Ref05
0219_Port.pdf 
https://kasvi.com.br/espectrofotometria-analise-concentracao-solucoes/