Para responder à sua pergunta sobre as etapas da técnica de PCR em tempo real (qPCR), vamos analisar as alternativas: a) desnaturação, anelamento, extensão e aplicação do produto da reação de PCR em tempo real no gel de agarose. - Esta opção menciona a aplicação do produto em gel, que não é uma etapa do qPCR, pois o qPCR é realizado em tempo real e não requer a eletroforese em gel. b) anelamento, extensão e aplicação do produto da reação de PCR em tempo real no gel de agarose. - Novamente, menciona a aplicação em gel, o que não é parte do qPCR. c) Anelamento e extensão. - Esta opção está incompleta, pois não menciona a desnaturação, que é uma etapa essencial do PCR. d) Desnaturação, anelamento e extensão. - Esta opção inclui todas as etapas principais do PCR: desnaturação, anelamento e extensão, que são fundamentais para a amplificação do DNA. e) Extensão e aplicação do produto da reação de PCR em tempo real no gel de agarose. - Esta opção também está incompleta e menciona a aplicação em gel, que não é parte do qPCR. A alternativa correta, que contempla todas as etapas necessárias do PCR em tempo real, é: d) Desnaturação, anelamento e extensão.