Manipulação de oócitos inclusos em folículos ovarianos pré ovulatórios

Prévia do material em texto

HORMÔNIO: 
Fatores de crescimento. 
Função endócrina do ovário: produzir 
hormônios e fatores de crescimento. Os 
principais hormônios produzidos são 
estrógenos e progesterona. 
Função gametogênica do ovário: é a 
ovulação. Produzir um oócito maduro por 
cada ciclo. Ou seja, oócitos prontos para 
serem fecundados. 
O ovário possui duas regiões: medular e 
cortical. Na maioria das espécies a parte 
medular tem vasos sanguíneos, nervos, que 
servem para nutrir, sustentar e ajudar a 
função ovariana. No córtex, que é a parte 
mais externa, possui os folículos ovarianos 
e corpos lúteos. Existem duas exceções: a 
égua e a raposa. Os folículos estão 
internamente e no córtex estarão os 
vasos e nervos. 
FOLÍCULO OVARIANO: 
 
Unidade morfológica e funcional formado 
pelo oócito + as células que o circundam. O 
oócito é circundado por camadas de células. 
As células da granulosa (CG) e células da 
teca. 
Sua função é manter a sobrevivência, 
crescimento e maturação. As células 
atuam jogando substancias que servem 
para maturar, crescer e proteger o 
material genético. 
CATEGORIAS FOLICULARES: 
 
O primeiro folículo que formado no ovário 
é o folículo primordial que possui um oócito 
circundado por uma única cada de células 
de formato pavimentoso. 
 
 
 
O folículo vai se tornar um folículo de 
transição, que é um oócito circundado por 
células somáticas pavimentosas e pelo 
menos 3 no formato cúbico. 
 
 
 
Os folículos vão crescendo e evoluindo, 
quando uma camada de células 
modificarem de formato completamente, 
até se tornarem cúbicas, ele passa a ser 
um folículo primário. 
 
 
 
O folículo secundário é um oócito 
circundado por, pelo menos duas camadas 
completas de células cúbicas. A partir do 
folículo secundário ele possui células da 
teca, que servem para produzir estrógeno, 
ou seja: esteredogênese. 
 
 
 
 
A grande formação de liquido faz 
necessario a formação de uma cavidade, 
chamada cavidade antral. Quando essa 
cavidade é formada, o folículo passa a ser 
secundário. 
 
 Antro 
 
 
Todos folículos antes desse são conhecidos 
como folículos pré antrais. A MOIFOPA 
trabalha com óvulos imaturos, ou seja: 
primordial, transição e secundário. 
A célula continua a crescer. 
O antro vai crescendo e empurrando o 
oócito para um polo dos com forças 
hidrostáticas. As células que envolvem o 
oócito são chamadas de corona radiata. 
Este é o oócito maduro. 
A maturação em vitro é a colheita de 
folículos antrais (2 e 3) e inserir substancias 
para o tornar maduro. 
As fêmeas nascem com uma quantidade 
exata de folículos, e eles vão diminuindo a 
cada ciclo estral. Por isso, a menopausa 
representa o final do “estoque” de folículos. 
PRINCIPAL OBJETIVO DA MOIFOPA: 
recuperar os folículos pré antrais antes 
que eles entrem em atresia, e destiná-los a 
sistemas de cultivo que permitam a 
sobrevivência, crescimento, maturação e 
utilização dos folículos. 
ETAPAS DA MOIFOPA: 
Manipulação de oócitos inclusos em 
folículos ovarianos pré-antrais. 
 Isolamento mecânicos e enzimáticos 
 Preservação (resfriamento) 
ISOLAMENTO: 
 Mecânico: se utiliza um cortador de 
tecidos. O ovário vai ser cortados e 
processado por filtros para separar os 
folículos para avaliação microscopiana. 
Também existe a microdissecção, onde 
só se pode ser enxergado folículos 
secundários, porque é o único visível no 
microscópio. 
 Enzimáticos: colágenase e hialuronidase. 
São mais rápidos. 
REFRIGERAÇÃO: 
É um pré-requisito para outras etapas. 
Serve para transporte de ovários e tempo 
para manipulação e evitar a degeneração 
ovariana. 4C. Primeiro deve lavar os oócitos 
colocar no meio MEM ou soro fisiológico. 
CRIOPRESERVAÇÃO DE TECIDO OVARIANO: 
Conservação de material biológico a 
temperaturas ultra baixas, geralmente em 
nitrogênio líquido a -196C, ou em sua fase de 
vapor a -150C. 
IMPORTÂNCIA DA CRIOPRESERVAÇÃO NA 
MEDICINA HUMANA: 
 Mulheres que sofrem de menopausa 
prematura 
 Tratamentos de câncer degeneram os 
folículos 
 FOPA (tecidos ovarianos) 
 Transplante 
 Restauração da fertilidade 
IMPORTÂNCIA DA CRIOPRESERVAÇÃO NA 
MEDICINA VETERINÁRIA: 
 Preservação de material genético para 
raças em extinção ou de maior valor 
genético 
 FOPA tecido ovariano 
 Biotécnicas da reprodução animal (FIV e 
clonagem) 
 Multiplicação de animais 
MÉTODOS DE CRIOPRESERVAÇÃO: 
Vitrificação: congelação muito rápida que 
impede a formação de gelo intracelular. 
 Congelação muito rápida 2500C 
 Solução amorfa – estado vítreo 
 Pode acontecer rompimento da célula 
quando for reaquecer 
 Maior viscosidade 
 Menor custo 
In situ: cultivar ovário inteiro ou parte do 
ovário e adicionar substancias. 
Pode ser cultivado os folículos 
isoladamente em placa. Uma das regiões 
dele irá achatar, então o ideal é que seja em 
ágar. A vantagem é que o folículo pode ser 
acompanhado individualmente.